猪链球菌2型江苏分离株溶血素基因检测及序列分析

根据猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)溶血素基因(sly)设计和合成了一对可扩增其完整阅读 框的引物,对HA9801等6株猪链球菌2型江苏分离株,1株德国分离株SS2-D及猪链球菌C群参考株 ATCC35246的核酸进行PCR扩增,结果显示HA9801等6株江苏分离株及德国株SS2呈阳性,ATCC35246 呈阴性。HA9801株PCR产物纯化后测序,序列分析表明该DNA片段与猪链球菌2型1933株的sly基因同源 性为99％。

2型猪链球菌天津分离株的鉴定及其遗传特征分析

为了解天津市某猪场引起育肥猪神经症状的病原及其特性和遗传特征,本研究采集8份患病猪脑组织样品经细菌分离、形态学观察、gdh基因和cps2J基因的PCR扩增及序列分析,确定8份样品中的分离株均为同一2型猪链球菌(SS2),命名为TJS75。测定其生长曲线、并按照文献方法进行溶血性试验、黏附/侵入试验和对小鼠的致病性试验,分析该SS2分离株特性。结果显示,TJS75菌株经TSB培养6 h~15 h可达对数生长期,对绵羊血红细胞(RBC)具有崩解效果,可黏附并侵入PK-15细胞(黏附率和侵袭率分别为5.16%和7.90%),且感染TJS75株的BALB/c小鼠出现不同程度的行动迟缓、呼吸急促、精神萎靡和神经症状等,经测定其LD50为2.15×107cfu/mL。进一步采用高通量测序,并预测其毒力基因,分析该菌株的遗传特征,结果显示,TJS75菌株基因组全长2368195 bp,GC含量40.88%,含有2299个编码基因,其中有1822、1830和1077个基因分别注释于GO、COG和KEGG数据库,携带的16S r RNA基因序列与国内分离的SS强毒株98HAH33和05ZYH33的亲缘性较近,毒力基因的预测结果显示该菌株携带499种毒力相关基因(编码173种毒力相关因子),依据功能分类,这些毒力基因参与SS2的黏附和侵袭、溶血、促进铁转运、自溶酶的合成、降解胶原酶、唾液酸的合成等。本研究首次分离到携带MRP毒力因子的ST25型SS2,为深入开展SS2 TJS75株的致病机制研究提供了科学依据。

浙江省首例14型猪链球菌人源分离株鉴定及分子特征分析

目的对浙江省首例14型猪链球菌菌株进行综合鉴定与分子分型特征研究。方法对目标菌株进行镜检、生化、血清学玻片凝集试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定,同时利用聚合酶链(PCR)技术检测该菌株链球菌属(tuf)、猪链球菌种(16S rRNA)、猪链球菌血清型基因以及毒力基因,另采用脉冲场凝胶电泳技术(pulsed-fieId gel electrophoresis,PFGE)、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)以及最小核心基因组群(minimum core genome groups,MCG群)方法分别对菌株进行分子分型检测。结果传统细菌学方法和质谱鉴定技术以及核酸检测均将这株人源分离株鉴定为14型猪链球菌;25种毒力基因检测,除salKR与89K PAI基因检测为阴性,其它均为阳性;分子分型检测该菌株为高致病性ST1及MCG Group1型,PFGE检测结果表明此菌株同浙江省主要流行毒力株在同一主分支,相似性达94.95%。结论本次检出14型人源猪链球菌强毒力株,属高致病基因型ST1/MCG Group1型菌株,属浙江省首次报道,今后应密切关注省内该型别菌株流行趋势。

四川某猪场猪链球菌2型菌株的分离鉴定与耐药性分析

本研究采集某发病猪场的环境及病猪样品,通过细菌分离纯化、PCR鉴定为猪链球菌2型致病菌株,随后用纸片扩散法测定该菌株的耐药性,结果显示对青霉素类、头孢类(头孢噻呋)、喹诺酮类、糖肽类、氨基糖苷类、多肽类最为敏感,对头孢类(头孢西丁)、氯霉素类较为敏感,对磺胺类、碳青霉烯类(亚胺培南)、四环素类、大环内酯类耐药。选取敏感的10种药物进行最小抑菌浓度(MIC)值测定,结果显示:阿莫西林的MIC为8μg/mL,苯唑西林、头孢噻呋、氧氟沙星、万古霉素和庆大霉素的MIC为4μg/mL,恩诺沙星和恩拉霉素的MIC为1μg/mL。

猪链球菌2型四川株与江苏株对SPF猪的致病性

以SPF巴马小型猪为实验动物,分别用猪链球菌2型四川分离株以及江苏分离株进行攻击,通过临床症状观察、病理解剖检查、病原分离鉴定以及病原组织分布检测等,比较二者的致病性。结果表明:四川株攻击猪40 h后出现神经症状,关节肿大和全身出血等不很明显;病程为6￣7 d,而江苏株攻毒后18 h即出现神经症状,20 h即有死亡者,关节肿大和全身出血明显。死后病理解剖观察可见,四川株猪主要表现为肺淤血、肿大以及脑水肿,而未见败血症的变化,全身性出血不明显;而江苏株猪除了肺淤血、肿大以及脑水肿外,出现明显的败血症变化。均分离到与攻击相同的细菌,细菌溶血特性不明显,革兰氏阳性染色典型。细菌在组织中分布不同菌株也有一定的差异。

4株广东地区2型猪链球菌耐药性及致病性研究

【目的】了解广东部分地区猪场疑似猪链球菌病的病原血清型、毒力基因特点、耐药性以及致病性。【方法】对4个疑似流行猪链球菌的猪场的送检病料进行细菌分离培养,采用形态学观察、革兰氏染色镜检、16S rRNA测序以及生化试验鉴定分离菌株,通过PCR试验对分离株进行血清型鉴定、毒力基因检测,采用药敏纸片扩散法对分离菌株进行药敏试验,通过活菌计数法绘制生长曲线,通过人工感染昆明小鼠评价各分离菌对小鼠的致病性。【结果】分离株在10%成牛血清的TSA培养基上长出圆形、灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐的小菌落。镜检出革兰氏阳性球菌,短链状排列,生化特性与猪链球菌相符,测序分析后确定为猪链球菌。血清型鉴定结果显示,4株分离菌均为2型猪链球菌,其中有3株的表型为mrp^(+)/epf^(+)/orf2^(+)/gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/gdh^(+),有1株表型为mrp^(-)/epf^(-)/orf2^(-)/gapdh^(+)/sly^(+)/fbps^(+)/gdh^(+),共2种毒力基因表型。药敏结果显示,4株分离菌对红霉素、克林霉素、四环素、复方新诺明耐药,对青霉素、氨苄西林敏感。分离菌在4~6 h期间达到生长对数期,培养6 h到达活菌峰值。试验组小鼠在感染猪链球菌后出现精神沉郁、抱团、呼吸急促、尾部发青等症状,随后出现死亡,剖检有不同程度的病理变化。4株菌株半数致死量分别为4.47×10^(7)、3.57×10^(7)、5.77×10^(7)、1.22×108CFU。【结论】本研究成功分离鉴定出4株2型猪链球菌,4株分离株具有多重耐药性且具有较强的致病力。本研究结果可为广东地区猪链球菌的防控以及疫苗候选株的筛选提供理论参考。

新疆昌吉市2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在确定引起新疆昌吉市某规模化猪场仔猪死亡的病因,采集病死猪的脾脏、肝脏、心脏、肺脏、肾脏和淋巴结等组织样进行细菌病原分离鉴定。分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色镜检、生化试验、菌种鉴定及测序分析、血清型鉴定和药敏试验。结果显示,分离株在TSA营养琼脂上生长良好,镜检可见革兰氏阳性球菌,呈典型链状排列;生化特性与猪链球菌相符;PCR扩增得到大小为328 bp和689 bp的目的条带,分离株与猪链球菌同源性为100%,在系统进化树上与2型猪链球菌处于同一分支,为2型猪链球菌;分离株对恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠、氟苯尼考6种药物敏感,对磺胺嘧啶钠耐药。研究表明,该猪场仔猪感染了猪链球菌,恩诺沙星、环丙沙星等药物可用于临床治疗。

猪链球菌2型福建分离株的主要毒力基因分析

目的为了解福建地区猪链球菌2型菌株毒力因子分布情况。方法选取谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(ef)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fbps)及毒力相关序列orf2等7个猪链球菌2型主要毒力基因,分别设计了7对引物,采用PCR方法,对本室分离保存的猪链球菌2型福建分离株的毒力基因进行分析。结果从屠宰生猪体内分离的4个猪链球菌2型菌株和SS2PFJ07株基因型为gdh+/cps2J+/mrp+/ef-/sly-/fb-ps+/orf2+,另1株从生猪体内分离的分离菌株基因型为gdh+/cps2J+/mrp+/ef+/sly+/fbps+/orf2+。结论福建地区生猪中猪链球菌2型至少有两种毒力基因型。

猪链球菌2型上海分离株的病原特性鉴定

1997年底上海地区分离到一株猪链球菌 2型 ,结合培养特性、生化特性、血清定型及动物试验等对其进行了鉴定。其形态、染色及培养基本符合链球菌的特点 ,具有 β溶血。生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A_G乳胶分型诊断液检测分离株 ,不在其检测范围。但能凝集猪链球菌 2型标准阳性血清。人工接种 4日龄乳鼠和猪有致病性。本试验对上海地区首次分离的猪链球菌 2型菌株进行了病原特性鉴定 ,证实猪链球菌 2型在上海存在 ,为今后防治猪链球菌病提供了可靠的科学依据。

3个猪链球菌2型四川分离株4个毒力因子基因序列测定与分析

目的设计了特异性引物对3个致病性猪链球菌2型(Ss2)四川分离株4个主要毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2分别进行了扩增,序列测定与分析结果表明3个Ss2四川分离株均存在4个毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2,其核苷酸序列与1998年江苏分离株9801及国外参考菌株的同源性均大于99.5%,提示3个四川分离菌株与1998年江苏流行的高毒力菌株可能具有共同的来源。

猪链球菌2型福建株的分离鉴定

从临床表现为败血症的濒死病猪肝脏、肺脏、淋巴结中分离到一株链球菌,进行形态学、生化特性、小白鼠感染试验及PCR鉴定和CPS2 J序列测定.结果表明:该分离菌的形态、培养和生化特性基本符合链球菌的特点;人工感染试验显示,小白鼠腹腔接种0.2 mL分离菌培养物不发病,但接种1 mL能在48 h内致小白鼠死亡,并能从脏器中分离到接种菌;分离菌的PCR扩增产物与猪链球菌2型阳性参考菌株JA070109大小一致、长度为675 bp的特异性条带,其PCR产物的核苷酸序列与GeneBank上公布的猪链球菌2型不同菌株的同源性高达98%-100%.可见,该分离菌为猪链球菌2型,并首次证实福建存在猪链球菌2型.

猪链球菌2型JX分离株的生物学特性

从临床表现为脑膜炎、关节炎及败血症的发病猪分离到 2株细菌 ,分别命名为 JX0 2和 JX0 3,经鉴定其形态、染色及培养特性均符合链球菌的特点 ,具α或β溶血 ,生化试验结果不稳定。用猪链球菌 2型、1型和 9型抗血清进行凝集试验 ,结果 2株菌均能与猪链球 2型抗血清凝集 ,其中 1株菌对小鼠和家兔均有致病性 ,另 1株菌只能致死家兔。PCR均能扩增 2株菌的主要毒力因子基因。表明发病猪的病原不同于以往的 C群链球菌 ,不是马链球菌兽疫亚种 ,而是属于 R群的猪链球菌。

猪链球菌2型安徽株的分离鉴定与药物敏感试验

2005年8月,安徽某地出现1例猪急性死亡病例,通过对猪病料进行细菌分离、培养以及生化和分子生物学鉴定,确诊为猪链球菌2型感染,分离菌株被命名为SSah0501。动物致病性试验表明,该菌株对小鼠有致病性,但无致死性。药敏试验显示SSah0501对青霉素类药物及头孢类药物敏感,对氨基糖苷类和四环素类药物高度耐药。

猪链球菌1/2及2型分离鉴定与耐药分析

为确诊贵州省某猪场猪的死亡原因,分析病原特征并提供用药指导。根据临床症状,采用相关病原特异性引物进行PCR扩增检测病死猪肺组织中的病原,针对阳性病原进行分离纯化、形态学、生化试验、16SrRNA序列分析、血清型和PCR-RFLP鉴定,通过药敏试验检测病原耐药性。在肺组织中均扩增出链球菌的特异性片段,形态学特性、生化特征、16S rRNA序列分析结果表明分离菌株均为猪链球菌,将其分别命名为GYSS73和GYSS74;通过分子血清定型和PCR-RFLP鉴定确定GYSS73为猪链球菌1/2型、GYSS74为猪链球菌2型。药敏试验结果为GYSS73的高敏药物是阿莫西林和头孢拉定;GYSS74的高敏药物是阿莫西林及青霉素。研究表明,猪发病死亡的原因是分别感染了猪链球菌1/2型和2型,可用高敏药物阿莫西林进行治疗。

一株临床2型猪链球菌的分离鉴定及生物学特性分析

为了确定2013年9月至2013年11月江西省某规模猪场仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其毒力特性,本试验将病猪剖杀,采取脑脊液和关节液在血平板上划线进行细菌分离培养,将分离到的菌株进行生化试验、16SrDNA序列分析及基因血清分型鉴定,进一步对其进行毒力基因(gdh、orf2、fbps、sly、epf、mrp)检测和药敏性测定。结果显示,分离菌株在血平板上形成灰色"半透明"边缘整齐的有草绿色狭窄溶血环的光滑型圆形细小菌落,镜检呈散在排列的革兰氏阳性短链球菌,结合生化试验、16SrDNA序列分析及基因血清型分型,确定其病原为2型猪链球菌,命名为JMS2。毒力因子基因检测结果显示,JMS2主要毒力因子分布为gdh+/orf2+/fbps+/sly-/epf-/mrp-,预示JMS2可能不是强毒力菌株。药敏试验结果显示,JMS2对β-内酰胺类抗生素如青霉素、阿莫西林等敏感,但对阿奇霉素、复方新诺明等细菌蛋白质合成抑制剂类抗生素耐药。本研究对临床防控猪链球菌病具有参考意义。

猪链球菌2型临床分离株的分离鉴定和生物学特性分析

为了确定2019年江苏省某规模化猪场仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其毒力特性,进行了细菌分离培养、生化试验、PCR分型鉴定以及毒力基因检测和药敏性测定。结果表明:分离株在血平板上形成浅灰色、半透明的有α溶血环的圆形细小菌落,镜检呈散在排列的革兰氏阳性短链球菌,结合生化试验、基因分型,确定该病原菌为猪链球菌2型,命名为HA21。毒力基因检测结果显示,HA21主要毒力基因分布为sly+/epf+/mrp+,提示HA21为强毒株。药敏试验结果显示,HA21对β-内酰胺类抗生素如青霉素、阿莫西林等敏感,但对阿奇霉素、卡那霉素等细菌蛋白质合成抑制剂类抗生素耐药。

天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解天津地区2型猪链球菌的流行及耐药情况,本研究收集该地区部分规模化养猪场疑似猪链球菌病病料317份,通过病原分离培养、染色特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果从样品中分离鉴定出11株2型猪链球菌。对小鼠的致病力试验结果显示,应用0.5×10~8 CFU/mL的细菌攻击小鼠,11株2型猪链球菌分离株中有6株具有致死性,其中1株致死率较强,5株致死率较弱。药敏试验结果表明,11株分离菌对9种临床常见药物均表现出很强的耐药性,其中对阿米卡星、四环素和强力霉素耐药性最强,耐药率达到100.00%;且所有分离株均呈多重耐药,其中4个分离株为9重耐药,占36.36%(4/11)。本试验结果表明,天津地区存在2型猪链球菌感染情况,且对多种抗菌药均产生了耐药性,应引起养殖户的高度重视,在防制猪链球菌病时,应有针对性地合理、科学、规范用药和交替用药。

猪链球菌2型二元信号转导系统ciaR基因敲除突变株的构建及生物学功能研究

目的构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33二元信号转导系统1094HK/1095RR的反应调节因子ciaR基因敲除突变株(ΔciaR),并研究ΔciaR的生物学功能。方法和结果基于同源重组原理筛选ciaR基因缺失株,PCR分析及Southern杂交结果均显示突变株构建成功。通过检测OD600值绘制生长曲线,发现突变株在37℃和40℃其OD600值均明显低于野生株;与40mmol/L过氧化氢共作用15min后涂板计数,突变株存活率明显低于野生株;不同pH值的培养基中培养,发现在pH5.0的酸性环境中突变株OD600值明显低于野生株;野生株与突变株对BALB/c小鼠攻毒(约1×109CFU/只),各10只,两组16h后均死亡9只。结论成功获得05ZYH33ciaR基因敲除突变株;发现删除ciaR基因会导致细菌的生长繁殖能力减弱,抗氧化应激能力下降,在酸性环境生长存活能力下降;但对小鼠毒力无差别。

从正常屠宰猪扁桃体中分离到致病性猪链球菌2型

目的从江苏省某屠宰场采集的40份屠宰猪的扁桃体中分离到一株细菌,通过玻片凝集试验、培养特性、菌体形态、菌落形态、染色特性、生化试验、PCR检测试验,确定为猪链球菌2型,编码为HA0610。进一步研究发现,该菌株含有已知的8种主要毒力因子基因,动物试验显示对猪和兔均有较强的致病性。结果表明,在正常猪扁桃体中可携带对猪有高度致病性的猪链球菌2型。