猪骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体的制备及鉴定

为制备猪骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体,利用生物化学方法提取猪骨骼肌肌钙蛋白并免疫小鼠,通过细胞融合制备稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采取体内诱生腹水法批量制备单克隆抗体,并对其免疫学特征进行鉴定。结果表明:最终筛选获得1株杂交瘤细胞株,将其命名为2E8,其分泌的抗体为免疫球蛋白G2a亚型,效价为1:4,1×10^(5),亲和力常数为5.14×10^(6)L/mol;采用间接酶联免疫吸附测定检测单克隆抗体2E8特异性,结果表明,单克隆抗体2E8与鸡、鸭检测原的交叉反应率均为25%;与牛、羊检测原的交叉反应率分别为1.7%、6.3%;免疫印迹检测结果显示,单克隆抗体2E8与猪检测原反应条带清晰,与羊、鸡、鸭检测原反应条带轻微,与牛检测原几乎不发生反应。