猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建

为构建猪C型凝集素受体8A（C-type lectin domain family 8，member A，CLEC8A）的单域抗体酵母展示文库，本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列。通过SMART软件分析，鉴定出该受体胞外区基因序列，并插入原核表达载体pET28a（＋），在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白。表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼，间接ELISA监测抗体滴度，于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞。提取总RNA，反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼WfH基因。纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞（EBY100），经细胞内同源重组，成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库。经菌落计数及测序鉴定结果表明，文库大小约为1．6×10 7，文库重组率达90％，文库多样性丰富。流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体，为后续文库筛选奠定基础。