猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达

根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。

猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达

皮肤坏死毒素(Dermonecrotictoxin,DNT)是产毒素多杀性巴氏杆菌(ToxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)的主要毒力因子和保护性抗原。以猪源D型T+Pm的基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到了编码DNT的toxA全基因编码序列,共4019bp。将其克隆到pMD18-T载体并测序,结果表明,toxA基因序列与GenBank已报道的5个toxA基因序列的同源性达99.8%以上。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG的GST基因下游,转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达,获得大小约173000的融合蛋白。Westernblot结果表明,该融合蛋白具有良好的反应原性。动物试验表明,该重组蛋白可以诱导小鼠产生高水平的抗体,并可抵抗致死剂量的天然DNT毒素攻击。

猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素基因的原核表达

参照GenBank收录的产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列(AF240778),设计一对引物,从猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌中扩增出toxA编码区3 858 bp的片段,将其克隆至原核表达载体PET-32a,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行融合表达多杀性巴氏杆菌毒素。SDS-PAGE和Western blot分析证实,该表达产物以包涵体形式存在,大小约175 ku。动物试验结果表明,重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性。通过间接ELISA方法检测抗毒素的猪阳性血清,表达重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性,为多杀性巴氏杆菌毒素进一步应用奠定了基础。

猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达研究

多杀性巴氏杆菌可以直接引起猪肺疫、禽霍乱、牛出血性败血症、猪萎缩性鼻炎等病症,对养殖业影响非常大。据调查研究显示,皮肤坏死外毒素是产毒素多杀性巴氏杆菌的重要因此和保护性抗原。基于此,重点研究猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因克隆与表达。

产毒素多杀巴氏杆菌在猪萎缩性鼻炎病因中的作用研究——支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀巴氏杆菌对仔猪的实验感染

本试验用约8万个以上支气管败血波氏杆菌Ⅰ相活菌滴鼻感染1周龄仔猪,产生了严重的鼻甲骨萎缩,但不发展成持续性临床型萎缩性鼻炎。相反,仔猪先用致中等度鼻腔病变(约6万个活菌)甚至肉眼不明显病变(约5千个活菌)以下的支气管败血波氏杆菌滴鼻感染后,再接种产毒素多杀巴氏杆菌,则产生严重至完全的鼻甲骨萎缩,并有临床型病例出现,与自然感染发病相同,实验结果证实,产毒素多杀巴氏杆菌可以起到加剧支气管败血波氏杆菌引起的猪萎缩性鼻炎病演过程的作用。结论认为,这两种细菌在猪鼻腔的混合感染是持续性临床型萎缩性鼻炎的病因。

自萎缩性鼻炎病猪鼻腔分离的产毒素多杀巴氏杆菌培养滤液的毒性测定

在萎缩性鼻炎病猪鼻腔分离的产毒素多杀巴氏杆菌培养滤过液中豚鼠皮肤坏死毒素的含量随培养时间的延长而增加,15个我国分离株滤过液含毒量一般在8GPST 单位/0.1ml 以上,最强的菌株达到32GPST 单位/0,1ml;强毒性菌株滤过液在1∶32稀释时,经腹腔注射能使小鼠全部致死;滤过液肌肉和皮下注射断奶仔猪,均可致轻度至严重的鼻甲骨萎缩,滴鼻则不引起肉眼可见的鼻甲骨病变。

1株藏猪源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其生物学特性

为了解西藏地区病死藏猪源多杀性巴氏杆菌荚膜血清型、毒力基因分布情况,对无菌采集的60份病死猪样品(肺和扁桃体各30份)进行细菌分离纯化后,对菌株进行荚膜分型及常见毒力基因的鉴定。结果表明,从藏猪肺病料中成功获得了1株与伊朗家禽多杀性巴氏杆菌(AY225343)亲缘关系较近的D型猪源多杀性巴氏杆菌,分离率达3.33%(1/30),但没有在扁桃体中分离到该菌株。经鉴定,该菌株携带16种毒力基因,且对四环素、多西环素、氨苄西林、阿莫西林具有耐药性,对卡那霉素、链霉素、新霉素、大观霉素、环丙沙星、诺氟沙星和恩诺沙星较敏感。本研究结果为西藏猪源多杀性巴氏杆菌病原学和流行病学调查提供了参考依据。

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

用PCR方法配合生化鉴定,从有肺炎症状猪的肺脏及进行性萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis,PAR)症状猪的鼻拭子中分离出66 株多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, Pm)。然后做了药敏试验,并用PCR方法对这66株Pm进行分型及毒素基因的检测, 用豚鼠皮肤坏死试验及小鼠致死试验对产毒素多杀性巴氏杆菌(Toxigenic Pasteurella multocida, T+Pm)进一步鉴定。结果显示PCR鉴定与生化鉴定Pm结果完全一致;PCR分型表明有46株为D型Pm,18株为A型Pm,1株为B型Pm,1株无法定型;有8株用PCR检测为T+ Pm;豚鼠皮肤坏死试验及小鼠致死试验对这8株T+Pm的进一步鉴定也表明均为产毒素菌株。所鉴定的8 株T+ Pm都为D型,都分离于有严重PAR症状的猪。

产毒多杀性巴氏杆菌研究进展

产毒多杀性巴氏杆菌 (T+ Pm)是引起猪传染性萎缩性鼻炎的主要病原菌。对 T+ Pm的检出及高效疫苗的研制是根除猪传染性萎缩性鼻炎的关键。产毒多杀性巴氏杆菌毒素是一种皮肤坏死毒素 ,也是一种活性很强的有丝分裂原 ,单独就可引起细胞 DNA的合成及分裂。基于此毒素的特性 ,已经建立了诸如豚鼠皮肤坏死实验、小鼠致死实验、细胞促生长实验、胎牛肺细胞毒性实验、EL ISA及 PCR等方法来检测产毒多杀性巴氏杆菌。随着人们对产毒多杀性巴氏杆菌毒素活性的研究 ,猪传染性萎缩性鼻炎的疫苗也逐渐向更安全、有效的毒素疫苗发展。文章主要对 T+ Pm的检测方法。

猪传染性萎缩性鼻炎的8种疗法的作用分析

一、猪传染性萎缩性鼻炎概述1.病原——由支气管败血波氏杆菌(主要是C型)和产毒素多杀性巴氏杆菌(D型)联合感染。2.流行病学——本病呈散发型一年四季发生,但以秋冬季常见。2-5月齡猪不分品种,不分性别而发生,大猪感染后一般不表现病状,多为带菌猪;3.传播途径一病猪与健康猪接触及病猪打喷嚏和咳嚏排的飞沫传播;带菌病猪,携带病菌的工作人员及其它动物;猪饲喂劣质饲料;猪舍环境长期潮湿等。

猪萎缩性鼻炎灭活疫苗免疫效果试验

猪萎缩性鼻炎（AR）是由支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀性巴氏杆菌共同作用所引起的一种上呼吸道传染病,以泪斑、喷嚏、鼻甲骨萎缩或消失、鼻骨变形扭曲等为特征,并造成猪只生长缓慢、饲料转化率明显下降、继发感染增多,从而造成相当大的经济损失。该病在世界各地广为流行,在我国分布亦相当广泛。

猪萎缩性鼻炎的研究进展

猪萎缩性鼻炎(Porcine atrophic rhinitis,PAR)是猪的一种重要的呼吸系统疾病,是影响猪肉生产的一个重要原因之一。本文介绍了PAR的致病因素,综述了近年来流行病学、临床症状及临床诊断的研究现状,并对PAR的防治做了展望。

猪传染性萎缩性鼻炎的诊断与防治

猪传染性萎缩性鼻炎（AR）是由支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀性巴氏杆菌引起猪的慢性接触性呼吸道传染病，其特征为鼻炎，颜面部变形，鼻甲骨尤其是鼻甲骨下卷曲发生萎缩和生长迟缓。该病于1830年最早发现在德国，后来在美国、英国和其他的养猪国家也相继出现。我国于1964年引入种猪时将AR带入境内，目前在许多地方有不同程度的发生和流行，给养猪业造成巨大经济损失。

猪萎缩性鼻炎的防治对策

萎缩性鼻炎是猪的一种慢性接触性传染病,病原是支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌。该病的主要特征为慢性鼻炎、颜面部变形和鼻甲骨萎缩。仔猪感染本病后,除引起鼻甲骨甚至鼻腔变形、萎缩或消失外,还可引起全身钙代谢障碍,致使仔猪发育迟缓,饲料利用率降低,有时伴发急、慢性支气管炎,导致仔猪死亡。文章概述了猪萎缩性鼻炎的发病情况、诊断方法及防治对策。

2月龄猪群发生传染性萎缩性鼻炎的诊治

猪传染性萎缩性鼻炎是由支气管败血波氏杆菌（主要是D型）和产毒素多杀性巴氏杆菌（C型）引起的猪呼吸道慢性接触性传染病。通过该场发病季节和日龄来看，本病以秋冬季节多发，以6～8周龄的幼猪易发。

猪传染性萎缩性鼻炎的诊治

猪传染性萎缩性鼻炎（AR）是由产毒素多杀性巴氏杆菌（Pm，主要为D型）和支气管败血波氏杆菌（Bb）I相菌引起的一种慢性呼吸道传染病。其特征为颜面部变形，鼻甲骨尤其是鼻甲骨下卷曲部分发生萎缩和生长迟缓。临床症状表现为打喷嚏、流鼻涕、颜面变形、鼻部歪斜和生长停滞。常发生于2-5月龄的猪，呈散发。

猪传染性萎缩性鼻炎的综合诊断

猪传染性萎缩性鼻炎（AR）是由支气管败血波氏杆菌或/和产毒素多杀性巴氏杆菌引起猪的一种慢性呼吸道传染病。其特征为鼻炎,颜面部变形,鼻甲骨尤其是鼻甲骨下卷曲发生萎缩和生长迟缓。临诊症状表现为打喷嚏、流鼻血、颜面变形、鼻部歪斜和生长迟滞,猪的饲料转化率降低,严重的可降低15%,日增重下降3％（轻度感染）～17％（重度感染），上市延迟30d，给集约化养猪业造成巨大的经济损失。

猪传染性萎缩性鼻炎病原的研究近况

猪传染性萎缩性鼻炎(AR)是猪的一种慢性接触性广泛流行的传染病。其特征性的病变为鼻甲骨萎缩,严重时脸部变形,鼻腔出血。在150多年前,人们就知道以鼻甲骨萎缩为特征的猪病。1830年Froangue首先在德国发现本病。美国Doyle等(1944),英国Anon等(1954)先后报道了本病。对其病原就讨论丁一个多世纪。尤其近十几年来的研究结果,认为支气管败血波氏杆菌(Bb)和产毒素多杀性巴氏杆菌(DNT^+Pm)是原发性的或主要的感染因子。但也与环境因素、管理和饲养条件有密切关系。现将情况简述于下。

猪传染性萎缩性鼻炎及防治措施

猪传染性萎缩性鼻炎，又称慢性萎缩性鼻炎或萎缩性鼻炎，是由产毒素多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌引起的猪的一种慢性接触性呼吸道传染病。它以鼻炎、鼻中隔扭曲、鼻甲骨萎缩和病猪生长迟缓为特征，临床表现为打喷嚏、鼻塞、流鼻涕、鼻出血、额面部变形或歪斜，常见于2—5月龄猪。国内将此病列为二类传染病，是规模养猪常见传染病。一旦感染，可导致猪只生长迟缓、饲料利用率降低、机体抵抗能力下降，诱发各种继发性疾病，增加病死率，给地方养猪业的发展带来极大的危害。