抗猪SIgA单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术,从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,第1次融合率为79.7%,第2次融合率为60.3%。建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体,初检阳性率分别为4.1%、16.8%。经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪SIgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为CA6、5D4。ELISA和Western-blotting证实,所获得的单抗能特异性针对SIgA。CA6、5D4经反复冻存、复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,CA6分泌抗体属IgM、κ型,而5D4分泌抗体属IgG1、κ型。

猪初乳中SIgA纯化及其单抗制备

为制备猪SIgA的特异性单克隆抗体,该研究采用饱和硫酸铵盐析法从猪初乳中提取猪SIgA蛋白,分别经Sephadex G-200凝胶层析、DEAE52纤维柱离子层析及Protein A柱亲合层析纯化。以纯化的猪SIgA蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗猪SIgA的单克隆抗体。结果显示:已获得6株特异的抗猪SIgA的单克隆抗体,分别命名为2D9E6、2D9E9、3E1G2、3E1H5、4H5B7和4H5B10,6株单抗均为IgG1,κ型。将其中1株2D9E6制备腹水,经纯化后ELISA效价可达1∶81 000以上。表明以猪SIgA天然蛋白为免疫原,成功制备了6株高特异性的单克隆抗体,可为猪黏膜免疫研究提供基础材料。