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题名猪c-Myc蛋白多克隆抗体的制备
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作者
田淑婧
陈羽彤
陆春秀
苏春宇
吕其壮
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机构
玉林师范学院生物与制药学院
广西农产资源化学与生物技术重点实验室
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出处
《福建农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第8期894-900,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(31860708)
玉林师范学院大学生创新创业训练计划项目(202210606027)。
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文摘
【目的】克隆猪c-Myc基因CDS序列并构建其原核表达载体,同时纯化c-Myc蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体,为进一步研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Rep蛋白与宿主c-Myc蛋白之间的交互作用奠定基础。【方法】根据猪c-Myc全基因序列(GenBank No.NM_001005154)设计引物,以反转录PCR方法扩增c-Myc基因CDS序列,经Nde I/Xho I双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+);转化至Arctic-Express^(TM)大肠杆菌后诱导表达;表达产物经变性、复性和His-Band Ni+层析柱亲和纯化后免疫新西兰白兔。抗原亲和层析法纯化抗体后,用间接ELISA法测定其效价,用Western blot检测其特异性。【结果】经检测,克隆产生的猪c-Myc基因CDS序列长度为1359 bp,c-Myc-His重组蛋白主要以包涵体形式出现,分子质量约为63 kDa,由此蛋白制备的多抗效价可以达到1∶1093500,并能特异性识别猪c-Myc蛋白和重组蛋白c-Myc-His。【结论】本研究成功制备了猪c-Myc蛋白多克隆抗体,为研究猪c-Myc蛋白功能和其与PCV2 Rep蛋白之间的相互作用奠定了良好基础。
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关键词
猪c-myc蛋白
原核表达与纯化
多克隆抗体
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Keywords
Porcine c-myc protein
prokaryotic expression and purification
polyclonal antibody
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分类号
S852.659.2
[农业科学—基础兽医学]
Q785
[生物学—分子生物学]
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