抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选

试验旨在检测抗病毒药物对猫传染性鼻气管炎病毒的有效性。利用F81细胞建立抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选模型,采用MTT法检测,计算病毒的抑制率。结果显示,阿昔洛韦、利巴韦林、L-赖氨酸、板蓝根和黄芪多糖的半数有效浓度(IC50)分别为9.5、3.3、3.4、161.0和4.7μg/mL,聚肌胞IC_50为6.0mg/mL,治疗指数TI分别为76.8、39.3、2 588.0、4.5、78.7和5.8。结果表明,L-赖氨酸和黄芪多糖为高效抗猫传染性鼻气管炎病毒药物。

猫传染性鼻气管炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

猫传染性鼻气管炎(FIR)病毒是引起猫传染性鼻气管炎的病原,属于猫疱疹病毒1型(FHV-1)。选择FHV-1 gD基因设计1对引物FHV-1F、FHV-1R和探针FHV-1Probe,建立FHV-1实时荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法可以特异地检测出FHV-1的DNA,敏感性达到75fg/μL,反应效率达到107%,R2值为0.9965,Ct值的变异系数低于2%。FHV-1实时荧光定量PCR检测方法敏感性高于普通PCR,特异性好、稳定性好,适用于FHV-1的临床诊断、检测和流行病学调查。利用该方法对上海地区宠物门诊送检的疑似FHV-1感染的样品进行检测,其阳性率达到27.78%,表明上海地区宠物猫FHV-1的发病率处于较高水平。

虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

为研究虎源猫传染性鼻气管炎的快速诊断试剂盒和基因亚单位疫苗,根据Genbank公布的猫传染性鼻气管炎病毒的核酸序列,设计了关于虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因的引物并利用PCR扩增出gD序列,成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pmd-gD。将其利用HindⅢ和XhoⅠ酶切后,产物克隆入原核表达载体pet-32a(+)中,获得重组质粒,命名pet-gD。用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot检测,结果显示目的基因在pET-32a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白相对分子质量约为60kDa,与虎源猫传染性鼻气管炎病毒阳性血清发生特异性反应。以纯化的表达产物作为包被抗原,建立了检测虎源猫传染性鼻气管炎抗体的间接ELISA检测方法。本实验为虎源性猫传染性鼻气管炎诊断试剂盒和基因亚单位疫苗的研究打下了重要的基础。

猫传染性鼻气管炎病毒gB和gD序列比对

【目的】比较猫传染性鼻气管炎病毒gB和gD序列差异。【方法】采用测序方法对传染性鼻气管炎病毒5株分离株和1株疫苗株的gB和gD序列进行序列测定,并比较核苷酸和氨基酸差异。【结果】结果表明分离株gB序列发生了部分变化,并且与疫苗株高度同源,其氨基酸也同样发生部分变化,gD序列没有变化。【结论】猫传染性鼻气管炎病毒分离株gB序列有变化,但与疫苗株同源性一致。

牛传染性鼻气管炎病毒的生物学特性、诊断方法和流行现状

牛传染性鼻气管炎是影响奶牛养殖业健康发展的传染性疾病,不仅导致产奶量下降,还引发脑膜炎、子宫炎、鼻窦炎等并发症,易导致母牛流产或发生死胎。该病在全世界广泛流传,,给奶牛养殖业造成较严重危害和巨大经济损失。本文综合概述牛传染性鼻气管炎病毒的形态结构、理化性质和基因组特征,阐述现有诊断方法,介绍该病流行现状,以期为该病防控和诊断提供理论参考。

牛传染性鼻气管炎的诊断与防控

牛传染性鼻气管炎是由牛传染性鼻气管炎病毒引起的一种接触性牛传染病,对养牛业造成重大经济损失。本文综述了牛传染性鼻气管炎的病原学特征、临床症状、病理变化、诊断方法以及防控措施,旨在为养牛业提供有效的牛传染性鼻气管炎诊断和防控策略。

云南省2022年牛传染性鼻气管炎病原学监测及遗传进化分析

为了解牛传染性鼻气管炎在云南省牛群中的流行、分布情况,保障肉牛产业健康发展,根据2022年云南省主要动物疫病监测流调方案,利用定额抽样的方法分4个季度采集牛口鼻肛棉拭子及脾肺淋巴组织样品共计2 901份,进行qPCR病原学监测并对部分阳性样品gC基因进行遗传进化分析。病原学监测结果表明,2022年云南省检出牛传染性鼻气管炎阳性样品16份,样品阳性率0.55%,场点阳性率2.73%,其中规模场阳性率高于散养户;不同地区牛传染性鼻气管炎感染程度不同,除滇东北地区外均有感染,最高县(区)阳性率为11.11%;牛传染性鼻气管炎病毒在云南省活跃时间较长,除第1季度外,其余时间均监测到阳性牛只。遗传分析结果表明,所选3株阳性毒株间gC基因核苷酸同源性为97.3%~100.0%,且在BoHV-1.1和BoHV-1.2亚型上均有分布,其中YNKM22株属于BoHV-1.1亚型,与BoHV-1.1亚型参考株的gC基因核苷酸同源性为98.2%;YNPE-NG2、YNPE-NG3属于BoHV-1.2亚型,与BoHV-1.2亚型参考株B589的gC基因核苷酸同源性为99.6%。

牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重PCR检测方法的建立与应用

为建立一种针对牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinortracheitis virus,IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的双重PCR检测方法,根据GenBank中IBRV gB(UL27)和BVDV 5’-UTR基因序列分别合成特异性引物,优化反应条件,建立了能够同时检测IBRV和BVDV的双重PCR方法,并对其特异性、敏感性、重复性进行了测试。结果显示:该方法对IBRV、BVDV和IBRV/BVDV可分别扩增出500、198、500/198 bp的特异性目标条带,对牛呼吸道合胞体病毒、牛冠状病毒、牛细小病毒、牛纽布病毒和牛支原体检测结果均为阴性;对混合液中IBRV、BVDV的最低检测限分别为10^(4)和10^(3)copies/μL;3次重复性试验结果一致。采用建立的方法对79份临床可疑牛血清样品进行IBRV、BVDV和IBRV+BVDV检测,阳性率分别为12.66%、17.72%和8.86%,与IBRV和BVDV单重PCR检测结果符合率分别为90.00%和93.33%,两种病原混合感染的阳性符合率为100%。结果表明,本研究建立的IBRV和BVDV双重PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性及重复性,为兽医临床快速诊断IBRV和BVDV提供了一种方便、快捷的分子生物学检测手段。

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)在MDBK细胞上的培养条件优化

本试验旨在探索对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV HL-2株)敏感的细胞种类及其在相应细胞上的培养特性和培养条件。将IBRV HL-2病毒液接种不同传代细胞,结果表明MDBK细胞对IBRV HL-2株敏感,能产生明显的细胞病变。对各种条件进行优化,结果表明接种时间、接毒量、维持液血清含量、培养基种类均对收获的病毒液病毒含量有影响。通过优化,得出最佳培养条件如下:在细胞传代后24 h接种,弃掉营养液,加入含2%血清的MEM作为维持液,接入0.01感染复数(moi)的病毒液,接种后44±2h收获,所获得的病毒液病毒含量最高。

牛传染性鼻气管炎病毒gB ELISA抗体与中和抗体相关性分析

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)是牛传染性鼻气管炎(IBR)的病原体,常引起流产和呼吸道感染等综合征,给养牛业造成了巨大经济损失。gB作为IBRV中最保守的抗原蛋白,是IBRV诊断的重要靶蛋白。为探究牛gB–ELISA抗体水平与VNT效价的相关性,本研究采用阻断ELISA和VNT两种不同的方法对某一牛场50份血清进行IBRV gB ELISA抗体检测和中和抗体测定。gB ELISA结果显示,阳性血清19份,阴性血清31份;中和抗体结果阳性17份,阴性33份。通过统计学相关系数分析,gB抗体阻断率和中和抗体效价值的相关系数为1.0,从而说明IBRV gB ELISA抗体和中和抗体呈较强的正相关。本研究为使用IBRV gB ELISA抗体水平评估牛群中IBRV抗体保护效果提供理论依据。

5种中药体外抗牛传染性鼻气管炎病毒作用方式的研究

为筛选抗牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的中药,本研究选取大青叶、金银花、鱼腥草、连翘和黄连,测定其对MDBK细胞的最大安全浓度,在此基础上通过计算各药物对病毒的抑制率分析上述中药对IBRV的直接杀伤作用、对IBRV黏附细胞的阻断作用和对IBRV在细胞内的抑制作用,确定上述中药对IBRV的有效抑制率;进一步,利用qPCR方法检测中药与IBRV作用后对MDBK细胞中细胞因子转录水平的影响。结果显示,连翘、金银花、黄连、大青叶和鱼腥草对MDBK细胞的最大药物安全浓度分别是3.125 mg/mL、3.125 mg/mL、0.780 mg/mL、1.560 mg/mL和0.780 mg/mL;大青叶对IBRV的直接杀伤作用最好,金银花对IBRV黏附细胞的阻断作用和对细胞内IBRV复制的抑制作用最好;鱼腥草可显著提高细胞中TNF-α、IL-2和IFN-γ的转录水平(P<0.001);大青叶可极显著提高细胞中IL-1β、IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ的转录水平(P<0.001);黄连可极显著提高细胞中IL-1β的转录水平(P<0.001)。结果表明连翘、金银花、黄连、大青叶和鱼腥草均有抗IBRV作用,其抗病毒方式并不相同,本研究为抗IBRV中药的研发奠定基础。

牛传染性鼻气管炎病毒gB基因原核表达与鉴定

为给后续牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)单克隆抗体制备、酶联免疫吸附试验等研究提供基础,采用PCR技术扩增IBRV gB基因主要抗原区序列(312~529 aa位置),构建原核重组表达质粒pET-32a-gB,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,通过对蛋白表达形式确认并对诱导剂(IPTG)浓度、诱导表达时间及诱导温度优化,表达并纯化获得gB重组蛋白,并对重组蛋白进行反应原性鉴定。结果显示:gB重组蛋白主要以包涵体形式表达,IPTG最佳诱导浓度为1 mmol/L,最佳诱导表达时间为6 h,最佳诱导温度为37℃;重组蛋白相对分子质量约60 ku,纯化后蛋白质量浓度为1.02 mg/mL;Western-blot鉴定发现,gB重组蛋白能被IBRV阳性血清特异性识别。结果表明,成功对IBRV gB基因进行体外原核表达与鉴定,为后期开展相应单克隆抗体制备等研究奠定了基础。

猫重组ω干扰素配合不同药物治疗猫传染性鼻气管炎的临床效果观察

为了观察猫ω干扰素配合不同药物治疗猫传染性鼻气管炎(FIR)的临床疗效,本试验将收治的12例猫传染性鼻气管炎患猫作为研究对象,按照随机数字表法将其分为A、B、C三个组,每组4例,A组应用泛昔洛韦口服、更昔洛韦和眼康泰乐菌素滴眼治疗,B组在A组基础上配合猫重组ω干扰素治疗,C组在B组基础上配合阿莫西林克拉维酸钾注射液治疗,直至临床症状完全消失,观察各组治疗效果。结果显示,3种方法均可治疗猫传染性鼻气管炎,C组患猫痊愈时间最短,A组患猫痊愈时间最长,B组和C组痊愈时间分别显著低于A组(P<0.05),但B组和C组之间差异不显著(P>0.05);B组和C组治疗效果比A组更好;C组患猫疾病转归情况优于A组和B组,C组症状明显改善时间早于A组和B组。结果表明,在猫传染性鼻气管炎的治疗中,使用猫重组ω干扰素配合泛昔洛韦、更昔洛韦滴眼液、眼康泰乐菌素滴眼液、阿莫西林克拉维酸钾注射液可以缩短治疗时间,提升治疗效果,临床效果较好,值得推广应用。

牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

为了建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的快速定量检测方法,本研究针对IBRV基因组gD序列保守区域设计特异性扩增引物,扩增的目的片段大小为105 bp,将其克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒标准品pMD-gD-IBRV,优化反应体系后,建立了快速检测IBRV的SYBR Green I荧光定量PCR方法。该方法特异性较强,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法敏感性高,对重组质粒标准品的最低检出限达4.8×10^(0)copies/μL,高于常规PCR方法;批内、批间重复性试验的变异系数均小于2%,表明该方法重复性良好;该方法检测的样本阳性率高于常规PCR方法,利用该方法检测牛场送检的106份临床样品,结果显示IBRV的阳性率为36.7%,常规PCR检测方法检测显示阳性率为33.0%,二者符合率为96.2%,表明该方法更适用于临床样品检测。本研究建立的IBRV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、快速高效,对于IBRV的检测和流行病学调查具有重要意义。

牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gB和gD的研究进展

牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是牛的重要传染病,临床以呼吸道症状为主,伴有结膜炎、乳腺炎、流产等症状。其病原是牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV),又称牛疱疹病毒1型(Bovine herpesvirus 1,BHV-1),共编码30~40种结构蛋白,其中11种为囊膜糖蛋白。糖蛋白在病毒吸附、侵入宿主细胞的过程中发挥重要作用。糖蛋白gB对病毒侵入宿主细胞、在细胞间扩散及复制至关重要;糖蛋白gD在病毒复制、传播和感染机制方面作用重大,具有良好的免疫原性,是诱导产生中和抗体的主要糖蛋白。对gB、gD的研究不仅可从蛋白层面解析病毒侵染机制,还能够为牛传染性鼻气管炎的临床诊断和预防提供理论依据。本文针对牛传染性鼻气管炎病毒的主要糖蛋白gB、gD的研究结果进行综述,分析其生物学功能以及在疫苗和诊断方面的应用,以期为牛传染性鼻气管炎侵染机制和防控提供参考。

牛传染性鼻气管炎病毒免疫学检测方法研究进展

牛传染性鼻气管炎(传染性脓疱外阴阴道炎)是由牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)感染引起的传染病,流行范围较广。该病在临床上主要有呼吸道和生殖道两种表现型,引发多种症状,给牛养殖业造成了巨大的经济损失。病毒侵入牛体后造成持续性感染,病牛长期或终生带毒,给防控带来极大困难,IBR的综合防控依赖于精准的检测方法。基于抗原-抗体特异性识别反应的免疫学检测方法在特异性、敏感性、样品前处理简便性、现场适用性、检测效率等方面优势突出。IBRV的gB蛋白、gC蛋白、gE蛋白、gG蛋白等常被作为靶抗原进行检测试剂盒的研发,从IBRV的基因组结构、结构蛋白特点、选用的IBRV毒株、靶抗原的表达方式、酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法的建立、不同方法的符合率等方面综合论述了IBRV免疫学检测方法的研究进展,以期为该病原快速、精准、便捷的检测诊断试剂的研发提供参考。

1例猫传染性鼻气管炎的诊断与治疗

猫传染性鼻气管炎是一种由猫疱疹病毒引起的具有高度传染性的猫上呼吸道疾病。猫疱疹病毒主要在猫呼吸道的淋巴细胞和上皮细胞中复制,猫一旦感染将终生携带。猫传染性鼻气管炎临床主要特征表现为结膜炎、上呼吸道感染和流产,以上呼吸道疾病的症状为主。猫疱疹病毒对幼猫危害严重,死亡率可达50%。文章就一例猫传染性鼻气管炎的诊断和治疗以及诊疗体会展开论述,以期为建立科学严谨的防治措施提供参考。

东北虎和华南虎源传染性鼻气管炎病毒的PCR检测和序列分析

为了鉴定东北虎和华南虎疑似传染性鼻气管炎病料中病毒的种类及进行流行病学分析,我们设计并合成了4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4用于扩增大小分别为193 bp,288 bp,312 bp和1088 bp的基因片段,同时对PCR扩增产物进行纯化、克隆至PMD18-T Simple载体、转化、酶切鉴定、测序及序列分析。结果显示设计并合成的4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4均扩增出与目的片段大小相符的明亮条带,分别约为200 bp、290 bp、310 bp、1100 bp;对Fhv3进行单酶切鉴定,出现大小分别约为160 bp、150 bp的2条条带;对Fhv4进行测序及序列分析,与GenBank^(TM)中已公布的猫传染性鼻气管炎病毒毒株(序列号:FJ478159.2)序列相似性为100%,与其他基因序列相似性均较低。本研究首次发现东北虎和华南虎源猫传染性鼻气管炎病毒,可为虎类的饲养管理及疾病的防控提供参考,为虎传染性鼻气管炎病毒的相关研究奠定基础。

牛传染性鼻气管炎诊疗技术

牛传染性鼻气管炎又称“坏死性鼻炎”、“红鼻病”,属于二类传染病,是Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)或牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)引起的一种牛呼吸道接触性传染病,临床表现形式多样,以呼吸道症状为主,常伴有结膜炎、母牛流产以及乳腺炎、公牛龟头炎、生殖道感染等症状,有时也可诱发小牛脑炎等。1流行特点牛传染性鼻气管炎的主要传播途径为飞沫传播,可通过空气、接触感染源等方式传播该病。此病可传染给各品种以及各年龄段的牛,且主要流行于牛群。该病病毒经过口鼻分泌物以及唾液传播进入空气中,再经过气溶胶的作用感染其它牛群。该病病毒可存活于公牛的精液中和母牛的阴道中,通过交配后相互交叉传播。该病的发病规律无明显季节性,发病后的严重程度与圈舍内的环境卫生以及管理情况息息相关。

牛传染性鼻气管炎流行与防控策略

牛传染性鼻气管炎主要由牛疱疹病毒1型引起的病毒性呼吸道疾病。目前除少数地区未有资料报道牛传染性鼻气管炎外,几乎遍及全国均有省份报道,尤其在高原地区牦牛种群中持续流行。本文总结了牛疱疹病毒1型在国内外的流行现状、传播的关键要素、相关的防控策略等,为牛传染性鼻气管炎的有效防控提供借鉴,为实践提供策略。