猫实验性视网膜脱离视网膜色素上皮细胞PCNA的表达

研究视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞 (retinalpigmentepithelium ,RPE)的增殖情况。利用微穿刺技术将 0 2 5 %Healon注入视网膜下腔造成视网膜脱离 ,并在不同时间 (术后 0 5、1、2、3、4、5、6、7、10、14、2 0、30、6 0天 )摘除眼球。采用免疫组化法 ,观察视网膜脱离后RPE细胞增殖性细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)的表达。光镜下确定PCNA染色阳性的RPE并量化增殖反应。结果显示 ,在上述相应各时间点 ,组织切片平均每 0 2 5mm视网膜有PCNA标记的RPE细胞数是 :脱离区分别为 0 0 5 5、0 4 4 4、0 86 1、1 972、3 139、5 833、6 0 2 8、4 917、3 333、2 195、1 0 83、0 195、0 0 5 6 ,非脱离区为 0 0 0 0～ 0 6 39,两组间差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。研究表明 ,神经视网膜与RPE细胞分离可诱导RPE细胞PCNA表达。

实验性视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞增殖的动态研究

目的 研究实验性孔源性视网膜脱离 (RD)后视网膜色素上皮 (RPE)细胞增殖的动态改变 ,以期寻找药物抑制的最佳时机。方法 将 2 4只有色家兔随机分为 1d、4d、1 4d及 2 8d 4组。一眼制备RD模型 ,另一眼为对照眼。各组按时间摘除眼球后行视网膜光学显微镜观察 ,并用流式细胞仪 (FCM )对RPE细胞周期分布进行分析。结果 实验眼在RD后 4d ,RPE细胞个体变大变圆 ,1 4d呈双核及多层排列。FCM分析显示 ,RD后 1dRPE细胞中S +G2 M期的细胞数 (2 0 0 1± 2 46 ) %明显高于对照眼 (1 2 6 1±0 70 ) %,P <0 0 5。随着RD时间延长 ,S +G2 M期的细胞数进一步增加 ,1 4d达高峰 (2 5 6 2±1 0 7) %,但 2 8d却回降至 (1 6 6 7± 0 88) %,与对照眼比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 RD后 1d一部分RPE细胞已进入细胞增殖周期 ,远远早于形态学改变 (4d) ,2周达高峰 ,2 8d后逐渐减少。

猫视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞的行为观察

目的 观察猫视网膜脱离后 ,视网膜色素上皮细胞 (RPE)的形态学改变及行为变化。方法 2 8只猫利用微穿刺技术将 0 2 5 %Healon注入到视网膜下腔造成视网膜脱离。脱离 0 5～ 90d的视网膜用 3 %戊二醛固定 ,加工成组织切片 ,光镜和电镜下观察RPE细胞形态学变化。结果 视网膜脱离 2 4h ,视网膜色素上皮细胞顶端突起被短而均匀的指样突起所取代 ,RPE细胞顶端表面开始出现耸起。随着脱离时间的延长 ,细胞表面的这种耸起变得更加明显。脱离14d ,RPE细胞开始向视网膜下腔迁移 ,1～ 2个月后 ,在视网膜下腔可以观察到一些小的RPE细胞团簇。结论 视网膜脱离后 ,RPE细胞的形态发生迅速改变 ,并且依赖视网膜脱离的时间呈进行性进展。视网膜脱离能诱导RPE细胞形状发生变化 ,这种形状改变可能与细胞的增殖行为有关。

实验性视网膜脱离的病理改变及细胞增生

目的:探讨实验性视网膜脱离的病理变化和细胞增生。方法:成年白化病兔32眼在间接检眼镜直视下,先抽取玻璃体液0.5mL软化眼球,用50nm玻璃微管在下方6:00赤道部部位刺入视网膜造成裂孔并注射生理盐水0.5mL于视网膜下间隙。术后0.5,1,3,6,24h;3,7d和14d摘除眼球作组织学观察并以免疫组织化学的方法检测视网膜下细胞增生。结果:32只兔眼术后均发生视网膜脱离,视网膜脱离范围3:00～9:00(髓腺下方视网膜均脱离)。自发性复位的时间在3～14d,组织学切片显示,3d可见视网膜色素上皮细胞积聚团,7dRPE细胞增生肥大呈巨噬细胞样改变,14dRPE多层化改变,并见巨噬细胞样RPE来源于单层的RPE,游离RPE层后,吸附于脱离的光感受器细胞外节;3d增生细胞核抗原即表达阳性,增生细胞表达角蛋白阳性。结论:在此模型中,RPE细胞表现出细胞增生,巨噬细胞样细胞也来源于RPE。

羊膜对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖影响的实验研究

目的 观察羊膜是否对视网膜色素上皮细胞 (Retinalpigmentepithelial ,RPE)的生长有影响 ,探讨羊膜用于治疗增殖性玻璃体视网膜病变 (Proliferativevitreoretinopathy ,PVR)的潜在可能性。方法 运用MTT比色法 ,观察羊膜匀浆在不同浓度 (4 0、80、160 μg ml)及不同作用时相点 (2 4、48、96h)对人RPE增殖的影响。 结果 ①在第 2 4小时 ,3个浓度羊膜匀浆均对人RPE增殖起抑制作用 ,而且随浓度增加抑制作用减弱 ,抑制率 (5 0 774%、2 7 3 87%、14 80 2 % )间相差显著 (P <0 0 5 ) ;在第 48、96小时 ,羊膜匀浆在低浓度时 ,对人RPE增殖起抑制作用 ,而在中、高浓度为促增殖作用 ,其中在第 48小时抑制率 (4 494%、-0 944 %、-3 693 % )间相差不显著 (P >0 0 5 ) ,在第 96小时时抑制率 (8 3 88%、-9 42 5 %、-17 65 1% )间相差显著 (P <0 0 5 )。②羊膜匀浆浓度为 40 μg ml ,各时相点对人RPE均为抑制增殖 ,抑制率间相差非常显著 (P <0 0 1) ;在浓度为 80 μg ml、160 μg ml时 ,随着作用时间延长 ,羊膜匀浆对人RPE增殖的作用逐渐由抑制变为促进作用 ,抑制率间相差显著 (P <0 0 5 )。结论 羊膜匀浆在低浓度 ,短时间内对人RPE增殖有抑制作用 ,而在高浓度、长时间则对RPE增殖有促进作用。羊膜匀浆用?

视网膜脱离状态下色素上皮细胞的凋亡变异

探讨视网膜脱离（ＲＤ）后色素上皮（ＲＰＥ）细胞的凋亡。方法 制造有色眼家兔的ＲＤ模型，以流式细胞仪（ＦＣＭ）技术分析ＲＤ后２８天内ＲＰＥ细胞的凋亡变化。结果 ＲＤ后８ｈ ＲＰＥ细胞凋亡显著增加，第７天达顶峰，凋亡细胞平均数由正常的１３１．６７±３５．６７上升至１１９６．２±２３８，凋亡率由正常的０．７０％±０．２１％上升至５．９８％±１．２１％，然后缓慢下降，第２８天仍显著高于正常。结论 ＲＤ可导致ＲＰＥ细胞的凋亡。ＲＤ后２８天内，随时间延长，ＲＰＥ凋亡增加。

孔源性视网膜脱离模型视网膜色素上皮细胞CD44的表达变化

目的研究兔孔源性视网膜脱离模型视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞CD44的表达,及其与孔源性视网膜脱离病理变化的关系。方法90只健康有色兔随机分为5组建立不同模型:Ⅰ组:孔源性视网膜脱离组,28只眼;Ⅱ组:孔源性视网膜脱离伴玻璃体积血组,27只眼;Ⅲ组:单纯视网膜裂孔组,18只眼;Ⅳ组:玻璃体切除组,17只眼;Ⅴ组:空白对照组,90只眼。分别于手术后不同时间点(1、3、7、14、21、28d)摘取各组兔眼眼球,用酶消化和机械分离法分离RPE细胞,制成细胞悬液,荧光免疫法标记CD44,用流式细胞仪检测各组RPE细胞膜上CD44的表达水平。结果Ⅰ组和Ⅱ组模型眼均发生视网膜脱离,Ⅲ组和Ⅳ组模型眼未发生视网膜脱离。Ⅰ、Ⅱ组中RPE细胞CD44的表达明显高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,Ⅰ、Ⅱ组RPE细胞CD44表达水平在术后1d即增高,7d左右达到高峰,继而下降,Ⅰ、Ⅱ组与Ⅴ组RPE细胞CD44的表达差异有极显著性意义(均P<0.01),Ⅲ、Ⅳ组与Ⅴ组RPE细胞CD44表达差异无统计学意义(均P>0.05)。结论孔源性视网膜脱离中RPE细胞CD44表达增强,RPE细胞CD44的表达变化与孔源性视网膜脱离的病理发展关系密切。

兔眼视网膜脱离后视网膜谷氨酸含量与视网膜色素上皮细胞增殖的关系

目的 研究兔眼孔源性视网膜脱离 (retinaldetachment,RD)后不同时程视网膜内谷氨酸 (glutamate,Glu)含量变化及视网膜色素上皮 (vetinalpigmentepithelial,RPE)细胞增殖状况及其 2者之间的关系。方法 4 2只有色家兔 ,按时间随机分为 6组 :8h ,1、4、7、14及 2 8d。任选 1眼制备RD模型 ,另 1眼为对照眼。各组采用高压液相色谱仪(HPLC)及流式细胞仪 (FCM)分别对视网膜内Glu浓度及RPE细胞DNA进行定量检测 ,并寻找 2者之间的相互关系。结果 RD后 8h ,视网膜内Glu含量明显升高 ( 4 .6 8±1 2 2 ) μmol·g-1,与对照眼 ( 1.87± 0 .81) μmol·g-1相比具有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ;但随着脱离时间的推移 ,至 14d ,视网膜内Glu含量明显回降 ( 3.78± 0 .88) μmol·g-1,与对照眼( 1.5 7± 0 .6 6 ) μmol·g-1相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。RPE细胞的增殖指数 (PI)在RD后 8h明显增加 ( 18.4 1%± 0 .2 2 % ) ,与对照眼 ( 16 .6 2 %± 0 .6 9% )相比差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;但 2 8d组实验眼 ( 16 .70 %± 0 .88% )与对照眼 ( 15 .4 1%± 2 .4 4 % )的差异则无显著性意义 (P <0 .0 5 )。且视网膜内Glu含量变化与RPE细胞的PI值呈显著正相关关系(r=0 .4 36 ,P <0 .0 1)。结论 视网膜脱离后RPE细胞发生?

外伤性视网膜脱离视网膜色素上皮细胞钙粘素表达变化

目的探究外伤性玻璃体积血视网膜脱离模型视网膜色素上皮细胞(RPE)细胞膜表面钙粘素(Cadherin)表达变化规律。方法90只健康有色兔,分为5组:Ⅰ组,外伤性玻璃体积血伴视网膜脱离组;Ⅱ组,孔源性视网膜脱离组;Ⅲ组,单纯视网膜裂孔组;Ⅳ组,玻璃体切除组;Ⅴ组,空白对照组。分别于手术后1、3、5、7、14、21、30d摘取眼球,酶消化和机械分离法分离RPE细胞,制成细胞悬液,用流式细胞仪检测RPE细胞膜上钙粘素表达水平。方差分析比较各组差异。结果各模型组RPE细胞钙粘素表达差异具有统计学意义(F=9.612;P<0.001),Ⅰ组和Ⅱ组中RPE细胞钙粘素的表达水平明显低于Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组。不同时间点组中钙粘素表达差异具有统计学意义(F=7.95,P<0.001)。Ⅰ组和Ⅱ组模型RPE细胞钙粘素表达均数无明显差异,与Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组比较差异显著。结论外伤性玻璃体积血伴视网膜脱离和孔源性视网膜脱离模型RPE细胞钙粘素表达在发病早期表达减弱,随着病情的发展钙粘素表达逐步恢复至正常。

视网膜脱离状态下色素上皮细胞的动力学变化

目的 :研究视网膜脱离后色素上皮细胞 (RPE)细胞增殖与凋亡改变 ,为增生性玻璃体视网膜病变的治疗提供实验依据。方法 :在青紫兰家兔眼建立RD模型 ,通过流式细胞仪技术定量分析RPE细胞的增殖和凋亡改变。结果 :RD后 ,RPE细胞可发生增殖和凋亡改变 ;RD后 8hRPE细胞增殖及凋亡增加 ,RPE细胞增殖第 14d达到最高峰 ,第 2 8d接近正常 ;其凋亡 2 4h形成高峰 ,至第 2 8d仍然高于正常。RD后 8hRPE细胞增殖和凋亡之间具有显著的正相关 (r=0 945 2 ,P >0 0 5 ) ,RD后 1d后RPE细胞增殖和凋亡之间未见显著相关(P >0 0 5 )。结论 :RD后 ,RPE细胞可发生增殖和凋亡改变 ;

地塞米松1mg玻璃体注射对ET-1在实验性视网膜脱离表达的影响

目的观察1mg地塞米松(dexamethasone,DEX)玻璃体注射对ET1在实验性视网膜脱离中表达的影响。方法32只白色兔32眼,分为单纯模型组和模型加药组,每组分为4个时段,单纯模型组用50μm玻璃微管在下方6:00赤道部部位视网膜造孔并注射0.5mL生理盐水于视网膜下间隙。模型加药组在模型建立后,再注射1mgDEX于玻璃体中。术后0.5h、1h、3h、6h摘除眼球作组织学观察,以鼠抗MAPK抗体检测视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞表达变化,并以免疫组织化学和原位杂交的方法检测ET1的表达并抽出玻璃体,用放射免疫测定法检测ET1浓度。结果实验各组兔眼术后均发生视网膜脱离,视网膜脱离范围3:00～9:00。单纯模型组的视网膜在造模后0.5h,即有ERK表达,并进入RPE细胞核,而模型加药组则4个时间段未见ERK磷酸化进入RPE细胞核。经放射免疫测定,在单纯模型组,ET1从模型建立后3h开始检测出ET1浓度,并有逐渐上升趋势,而模型加药组,4个时间段均未测得ET1浓度;而免疫组化染色,2组4个时间段在视网膜均未检测出ET1表达;原位杂交也证实,在造模后3h,单纯模型组ET1mRNA主要表达在细胞核,6h在胞浆只有较弱的着色,而模型加药组4个时间段,在RPE层均未检测出ET1mRNA。结论1mgDEX玻璃体注射不但影响外源性ET1进入视网膜下,而且抑制RPE内源性ET1的表达。

金雀异黄素诱导培养人视网膜色素上皮细胞凋亡

目的 :探讨金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)的促凋亡作用 .方法 :将不同浓度的金雀异黄素作用于培养人视网膜色素上皮细胞 ,通过TUNEL染色和光、电镜的形态学观察 ,观察金雀异黄素对培养hRPE凋亡的诱导作用 .结果 :不同浓度的金雀异黄素可以诱导RPE凋亡 ,5 0mg·L-1 金雀异黄素作用 2 4h即有TUNEL阳性的凋亡细胞出现 ,作用时间在 2 4 ,4 8和 72h ,其凋亡细胞百分数的中位数分别为 7.6 % ,9.8%和 1 3.7% ;当金雀异黄素浓度为 75和1 0 0mg·L-1 时 ,以上 3个时间点凋亡细胞百分数的中位数分别为 1 0 .3% ,1 6 .4 %和 2 3.4 % ;1 5 .4 % ,2 1 .2 %和 35 .8% .透射电镜观察 ,5 0mg·L-1 浓度作用于细胞 ,胞核内染色体出现边集 ,表现凋亡的早期征象 ;75mg·L-1 作用呈现典型的凋亡特征 ;1 0 0mg·L-1 作用于细胞 ,除凋亡细胞外 ,部分细胞出现胞质的进行性溶解 ,有胞膜破坏现象 ,坏死细胞比例增多 .结论 :金雀异黄素可诱导RPE凋亡的发生 ,并有剂量和时间效应关系 .1 0 0mg·L-1

视网膜色素上皮细胞在增生性玻璃体视网膜病变中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是在炎症和免疫功能细胞及多种活化因子对眼内细胞修复反应的调控过程中,由于过度促进细胞增殖、移行以及由细胞介导的胶原收缩而形成的。参与PVR的细胞目前已知的有5种,其中视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞是最主要的,本文将影响RPE细胞功能的各种影响因素及PVR的治疗进展作一综述。

巨噬细胞调理液对视网膜色素上皮细胞合成单核细胞趋化蛋白-1的作用

目的 评价巨噬细胞调理液 ( MCM)对视网膜色素上皮 ( RPE)细胞合成单核细胞趋化蛋白 - 1( MCP- 1)的作用 .方法 在培养的人 RPE细胞的培养液中加入 2 0 0 m L· L- 1培养人巨噬细胞调理液 ( MCM) ,培养 2 ,4 ,8,16,2 4和 4 8h后 ,对培养的细胞进行免疫组化和原位杂交 ,用 Western blot检测培养的上清液中 MCP- 1的含量 .同时在培养液中加入地塞米松 ( 10 - 8,10 - 7和 10 - 6 mol· L- 1 )和道诺霉素 ( 2 ,2 0和2 0 0 mg· L- 1 )重复上述实验 ,观察在此条件下 MCM对MCP- 1合成的作用 .结果 2 0 0 m L· L- 1 MCM培养条件下RPE细胞 2 h时已检测出分泌的 MCP- 1并在 16h达到较高水平 .同时原位杂交和免疫组化在细胞中检测到 MCP- 1的表达 .加入地塞米松 ( P<0 .0 1)和道诺霉素 ( P<0 .0 5 )后 ,MCP- 1的分泌水平明显降低 ,其中地塞米松对 MCP- 1合成的抑制作用大于道诺霉素 .结论 MCM刺激 RPE细胞产生MCP- 1,而 MCP- 1对巨噬细胞和淋巴细胞有较强的趋化作用 ,这种循环相互作用的过程对增生性玻璃体视网膜病变的发生可能有重要的作用 .在视网膜脱离后尽早使用地塞米松可能对抑制增殖性玻璃体视网膜病变有作用 .

低温冷冻后的人视网膜色素上皮细胞释放促细胞增殖物质

视网膜色素上皮（ＲＰＥ）能合成及释放多种生长因子，冷凝作为一种外界刺激因素，可使静息状态的ＲＰＥ细胞转化为活性细胞，使其具有释放功能。以往的研究多是应用动物实验和视网膜脱离患者视网膜下液中成分分析而间接推测的结果，直接对ＲＰＥ细胞冷冻，测定促细胞增殖...

猫外层视网膜和脉络膜的年龄相关变化

取老年猫（12龄，2．5～3kg）和青年猫（1～3龄，2～2．5kg）各4只的视网膜，经4％多聚甲醛处理后用H．E染色以显示视网膜和脉络膜的结构。光学显微镜下观察感光细胞层、玻璃膜（Bruch’s membrane）结构的变化，计数色素上皮层（retinal pigment epithelium，RPE）细胞数、脉络膜毛细血管数，测量玻璃膜、脉络膜厚度，脉络膜毛细血管之间的距离。结果显示，与青年猫比较，老年猫视网膜感光细胞层结构杂乱；色素上皮细胞数显著下降；玻璃膜厚度无显著变化，出现较多碎片；脉络膜厚度明显变薄，脉络膜毛细血管数显著减小，脉络膜毛细血管之间的距离显著增大。推测老年猫脉络膜的退化可能是导致玻璃膜、色素上皮层的退化，进而导致感光细胞的功能衰退的重要原因。

PDR及孔源性视网膜脱离玻璃体中PEDF的定量分析

目的定量测定色素上皮细胞衍生因子(PEDF)在增生型糖尿病视网膜病变(PDR)及孔源性视网膜脱离(RRD)患者玻璃体中的质量浓度,探讨其在PDR及RRD发病机制中的作用。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法定量检测56例PDR、11例RRD及9例对照组患者玻璃体中PEDF的质量浓度。结果PDR组、RRD组、对照组玻璃体中PEDF质量浓度分别为1.07l、1.83、1.53μg/mL,PDR组玻璃体中PEDF质量浓度小于对照组(P<0.05)及RRD组(P<0.05)。RRD组玻璃体中PEDF质量浓度大于正常对照组(P<0.05)。PDR组中Ⅳ期、Ⅴ期、Ⅵ期玻璃体中PEDF质量浓度分别为1.21、1.14、0.81μg/mL。Ⅵ期患者玻璃体中PEDF质量浓度小于Ⅳ期(P<0.05)及Ⅴ期(P<0.05)。结论PDR患者玻璃体中PEDF降低,随PDR患者眼底病变的加重,PEDF逐渐降低,PEDF降低与视网膜新生血管的形成有关,其在PDR中起着重要作用。RRD患者PEDF升高,PEDF可能在视网膜脱离的病变过程中起着神经营养作用。

中心性浆液性脉络膜视网膜病变的临床研究与治疗评价

中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinopathy,CSC)发病与视网膜色素上皮结构缺陷、血管脆性和脉络膜瘀血等病理机制有关。眼底荧光血管造影、吲哚青绿血管造影和光学相干断层扫描等可以辅助诊断本病。复发性或慢性CSC治疗困难,并可能导致永久的视力丧失,但目前可以运用激光光凝、光动力疗法和玻璃体内注射抗血管内皮生长因子等手段进行治疗。本文将综述CSC病理、诊断、治疗等要点和尚未解决的主要问题。

中心性浆液性脉络膜视网膜病变眼底影像学特征与治疗

中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)是视网膜色素上皮(RPE)屏障功能和(或)色素上皮细胞连接受损,脉络膜毛细血管渗出液体通过RPE损害处渗漏到神经上皮和(或)色素上皮下,造成黄斑部水肿脱离,进而视功能受损。本文分析各种眼底影像学特征对诊断CSC的意义。1流行病学继年龄相关性黄斑变性。

TGF-β_2与增生性玻璃体视网膜病变的关系

增生性玻璃体视网膜病变（proliferati vevitreoretinopathv．PVR）是一种眼内创伤过度的损伤修复过程，主要是RPE（视网膜色素上皮细胞）发生迁移、增生并表型变化，及神经胶质细胞的增生和收缩，形成可以收缩的增生膜。造成牵拉性视网膜脱离的病变，有许多细胞因子和生长因子参与了这个过程，其中转化生长因β2（transfonning growth factorβ，TGF-β）是其中的一个重要因子。