mfn2基因在猫爪草皂苷、红三叶异黄酮治疗乳腺癌中的作用机制研究

目的:研究mfn2基因在猫爪草皂苷、红三叶异黄酮抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导其凋亡中的作用。方法:采用不同浓度的猫爪草皂苷和红三叶异黄酮分别处理MCF-7细胞24,48及72h,进行体外细胞培养,用实时荧光定量PCR法检测mfn2基因的相对表达情况。结果:高浓度的猫爪草皂苷(100 mg·L^(-1))作用MCF-7细胞48h后,明显促进mfn2基因的表达,并且随时间延长更加明显;红三叶异黄酮在作用MCF-7细胞48,72 h后,显著抑制mfn2基因的表达。结论:高浓度的猫爪草皂苷可能是通过促进mfn2基因的表达,来抑制MCF-7细胞增殖及诱导其凋亡,红三叶异黄酮的作用机制有待于进一步研究。

猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus ternate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg/mL4个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析;采用细胞免疫化学检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的变化。结果:与对照组比较,猫爪草皂苷可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,猫爪草皂苷处理组随着浓度的增加和作用时间延长,LoVo细胞增殖的抑制作用增强,并呈时间、剂量依赖性(P<0.001);荧光显微镜下部分细胞发生凋亡形态学改变,对照组和4个猫爪草皂苷不同浓度处理组凋亡率分别为(3.57±1.56)%、(8.14±1.02)%、(11.11±2.30)%、(17.59±0.95)%和(25.10±1.23)%;流式细胞术显示,G1期细胞增加,而停滞在S、G2期细胞减少;细胞免疫化学检测发现,经猫爪草皂苷作用24h后,LoVo细胞Bax蛋白水平明显增高,而Bcl-2出现抑制,Bcl-2/Bax比例下降,Caspase-3蛋白水平明显升高,且呈明显的浓度依赖性。结论:猫爪草皂苷具有明显抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡作用,下调Bcl-2、Bcl-2/Bax,增加Bax、Caspase-3蛋白的表达可能是其作用机制之一。

猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞凋亡和线粒体电位的影响

目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus ternate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞的增殖和凋亡作用及作用机制。方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg.mL-14个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率。结果:与对照组比较,猫爪草皂苷处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,猫爪草皂苷处理组随着浓度的增加和作用时间延长,对LoVo细胞的增殖抑制作用增强,并呈时间、剂量依赖性(P<0.001);随着浓度的增加凋亡率增加,药物组与对照组比较差异有显著性(P<0.001);流式细胞仪细胞周期分析图可看出细胞阻滞在G1期,随着给药浓度的增加,细胞凋亡峰(AP峰)越来越明显(图1);激光共聚焦扫描技术观察显示,细胞经皂苷作用4h、8h、12h后,线粒体膜电位下降(P<0.05)。结论:猫爪草皂苷可导致人结肠癌LoVo细胞线粒体膜电位下降,具有明显抑制增殖和诱导凋亡作用。

猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞凋亡和细胞内Ca^(2+)浓度的影响

目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus ternate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的调控作用及其机制。方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg·ml-14个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析并计算凋亡率;激光共聚焦(LCSM)测定皂苷对LoVo胞内Ca2+浓度的影响。结果:与对照组比较,猫爪草皂苷处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;对LoVo细胞的增殖抑制作用增强,随着浓度的增加凋亡率增加,可看出细胞阻滞在G1期,随着给药浓度的增加,细胞凋亡峰(AP峰)越来越明显。作用于LoVo细胞4 h后,胞内Ca2+明显上升,4 h、8 h时略有下降,但仍维持在较高水平(P<0.001)。结论:猫爪草皂苷具有明显抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡作用,引起凋亡的途径可能与Ca2+的增加有关。

猫爪草总皂苷对H_(22)肿瘤增殖及自噬相关基因表达的影响

目的:研究猫爪草总皂苷对H_(22)实体瘤的增殖及其自噬基因表达的影响。方法:昆明小鼠48只,随机分为4组:模型组、环磷酰胺阳性对照组及猫爪草总皂苷低、高剂量组,每组12只。采用小鼠腋下注射H_(22)细胞株建立实体瘤模型,造模同时给予相应药物进行干预3 w。末次给药后记录瘤质量指数和胸腺、脾脏、肝脏、肾脏脏器系数、HE染色检测肿瘤组织病理学变化,并采用实时荧光定量PCR检测肾组织中凋亡基因BAX、BCL-2和自噬相关基因Atg5、Beclin1的表达水平。结果:猫爪草总皂苷可显著降低H_(22)实体瘤质量系数,抑瘤率达38.6%对肿瘤细胞具有明显的杀伤作用,并能显著促进BAX mRNA的表达,抑制BCL-2 mRNA的表达;并能上调Atg5、Beclin1 mRNA的表达。结论:猫爪草总皂苷可以抑制H_(22)肝肿瘤的增殖,其机制与促进肿瘤细胞的凋亡和自噬活动有关。

猫爪草总皂苷对人非小细胞肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长及EGFR、MMP-9表达的影响

目的:观察猫爪草总皂苷对人非小细胞肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用,及对表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:建立A549裸鼠移植瘤模型,待肿瘤长到100mm3以上,开始分组、称重、给药,分别设猫爪草总皂苷高剂量组(1.73 g/kg)、中剂量组(0.86 g/kg)、低剂量组(0.43 g/kg),同时设环磷酰胺(CTX)阳性对照组(30 mg/kg×3)及水阴性对照组(30 m L/kg),每隔3 d测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线图;18 d后脱颈处死裸鼠,称瘤重,计算抑瘤率,病理常规HE染色,免疫组化法检测EGFR、MMP-9在瘤组织中的表达。结果:各治疗组移植瘤生长较水对照组缓慢,猫爪草总皂苷高剂量组瘤重与水对照组比较差异显著(P<0.05),不同剂量猫爪草总皂苷的抑瘤率为13.8%-32.6%。猫爪草总皂苷高剂量组14 d和18 d的肿瘤生长体积、中剂量组18 d的肿瘤生长体积与水对照组相比差异显著(P<0.05)。不同剂量猫爪草总皂苷组的EGFR、MMP-9的阳性表达率与水对照组相比有所降低,且呈剂量依赖性,其中高剂量组的EGFR阳性表达率与水对照组相比差异显著(P<0.05)。结论:猫爪草总皂苷能较好地抑制A549裸鼠移植瘤生长,并下调瘤组织EGFR、MMP-9的表达。

猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌A549细胞活性研究

目的:观察猫爪草总皂苷体外对人非小细胞肺癌A549细胞活性的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法:采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对A549细胞凋亡和周期的影响。结果:猫爪草总皂苷对A549细胞增殖和集落形成均有较好的抑制作用,呈现较好的量效关系,可促进A549细胞的早期凋亡,细胞周期出现G0/G1期的阻滞。结论:猫爪草总皂苷能较好的抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导凋亡、G0/G1期阻滞有关。

猫爪草总皂苷对人肝癌HepG2细胞活性的影响

目的观察猫爪草总皂苷体外对人肝癌HepG2细胞活性的影响。方法采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖的影响。结果猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖和集落形成均有显著性的抑制作用,呈现较好的量效关系。结论猫爪草总皂苷能较好地抑制HepG2细胞增殖。

猫爪草总皂苷通过下调信号素4D表达抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖

目的探讨猫爪草总皂苷(TSRT)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法构建信号素4D(Sema4D)过表达慢病毒载体和阴性对照载体,以感染复数(MOI)10感染A549细胞,用嘌呤霉素1.0 mg·L^-1筛选得到稳定转染细胞株。设感染Sema4D过表达慢病毒的A549细胞为过表达(LV-Sema4D)组,感染Sema4D过表达慢病毒的A549细胞加入TSRT 100 mg·L^-1干预为给药(LV-Sema4D+TSRT)组,感染阴性对照病毒的A549细胞为阴性对照组(LV-NC组),未感染慢病毒的A549细胞为细胞对照组。实时细胞分析系统连续记录96 h细胞指数(CI),荧光定量PCR检测48 h后Sema4D、丛状蛋白B1(PlxnB1)和酪氨酸蛋白激酶(c-Met)mRNA表达;Western印迹法检测Sema4D,PlxnB1和c-Met蛋白表达;免疫荧光法检测Sema4D在细胞中的定位及表达水平。结果LV-NC组CI值与细胞对照组相比无显著差异;与LV-NC组相比,LV-Sema4D组72 h CI值升高(P<0.01);TSRT 100 mg·L^-1干预后,与LV-Sema4D组相比,48,72和96 h CI值均显著降低(P<0.05,P<0.01)。LV-NC组Sema4D,PlxnB1和c-Met mRNA和蛋白表达与细胞对照组相比无显著差异;与LV-NC组相比,LV-Sema4D组上述mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);TSRT 100 mg·L^-1干预后,与LV-Sema4D组相比,上述mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。LV-NC组Sema4D荧光强度与细胞对照组相比无显著差异,LV-Sema4D组与LV-NC组相比Sema4D荧光强度显著增强(P<0.01);TSRT干预后,与LV-Sema4D组相比,Sema4D荧光强度减弱(P<0.05)。结论TSRT可通过下调Sema4D表达、减少Sema4D与PlxnB1结合、抑制c-Met信号途径,从而抑制A549细胞增殖。

猫爪草总皂苷对A549细胞增殖的抑制及诱导凋亡作用的研究

目的:观察猫爪草总皂苷(RRTS)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:采用系统溶剂法提取RRTS,RRTS(400、200、100、50、25、12.5 mg/L)作用于A549细胞,实时细胞分析系统(RTCA)和CCK-8法观察RRTS对细胞增殖的抑制作用,及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)抑制剂对上述作用的影响;JC-1染色法观察线粒体膜电位的改变;qRT-PCR法检测凋亡相关Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的mRNA表达情况;比色法检测Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达。结果:400~50 mg/LRRTS能明显降低细胞存活率;400~25 mg/L浓度能明显降低细胞指数(CI)值,50μmol/LCaspase-3抑制剂能阻断这一作用;200~50 mg/LRRTS能降低线粒体膜电位;100 mg/LRRTS能显著升高Bax、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达量,使Bcl-2 mRNA表达略有降低;200~50 mg/L RRTS能显著升高Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达。结论:RRTS能抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过上调Bax表达,激活Caspase-9、Caspase-3级联反应,从而激活线粒体通路诱导A549细胞凋亡。

猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌NCI-H460细胞活性研究

目的观察猫爪草总皂苷体外对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞活性的影响。方法采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法观察猫爪草总皂苷对NCI-H460细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对NCI-H460细胞凋亡和周期的影响。结果猫爪草总皂苷对NCI-H460细胞增殖有较好的抑制作用,呈现较好的量效关系,可促进NCI-H460细胞的早期凋亡,细胞周期出现G0/G1期的阻滞。结论猫爪草总皂苷能较好的抑制NCI-H460细胞增殖,其机制可能与诱导凋亡、G0/G1期阻滞有关。

猫爪草总皂苷对EGFR-TKIs耐药肺癌细胞作用的研究

目的 探讨猫爪草总皂苷通过抑制自噬活性逆转肺癌细胞耐表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的作用机制。方法 采用浓度梯度递增法体外构建肺腺癌耐药细胞株PC-9/ER,分为空白组、10μg/mL组、20μg/mL组和50μg/mL组,空白组仅加入厄洛替尼10μmol/L处理,各猫爪草总皂苷组在加入厄洛替尼10μmol/L后,同时分别加入10、20和50μg/mL猫爪草总皂苷,共同干预48 h。MTT法检测细胞增殖活性。透射电镜和共聚焦显微镜观察细胞形态和自噬体数量。流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法分析LC-3Ⅱ、Beclin1、Bcl-2、BAX、Cleaved Caspase-3和Caspase-3蛋白表达水平。结果 厄洛替尼抑制PC-9/ER细胞增殖的IC为(8.76±0.13)μmol/L,耐药指数(RI)为60.41±5.14,说明PC-9/ER耐药细胞株构建成功。50μg/mL猫爪草总皂苷协同作用后,PC-9/ER细胞IC_(50)为(1.32±0.12)μmol/L,RI降低为9.10±1.30。与空白组相比,10、20和50μg/mL组PC-9/ER细胞中的自噬泡数量和酸性囊泡(包括自噬体)数量逐渐减少;凋亡率逐渐增加[(4.75±2.03)%,(7.66±2.14)%,(28.79±5.65)%,F=159.683,P<0.001]。与空白组相比,20μg/mL和50μg/mL组Bcl-2、Beclin1和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ蛋白表达降低,BAX和Cleaved Caspase-3蛋白表达量升高,P<0.05。结论 猫爪草总皂苷可体外逆转PC-9/ER细胞对EGFR-TKIs的耐药性,其可能的作用机制与抑制自噬和诱导凋亡有关。