猫白血病C亚类病毒受体1的反义RNA1靶向抑制微小RNA-515-5p表达对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨猫白血病C亚类病毒受体1的反义RNA1(feline leukemia virus subgroup C virus receptor 1 antisense RNA 1,FLVCR1-AS1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法以人永生化鼻咽上皮细胞NP69(简称NP69细胞)为对照,实时荧光定量PCR(realtime fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测鼻咽癌细胞系(5-8F、C666-1、6-10B)中FLVCR1-AS1和微小RNA(microRNA,miR)-515-5p表达。将C666-1细胞分为si-NC组、si-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、miR-515-5p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组和si-FLVCR1-AS1+anti-miR-515-5p组,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell检测分别检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证FLVCR1-AS1和miR-515-5p调控关系。结果鼻咽癌细胞系(5-8F、C666-1、6-10B)中FLVCR1-AS1表达高于NP69细胞(2.26±0.11、4.19±0.24、3.54±0.18 vs 1.00±0.00,P<0.05),而miR-515-5p表达低于NP69细胞(0.86±0.09、0.20±0.03、0.47±0.05 vs 1.00±0.00,P<0.05)。与si-NC组比较,si-FLVCR1-AS1组C666-1细胞光密度(optical density,OD)值(0.59±0.03 vs 1.34±0.08)、克隆数[(55.67±1.70)个vs(114.67±3.30)个]、迁移距离[(75.34±3.09)μm vs(186.29±9.29)μm]、侵袭数[(69.33±3.68)个vs(149.67±6.80)个]降低(P均<0.05)。与miR-NC组比较,miR-515-5p组C666-1细胞OD值(0.51±0.04 vs 1.36±0.07)、克隆数[(46.67±1.25)个vs(115.67±4.11)个]、迁移距离[(65.89±1.96)μm vs(186.49±8.33)μm]、侵袭数[(58.33±2.05)个vs(150.00±6.98)个]降低(P均<0.05)。FLVCR1-AS1可靶向负调控miR-515-5p。与si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组比较,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-515-5p组C666-1细胞OD值(1.16±0.06 vs 0.59±0.04)、克隆数[(106.00±3.56)个vs(55.33±2.49)个]、迁移距离[(164.06±7.40)μm vs(75.48±2.62)μm]、侵袭数[(134.67±5.31)个vs(69.00±2.94)个]升高(P均<0.05)。结论 FLVCR1-AS1可能靶向下调miR-515-5p促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭。

猫白血病病毒分子致病机制研究进展

猫白血病病毒是引起猫白血病的主要病原,根据病毒与细胞表面受体特异性,将其分为A、B、C和T 4个亚型。不同亚型病毒感染宿主细胞需要特异性受体识别。该病毒表面糖蛋白在病毒感染宿主细胞中发挥重要作用,表面糖蛋白包含3个区域,其中第一和第二受体结合区是病毒表面糖蛋白结合到宿主细胞受体的关键,后者与病毒感染密切相关。

miR-137通过调控血红素铁输出蛋白FLVCR、BCRP对大鼠I/R损伤的保护作用

目的探讨大鼠脑缺血/再灌注(I/R)后血红素铁输出蛋白猫白血病病毒C亚组受体(FLVCR)、乳腺癌抗性蛋白(BCRP)的表达变化及miR-137对其表达的调控作用。方法选取SD大鼠60只,随机分为假手术(SO)组、模型(MCAO/R)组、miR-137模拟物(Mimic)组、miR-137模拟对照(Mimic对照)组、miR-137抑制物(Inhibitor)组、miR-137抑制对照(Inhibitor对照)组,每组10只。采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,分别于再灌注后12、24 h取材。通过qRT-PCR测定大鼠脑组织FLVCR、BCRP及miR-137的mRNA表达,免疫组化检测FLVCR、BCRP蛋白的表达水平。结果MCAO/R组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P<0.01),Mimic组评分显著下降(P<0.01),Inhibitor组评分显著升高(P<0.05)。MCAO/R组miR-137 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),与Mimic对照组同时间比较,Mimic组miR-137 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),且24 h升高更显著(P<0.05);与Inhibitor对照组同时间比较,Inhibitor组miR-137 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),且24 h降低更显著(P<0.05)。与SO组比较,MCAO/R组FLVCR mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与Mimic对照组比较,Mimic组FLVCR mRNA及蛋白表达水平在12 h显著升高(P<0.05),24 h最高(P<0.05);与Inhibitor对照组比较,Inhibitor组FLVCR mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01),在24 h降低更明显(P<0.05)。与SO组比较,MCAO/R组BCRP mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与Mimic对照组比较,Mimic组BCRP mRNA及蛋白表达水平在12 h显著升高(P<0.01),24 h最高(P<0.05);与Inhibitor对照组比较,Inhibitor组BCRP mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论miR-137过表达可能促进FLVCR和BCRP的表达以保护大鼠脑缺血再灌注损伤。

大鼠脑缺血后海马CA2区FLVCR和BCRP的表达及益气活血法干预

目的研究脑缺血后血红素铁转运蛋白人类猫白血病C亚类病毒受体(feline leukemia virus subgroup C receptor,FLVCR)及胸腺癌抵抗蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)随时间表达及益气活血法脑泰方(黄芪、川芎、地龙、僵蚕)提取物干预对FLVCR及BCRP表达的影响。方法实验分两步进行,第一部分实验:随机将SD大鼠分为2 h、6 h、12 h、24 h、72 h组,采用大脑中动脉栓塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)行大鼠局灶性脑缺血模型制备,分别在术后2 h、6 h、12 h、24 h、72 h各时间点取材,通过免疫组织化学及RT-PCR检测FLVCR和BCRP及FLVCR mRNA和BCRP mRNA随时间表达的变化。第二部分实验,随机将SD大鼠分为假手术组、模型组、脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg)。各组大鼠预处理藻胃给药连续3天,MCAO模型制备术后连续藻胃给药3天,每日1次。术后3天取材,电镜检测海马神经元内铁样颗粒分布,免疫组织化学及RT-PCR检测FLVCR和BCRP及FLVCR mRNA和BCRP mRNA表达。结果 72 h组FLVCR表达明显降低(P<0.05),BCRP的表达2 h、6h较高,12 h、24 h、72 h表达明显降低(P<0.05);电镜下脑泰方各剂量组神经元内铁样颗粒聚集较模型组减少。脑泰方高剂量组FLVCR及FLVCR mRNA表达明显增加(P<0.05),BCRP表达无明显改变。结论大鼠脑缺血后第72 h FLVCR表达下降,益气活血中药脑泰方提取物干预可增加脑缺血后FLVCR的表达,促进血红素铁的外排,可能是治疗脑缺血损伤的新机制。

铁跨膜转运蛋白与脑神经疾病的相关性研究进展

铁是人体内必不可少的微量元素,细胞的氧化代谢及免疫应答、红细胞的生成等都有铁元素的参与[1]。人体可以利用两种形式的铁,非血红素铁和血红素铁。通过文献归纳、整理,我们率先总结出铁在体内细胞转运的工作模式：＂两个中心,三个体系,网络调控。

秦皮乙素对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨秦皮乙素对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法将SiHa细胞分为对照组、不同剂量秦皮乙素组、si-NC组、si-猫白血病C亚类病毒受体1反义RNA1(FLVCR1)-AS1组、秦皮乙素高剂量+pcDNA组、秦皮乙素高剂量+pcDNA-FLVCR1-AS1组。秦皮乙素低、中、高剂量组分别给予1 mmol/L、2 mmol/L、4 mmol/L的秦皮乙素处理细胞;si-NC组、si-FLVCR1-AS1组分别给予si-NC、si-FLVCR1-AS1转染细胞;秦皮乙素高剂量+pcDNA组、秦皮乙素高剂量+pcDNA-FLVCR1-AS1组分别给予pcDNA、pcDNA-FLVCR1-AS1转染细胞后,再给予4 mmol/L的秦皮乙素处理细胞。采用流式细胞仪检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)及神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)表达水平,实时荧光定量PCR检测FLVCR1-AS1 mRNA表达水平。结果与对照组比较,秦皮乙素中、高剂量组SiHa细胞中G_(0)/G_(1)期细胞比例升高,S期细胞比例、细胞吸光度值降低,迁移和侵袭细胞数减少,E-cadherin蛋白相对表达水平升高,N-cadherin蛋白及FLVCR1-AS1 mRNA相对表达水平降低(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-FLVCR1-AS1组SiHa细胞中G_(0)/G_(1)期细胞比例升高,S期细胞比例、细胞吸光度值降低,迁移和侵袭细胞数减少,E-cadherin蛋白相对表达水平升高,N-cadherin蛋白相对表达水平降低(均P<0.05)。与秦皮乙素高剂量+pcDNA组比较,秦皮乙素高剂量+pcDNA-FLVCR1-AS1组G_(0)/G_(1)期细胞比例降低,S期细胞比例、细胞吸光度值升高,迁移和侵袭细胞数增加,E-cadherin蛋白相对表达水平降低,N-cadherin蛋白相对表达水平升高(均P<0.05)。结论秦皮乙素可能通过下调FLVCR1-AS1基因的表达水平抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。

FLVCR1-AS1靶向miR-877-5p对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨猫白血病病毒C亚类受体1反义RNA1(FLVCR1-AS1)对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法收集2016年12月至2018年11月在海南医学院第二附属医院行手术治疗的35例宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织。体外培养SiHa细胞,按不同转染分为si-NC组、小干扰RNA(si)-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、微小RNA(miR)-877-5p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-877-5p组,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测细胞中Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达,RT-qPCR检测FLVCR1-AS1和miR-877-5p表达。双荧光素酶报告基因实验验证FLVCR1-AS1和miR-877-5p的调控关系。结果宫颈癌组织中FLVCR1-AS1表达量高于癌旁组织(3.82±0.23 vs 1.00±0.08,t=68.510,P<0.01);而miR-877-5p表达量低于癌旁组织(0.32±0.03 vs 1.00±0.05,t=68.993,P<0.01)。经转染后,si-FLVCR1-AS1组SiHa细胞中FLVCR1-AS1表达较si-NC组显著下调(P<0.01),且其OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白的表达量均低于si-NC组(P<0.01)。miR-877-5p组SiHa细胞中miR-877-5p表达较miR-NC组显著上调(P<0.01),且其OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量均低于miR-NC组(P<0.01)。与miR-877-5p抑制剂共转染后,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-877-5p组SiHa细胞OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量均高于si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组(P<0.01)。结论 FLVCR1-AS1可能通过靶向抑制miR-877-5p的表达促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭。