猴嗜T淋巴细胞病毒l型核酸快速检测方法的建立

猴嗜T淋巴细胞病毒l型(Simian T-cell lymphotropic virus type 1,STLV-1)是无特定病原体(SPF)猴必须排除的病毒之一,其潜伏期较长,主要侵害猴的免疫系统。为强化口岸对进出境野生及实验用灵长类动物STLV-1感染情况的监测和流行病学调查,本研究建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR检测STLV-1的方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了确认。

猴T淋巴细胞趋向性病毒1型双抗原夹心ELISA检测试剂盒的研制

目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型(STLV-1型)抗体的双抗原夹心ELISA(dsELISA)检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型(HTLV-1型)的Env蛋白作为包被用抗原,建立了检测STLV-1的dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,确定了dsELISA诊断试剂盒的相关条件,并经敏感性、特异性和重复性试验考查该试剂盒质量。结果试剂盒特异性好,批内重复试验变异系数(CV)<7%,批间重复试验CV<10%。对200份猴血清进行随机检测,与国际公认的诊断试剂盒(美国BioReliance公司)的符合率为97%。结论本试剂盒可初步应用于临床上实验猴STLV-1型抗体的检测。

猴T淋巴细胞趋向性病毒l型RPA和荧光RPA检测方法的建立

目的为了提高口岸对进出境野生及实验用灵长类动物猴T淋巴细胞趋向性病毒l型(Simian T-cell lymphotropic virus type 1, STLV-1)感染情况的监测和流行病学调查,本研究建立了重组酶聚合酶扩增(RPA)和荧光RPA检测STLV-1的方法。方法使用软件分析不同国家和地区分离的STLV-1的gag蛋白(gag polyprotein)基因序列,设计RPA引物和探针,建立RPA和荧光RPA检测STLV-1的方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行验证。结果通过将猴其它特定病原体与STLV-1对比检测,证实建立的检测方法具有良好的特异性;通过敏感性试验,证实建立的RPA和荧光RPA方法检测下限与PCR一致;通过对30份STLV-1阳性和阴性核酸样本的检测,证实建立的RPA和荧光RPA方法,具有PCR方法一样的稳定性和可靠性。结论本研究建立的RPA和荧光RPA检测STLV-1的方法具有良好的特异性、敏感性和可靠性,可应用于STLV-1的监测和流行病学调查。

人嗜T淋巴细胞白血病病毒I型(HTLV-Ⅰ)核心蛋白(p24)基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

人嗜Ｔ淋巴细胞白血病病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ⅰ）核心蛋白（ｐ２４）基因的克隆及在大肠杆菌中的表达段震峰，滕志平，纪志武，陈国敏，张永利，曾毅（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词人嗜Ｔ淋巴细胞白血病病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ｉ），聚合酶链反...

嗜人T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)与神经系统疾病相关性的初步研究

本文报道从粤东地区57例神经系统疾病患者血清中，检测出HTLV－Ⅰ抗体阳性者3例，阳性率为5．26％。并介绍了HTLV－Ⅰ抗体阳性者的主要临床表现和实验室检测结果。我们认为，进一步开展HTLV－Ⅰ与神经系统疾病的相关性研究，是非常有意义的。

嗜人类T淋巴细胞病毒Ⅰ型核心蛋白P24基因的克隆与表达

目的 从感染HTLV-1的中国患者外周血单核细胞（PBMCs）中扩增编码HTLV-1核心蛋白P24的cDNA,并在大肠杆菌中进行表达。方法 提取感染者PBMCs基因组DNA,应用巢式PCR方法扩增出HTLV-1核心蛋白P24的cDNA并测序,与pGEX-20T载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21中表达,采用ELISA和Westernblot分析重组蛋白活性。结果HTLV-1核心蛋白P24基因序列高度保守,构建重组载体后,在大肠杆菌中表达的重组蛋白,经检测具有较强的抗原活性。结论 成功地表达了HTLV-1型病毒的核心蛋白P24基因,为国产诊断试剂和疫苗的研发打下了基础。

广东等五省区猴场实验猴血清T淋巴细胞趋向性病毒1型抗体检测分析

为调查广东等地实验猴养殖场猴T淋巴细胞趋向性病毒1型(Simian T-lymphotropic virus 1,STLV-1)的流行情况,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对采集自广东、广西、云南、海南以及河南境内主要猴场的752份实验猴血清样本进行STLV-1抗体检测。结果显示,不同猴场实验猴STLV-1感染率差异较大,其中,云南猴场的感染率最高,达到25%,其次是广东境内的猴场,感染率为5%~13.5%,海南与河南境内猴场的检出率较低,分别为5%和3.13%,广西猴场未检出。按照动物种属划分,恒河猴感染率高于食蟹猴且差异显著(P<0.05)。调查结果可为实验猴生产繁育、质量控制和生物净化提供参考。

人类嗜T淋巴细胞病毒1型Tax1蛋白在头颈部腺样囊性癌中的表达与预后分析及机制探索

目的探讨人类嗜T淋巴细胞病毒1型(human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1)与头颈部腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发病及其远处转移的相关性。方法采用免疫组织化学及Western blot分析伴或不伴有远处转移ACC患者样品、ACC低侵袭力细胞系(SACC-83)、高侵袭力细胞(SACC-LM)及人单核细胞白血病细胞系(THP-1)中HTLV-1 Tax1蛋白、Myb、Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)和维甲酸信号通路蛋白RARA的表达,Pearson分析Tax1蛋白与肺转移及以上信号分子的相关性。结果11例ACC患者Tax1蛋白细胞核阳性表达,4例患者Myb细胞核阳性表达,6例患者Notch1细胞膜和细胞浆阳性表达,8例患者RARA细胞核阳性表达。选取2例ACC和细胞样本进行Western blot验证,1例与免疫组织化学结果不一致。Pearson分析Tax1与RARA蛋白呈正相关,与远处转移呈相关趋势,但与Myb和Notch1表达无显著相关性。结论HTLV-1感染可能影响体内维生素A代谢通路,与ACC患者发生远处转移相关。

NFκB与成人T淋巴细胞白血病关系的研究进展

在成人T淋巴细胞白血病(ATL)细胞中,人类T细胞白血病Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)非结构基因编码的TAX蛋白对调节病毒的复制和核因子κB(nuclear factor kappa B,NFκB)的激活起关键作用。NFκB是一类细胞核转录因子,它能通过经典的TAX蛋白激活途径或者通过不依赖TAX蛋白的途径而活化,使得宿主细胞CD4^+T淋巴细胞内一系列与细胞增殖存活有关的基因表达,如细胞因子、细胞凋亡调控蛋白、抗凋亡蛋白等,最终细胞无限增殖和转化导致ATL的发生,近些年NFκB已被作为治疗ATL的分子靶点。

野生猕猴STLV-1和B病毒抗体的检测

为了调查保护区野生猕猴是否感染猴的3种主要病毒,从广西某自然保护区一只濒死的野生猕猴抽取血液分离血清,分别应用猴3种病毒斑点酶免疫检测试剂盒检测,结果猴T淋巴细胞白血病病毒1型(STLV-1)和猕猴疱疹病毒Ⅰ型(B病毒)抗体呈阳性,而猴免疫缺陷病毒抗体呈阴性。

HTLV-Ⅰ病毒携带者家庭内感染的检测

人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ型和Ⅱ型（HTLV-Ⅰ／Ⅱ）是一种C型逆转录病毒，主要侵染T淋巴细胞，引起成人T淋巴细胞白血病（ATL）以及热带下肢痉挛性瘫痪或HTLV—Ⅰ相关脊髓病（TSP／HAM）。近10来年的流行病学调查表明，中国的HTLV流行整体上还处于较低的水平，主要在福建、广东有局部集中的流行地区。

猴STLV1抗体免疫梳检测方法的建立及应用

以基因工程技术制备猴嗜T淋巴细胞病毒I型(STLV1)的STLV1-30蛋白作为诊断抗原,建立用于特异性检测实验猴血清中抗STLV1抗体的免疫梳方法。应用原核表达载体pGEX-4T-1构建STLV1 STLV1-30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。结果显示,最佳抗原包被量为0.02 mg/mL;制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的STLV1阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应;该方法能够敏感地检测到1∶400倍稀释的STLV1阳性血清;稳定性和重复性试验结果显示,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对11份可疑猴血清样品进行检测,免疫梳方法与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。表明该检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特性,可用于猴T淋巴细胞趋向性病毒I型抗体的检测。

人类嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型的PCR检测方法研究

目的:建立PCR检测人类嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型的方法。方法:将HTLV-Ⅰ的PX基因转染大肠杆菌DH5a质粒pUC57构建HTLV-Ⅰ检测参考菌株,针对PX基因设计PCR引物,并考察PCR方法的特异性和灵敏度。结果:凝胶电泳检测到PCR扩增PX基因得到的230bp目标片段,且PCR方法具有较高的灵敏度。结论:该PCR可特异、灵敏地检测人类嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型。

RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病／热带痉挛性瘫痪患者细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病／热带痉挛性瘫痪（HAM／TSP）患者细胞凋亡的影响。方法运用RNAi技术特异性干扰Tax基因的表达，流式细胞技术和westernblot法鉴定Tax蛋白的表达情况，并运用流式细胞技术对干扰后的T淋巴细胞（TLC）凋亡情况及凋亡相关因子Fas、Bcl-2、肿瘤坏死因子α（TNF-α）进行检测。结果重组质粒psiTax／U6转染T细胞（9．84±3．32）％后，Tax蛋白的表达较未处理组（47．45±14．52）％和pSilencerl．O／U6转染组（45．98±10．66）％明显降低（t=9．51，14．93，均P〈0．01）；westernblot法显示重组质粒psiTax／U6转染TLC后，Tax表达较pSilencerl．0／U6转染组明显降低；RNAi干扰组的凋亡率（21．55±1．37）％较未处理组（47．80±3．36）％显著降低（t=24．17，P〈0．01）；RNAi干扰组Fas，TNF—α显著降低（t=17．83，16．85，均P〈0．01），而Bcl-2显著升高（t=5．21，P〈0．01）。结论运用RNA技术干扰Tax基因抑制Tax基因表达，可以有效抑制TLC细胞的凋亡。凋亡相关因子Fas，TNF—αandBcl-2在此过程中发挥重要作用。

重庆地区献血者HTLV-I感染状况调查

目的 调查重庆地区献血者中人类嗜T淋巴细胞病毒I型 (HTLV I)的感染状况。方法 采用ELISA、HTLV I抗体明胶颗粒凝集反应试剂盒和蛋白印迹技术对 14 6 2名无偿献血者进行了HTLV I检测。结果 在 14 6 2份样品中 ,经明胶颗粒凝集反应检测的有 12 82份 ;ELISA检测的样品有 180份 ,出现阳性结果 1例 ,对该例阳性样品用明胶颗粒凝集反应和蛋白印迹法检测为阴性。结论 14 6 2例重庆地区献血者中未见HTLV

嗜人T淋巴细胞病毒Ⅰ型感染所致葡萄膜炎基础研究的新进展

嗜人T淋巴细胞病毒(HTLV)是一种逆转录病毒,目前发现有3种亚型,即HTLV-Ⅰ、HTLV-Ⅱ及HTLV-Ⅲ。HTLV-Ⅰ与成人T细胞白血病(ATL)、HTLV-Ⅰ相关性脊髓病(HAM)及葡萄膜炎有关。HTLV-Ⅰ感染后不仅能够引发葡萄膜炎,同时也可能引起多种其他眼部疾病。目前,国内外大多数学者认为,HTLV-Ⅰ感染所致的葡萄膜炎(HAU)是由于HTLV-Ⅰ感染体内的T淋巴细胞,导致被感染的细胞因子聚集在眼内,从而引起的眼部炎症反应。本文中笔者对HAU的发病机制、临床特征、诊断方法、治疗手段及与其他疾病之间的关系进行综述。

RNA干扰Tax基因表达及其对HTLV-Ⅰ在TLC中转录的影响

目的探讨RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)在T淋巴细胞(TLC)中表达的影响。方法运用RNAi技术特异性干扰Tax基因的表达,流式细胞技术和western blot法鉴定Tax蛋白的表达情况,并通过p27特异性蛋白的检测反映HTLV-Ⅰ在TLC中表达。结果重组质粒psiTax/U6转染T细胞组Tax蛋白的表达(9.84±3.32)%较未处理组(47.45±14.52)%和pSilencer1.0/U6转染组(45.98±10.66)%明显降低;western blot法显示重组质粒psiTax/U6转染TLC后。Tax以及p27蛋白表达较pSilencer1.0/U6转染组明显降低。结论运用RNA技术干扰Tax基因表达可以有效的阻止HTLV-Ⅰ在TLC中的转录。