食蟹猴疟原虫和猪尾猴疟原虫红外期的研究

本文以具"复发"特性的食蟹猴疟原虫巴氏亚种(Plasmodium cynomolgi bastianellii)子孢子人工感染4只猕猴(Macaca mulatta)和无"复发"特性的猪尾猴疟原虫(P.inui)子孢子人工感染3只猕猴。氯胍处理感染了猪尾猴疟原虫的2只猕猴,在肝切片中发现发育受阻裂殖体,及首次虫血症推迟出现,二者有直接的关系。4只感染食蟹猴疟原虫的猕猴经1.5～5个月的观察及肝活检证明:疟疾的复发的确与休眠体有关,并且这种"复发"的时间和次数受猕猴个体差异的影响。本文论述了休眠体的成因及其与长潜伏期的关系,认为休眠体的成因和休眠体在宿主体内的进一步发育与宿主、虫株及外界因素有关。

食蟹猴疟原虫和恶性疟原虫两种抗原检测不同疟区人群中间接荧光抗体的实用性

[目的 ]比较食蟹猴疟原虫 (P c.)和恶性疟原虫 (P f.)两种抗原在不同疟区人群疟疾抗体检测的实用性。 [方法 ]1997年 5～ 10月在海南省间日疟和恶性疟混合流行区及河南省单纯间日疟区用P c 和P f 两种抗原测试人群疟疾抗体。 [结果 ]在海南省间日疟和恶性疟混合流行区P c 和P f 两种抗原检测人群疟疾间接荧光抗体阳性率分别为 37 4%和 31 3% ,其阳性符合率为 83 9% ;河南省单纯间日疟流行区的P f和P c两种抗原阳性率分别为 2 3 0 %和 9 7% ,阳性GMRT分别为 42 9%和 2 9 3%。 [结论 ]间日疟和恶性疟混合流行区P f和P c两种抗原均可用于人群疟疾抗体的检测 ,而单纯间日疟地区则以P c 抗原为优。

青蒿酯钠对猴疟原虫超微结构的影响

青蒿酯钠(青蒿素琥珀酸半酯钠盐)是水溶性抗疟作用强的青蒿素衍生物,其抗疟机制是通过还原青蒿索抑制细胞色素氧化酶,达到抑制疟原虫表膜——食物泡膜、线粒体膜系细胞色素氧化酶的功能,从而阻断以宿主红细胞胞浆为营养的供给。Theakston认为鼠疟原虫滋养体期线粒体主要含有细胞色素氧化酶。本实验研究青蒿酯钠对猴疟原虫滋养体期超微结构部位形态的影响。取健康猴(体重5公斤),接种诺氏猴疟原虫(Plasmodium Knowlesi),接种后四天红细胞寄生率达8%,供作试验。给药前取血作对照,静注青蒿酯钠(10毫克/公斤)。

食蟹猴疟原虫红外期裂殖体的组织化学观察

本文对恒河猴肝内食蟹猴疟原虫红外期裂殖体的组织化学成分进行了系统的观察。结果表明,其体内含有糖原、DNA、RNA、蛋白质结合的α-氨基、酪氨酸、色氨酸及组氨酸、碱性蛋白质、网状纤维及胶原纤维、AKP、ACP及ATP酶等生化物质。对各自的定位、含量或活性作了详细描述,并对其生理意义进行了讨论。

感染食蟹猴疟原虫的大劣按蚊血淋巴和胃水解物氨基酸分析

大劣按蚊感染食蟹猴疟原虫B株后第10d,血淋巴内的蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、鸟氨酸、赖氨酸含量均较对照组低。第9d蚊胃水解物分析结果表明,感染蚊胃中的多数氨基酸含量增加,其中缬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸的含量是对照组3倍以上,氨基酸的总量比对照组高70％以上。

食蟹猴疟原虫B株配子体对大劣按纹感染性的活力周期

用食蟹猴疟原虫Ｂ株早期环状体接种１只恒河猴，接种后第２－１２天（血内仅存在１群原虫）测试了由第１－４代裂殖子形成的４代配子体（Ｇ）对大劣按蚊（海南株）感染性的活力周期。结果表明第１－４代裂殖子均形成了一定数量的Ｇ，由裂殖子发育到Ｇ功能成熟（可使蚊感染）各代有差异，第２代Ｇ至少需５５±１ｈ，第３代Ｇ则需６５±１ｈ；发育至７２±４ｈ时活力最旺，Ｇ寿命长者可达１００ｈ；生活期（对蚊有感染力的时间）第１、２代Ｇ约为１２－４２ｈ，第３代Ｇ约为１０－１９ｈ。Ｇ密度与蚊胃卵囊均数不成正比，第１、２代Ｇ对蚊的感染性比第３。

食蟹猴疟原虫B株配子体对中老龄大劣按蚊的感染性

用中老龄（羽化后８．７５—１４．７５和２４．７５日龄）大劣按蚊（海南株）与其４．７５日龄蚊（对照）同时在感染Ｂ株猴疟的同一供血猴上血餐，饱血蚊饲养至第６—８ｄ解剖检查蚊胃、第１２ｄ检查涎腺。结果表明中老龄蚊胃感染率（８５—１００％）与对照（７７—１００％）无显著性差异，涎腺感染率中龄蚊（８３—１００％）与对照（７５—１００％）无显著性差异，胃与涎腺感染率比值中龄蚊（０．９２—１．０）与对照（０．９３—１．０）均很高，中老龄蚊的卵囊均数（７．３—１１５．０）为对照（５．４—８３）的１．Ｏ３—１．５８倍。结果提示Ｂ株猴疟配子体对中老龄大劣按蚊的感染性未下降。感染后的半数存活时间（ＬＴ５０），中龄蚊（１１—１５）比对照（１３—１８）少２—３ｄ。

食蟹猴疟原虫B株配子体对蚊媒感染力的观察

接种食蟹猴疟原虫B株(Plasmodium cynomol-gi bastianellii,简称B株猴疟)子孢子的恒河猴肝细胞内可长期存在休眠体。因此,B株猴疟—按蚊一恒河猴系统对根治药研究有重要价值。传统的观点认为疟原虫成熟配子体在血液内保持对蚊媒的感染力可长达数十日之久。

PCR检测食蟹猴疟原虫的实验研究

目的 建立一种特异、敏感、简捷的PCR检测食蟹猴疟原虫（P.C）的方法。方法 检测样品来自人工接种感染P.C的阳性猴血膜及滤纸血斑。根据P.C SSUrRNA基因序列,设计P.C特异引物Pc1和Pc3,用PCR常规操作对P.C DNA模板扩增。同时用多对间日疟原虫（P.V）特异引物对照比较。结果 从 P.C血样中扩增出 425bp特定扩增带,而P.V红内期和子孢子、恶性疟原虫、伯氏疟原虫、人基因组DNA和健康猴血均未见扩增带;敏感度可检测 1.68 ×10-6的原虫感染水平。同时发现P.C对多对 P.V特异引物均出现阳性扩增带,以往一直未被注意。结论 该方法检测 P.C特异、敏感和简捷,提供了鉴别 P.V与 P.C的准确诊断。建议在 PCR的P.V引物设计和特异性的检测过程,把应用P.C DNA检测列为常规对照,以提高检测质量。

建立疟疾近期复发动物模型的研究 Ⅰ.食蟹猴疟原虫红外期裂殖体发育成熟的非同步性

用引自越南的食蟹猴疟原虫子孢子感染恒河猴,第8d出现原虫血症,原虫密度为17/100白细胞,隔22h后,从肝活体组织中可检查到大量红外期裂殖体,其平均密度为3.74±0.66个/mm^3肝组织,它们绝大多数尚未发育至完全成熟,其分化程度参差不齐,平均直径为34.23±7.28μm,有的甚至近似于发育至第6d的红外期裂殖体,平均直径仅为15.75±2.47μm。结果说明红外期裂殖体发育成熟并非同步。

建立疟疾近期复发动物模型的研究Ⅳ.食蟹猴疟原虫子孢子感染恒河猴的近期复发

按照实验设计，用食蟹猴疟原虫子孢子感染恒河，待原虫血症出现，然后用咯萘啶６ｍｇ／ｋｇ、蒿甲醚１０ｍｇ／ｋｇ和氯喹２０ｍｇ／ｋｇ联合治疗３ｄ，清除红内期原虫，观察１００ｄ内的近期复发情况。如复发则再给予联合治疗。接种子孢子５０个的猴Ｍ１９２和５５×１０＾２个的猴Ｍ１９３无近期复发，而接种子孢子１１×１０＾３个的猴Ｍ１９４于治疗后４７ｄ复发１次。

食蟹猴疟原虫酸性磷酸酶电镜细胞化学研究

利用电镜细胞化学方法对食蟹猴疟原虫红内期酸性磷酸酶进行定位研究．结果发现．酸性磷酸酶广泛定位于疟原虫的食物泡、内质网、核糖体和疟色素上；而一些内含物与红细胞相似的双层膜结构内无ACP活性，不属于食物泡，而是宿主细胞的伪足伸入虫体；并认为ACP是由核糖体转运至食物泡内的；外周胞饮作用和胞口援食可能都是疟原虫红内期的营养方式．而外周胞饮作用可以起主要作用．

食蟹猴疟原虫B株子孢子感染后的虫血症及按蚊血餐感染情况

用食蟹猴疟原虫Ｂ株子孢子感染的６只恒河猴，初发期虫血症自然消长曲线２只猴为双峰形、４只猴为多峰形。虫血症显著期（原虫密度≥２‰）最短者为１３ｄ，最长者为３７ｄ。在虫血症显著期供１１３批（１批／日）蚊（大劣按蚊或斯氏按蚊）血餐，获得感染好的蚊虫（卵囊均数＝５－３２７．７，胃感染率＝６５－１００％）５８批、平均为９．７批。感染好的蚊批分布：双峰形的初峰期为１４．２９％（２／１４），次峰期为８５．７１％（１２／１４）；多峰形的初峰、次１和次２峰期分别为２２．７３％（１０／４４）、４５．５％（２０／４４）和３１．８２％（１４／４４）。结果提示对蚊感染性较强的血餐时间主要分布在次１和次２峰期。

青蒿琥酯对食蟹猴疟原虫在按蚊体内发育的影响

目的 观察青蒿琥酯(Artesunate)对食蟹猴疟原虫在大劣按蚊体内发育的影响。方法 受疟原虫感染实验猴在肌注和静注青蒿琥酯各60mg之前、之后Oh、2h各感染一批大劣按蚊;另取部分药前感染的大劣按蚊在感染后第3天和10.5天吸药血,另设一对照组吸正常猴血。各组实验蚊均在感染后第9天解剖蚊胃和第13天解剖涎腺,观察疟原虫在蚊体内发育情况。结果药前组和药后Oh组的蚊胃及唾腺感染阳性率均为100％,两组蚊胃卵囊平均密度、卵囊平均大小、子孢子平均感染度都无显著性差异(P>0.5);药前组和药后2h组蚊胃卵囊平均密度有显著性差异(P<0.5);大劣按蚊感染后第3天和10.5天吸药血组和吸正常血组,蚊胃卵囊平均密度、卵囊大小、子孢子平均感染度都无显著性差异(P>0.1,P>0.5)。结论青蒿琥酯对食蟹猴疟原虫在蚊体内的配子生殖、孢子增殖及子孢子进入唾腺无直接的抑制作用。

食蟹猴疟原虫实验感染恒河猴后原虫密度消长的观察

目的 探讨食蟹猴疟原虫感染恒河猴后原虫密度消长和抗体滴度变化及相互关系。 方法 食蟹猴疟原虫实验感染恒河猴后 ,在 7年多的时间内 ,定期进行病原学检测和疟疾荧光抗体检测 ,记录分析原虫密度消长和抗体滴度变化等数据。 结果 实验恒河猴接种食蟹猴疟原虫后 ,最早 3d可检出原虫 ,12～ 19d可达到原虫血症高峰期 ,2 483d(时间最长者 )时还可检出原虫 ;荧光抗体试验显示感染第 8d时可检出阳性 ( 1∶ 2 0 ) ,15 8～ 181d达到高峰滴度 ( 1∶ 6 40～ 1∶ 2 5 6 0 ) ,持续 6 0～ 85 d后抗体滴度逐渐下降 ,到实验结束时各猴抗体滴度还保持在 1∶ 40～ 1∶ 16 0。 结论 食蟹猴疟原虫是一种比较理想的实验虫种 ,用它在疟疾研究和抗疟工作中适时的替代间日疟原虫能获得较好的效果。

诱导食蟹猴疟原虫对氯喹产生适应性的初步研究

本研究用食蟹猴疟原虫—猴模型进行。初步结果表明,引自越南的食蟹猴疟原虫对氯喹可产生适应性,它较易于子孢子感染后经诱导而产生。适应性表现为受感染猴原虫再现时,再给服氯喹,随后原虫转阴,但在短间隔期内又见原虫再现。已对氯喹产生了适应性的食蟹猴疟原虫,血传转种给另外的健康猴,排除了红外期引起的复发,原虫再现的现象继续发生。适应氯喹而引起的原虫再现易误认为都是红外期引起的复发。

食蟹猴疟原虫B株配子体对不同龄斯氏按蚊的感染性

试验表明,食蟹猴疟原虫B株配子体,对不同龄斯氏按蚊的感染性存在着差异.随着蚊日龄的增长,感染度下降,尤其在不佳感染时间血餐者,这种差异更为明显.在疟疾试验研究中,以选择3～8日龄斯氏按蚊作为媒介为佳.

食蟹猴疟原虫B株感染对斯氏按蚊寿命的影响

本试验比较了食蟹猴疟原虫Ｂ株感染的（感染组），吸正常猴血的（对照组）及未吸血的斯氏按蚊存活情况。三组总平均寿命分别为２０．７６±９．３５ｄ、２５．５１±９．００ｄ和２２．０４±６．９７ｄ。感染组比对照组总平均寿命缩短４．７５ｄ；对照组比未吸血组平均延长３．４７ｄ；两组均差异非常显著（Ｐ＜０．０１）。结果提示，感染食蟹猴疟原虫的和未吸血的斯氏按蚊寿命均受到影响。

食蟹猴疟原虫B株配子体对不同龄斯氏按蚊的感染性

实验结果表明，食蟹猴疟原虫Ｂ株配子体对不同龄斯氏按蚊的感染性存在着差异，随着蚊龄的增长，感染度下降，尤其在不佳感染时间血餐者，这种差异更为明显。因此，在疟疾实验研究中，以选用３～８日龄斯氏按蚊为佳。