猕猴肉瘤病毒SV40 T-ag-C基因克隆及序列分析

目的对来源于一株自然感染猕猴肉瘤病毒SV40的猴肾细胞培养物进行大T抗原C-羧基端(T-ag-C)基因克隆及核苷酸序列分析。方法采用PCR法分别从一株自然感染SV40病毒的猴肾细胞培养物和SV40776标准株接种的vero细胞培养物提取的总DNA中扩增出441bp的SV40大T抗原C-羧基端(T-ag-C)基因片段,分别将其克隆到PMD18-T载体中,转化至JM109感受态大肠杆菌细胞后,挑取阳性克隆进行测序鉴定,并对获得的目的基因核苷酸序列进行序列分析及同源性分析。结果来源于猴肾细胞培养物的SV40大T抗原片段与本实验室来源于云南野生猴群的猕猴外周血所得到的SV40大T抗原片段同源性为97.31%,与GenBank中登录号为NC_001669.1序列进行比对,同源性为96.33%;与SV40-776标准株接种的vero细胞培养物所扩增的大T抗原片段同源性为97.55%。结论对大T抗原基因克隆和序列分析是了解和掌握SV40病毒分子流行病学及其变异趋势的重要手段。