藏獒IFN-γ基因在毕赤酵母中的表达与抗病毒活性分析

采用毕赤酵母表达系统表达藏獒γ-干扰素(Tibetan mastiff interferon gamma,TmIFN-γ)并分析其生物活性,为抗病毒生物制品的研发与临床应用奠定基础。将构建的TmIFN-γ的真核表达质粒pPIC9k-TmIFN-γ转化至毕赤酵母GS115细胞,用不同浓度的G418筛选得到多拷贝重组菌株;利用甲醇进行诱导表达,以镍层析柱纯化目的蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;通过CCK-8试验检测重组TmIFN-γ蛋白的细胞毒性作用,利用VSV-MDBK系统检测其抗病毒生物活性。结果显示,成功筛选得到高拷贝pPIC9k-TmIFN-γ重组转化毕赤酵母菌株,利用甲醇诱导可获得TmIFN-γ重组蛋白,该蛋白对细胞无毒性,具有显著抗病毒活性,其抗病毒生物效价为1.727×10~5IU/mL。本研究获得了具有抗病毒活性的TmIFN-γ,有助于进一步探索TmIFN-γ的功能和开发新型基因工程抗病毒药物。

西藏牧羊犬——藏獒

在国际权威性的警犬教材的论文中,属于世界猛犬的有西藏牧羊犬、高加索犬、中亚牧羊犬和芬兰犬等,西藏牧羊犬名列众犬之首。由于西藏海拔高、气温低、风沙雪雨变幻无常,自然环境严酷,以及牧羊犬为保护牛羊,长期与兽类斗智斗勇的天职,形成了西藏牧羊犬粗扩、凶猛、灵活、敏捷的特有性。西藏犬的种类很多,但最名贵的当属藏,藏语叫“多启”。

獒吧商会

开“主题吧”在京城并不新鲜,惟独小丽的“獒吧”有镇店神犬卧于大堂之上,让泡吧者“大惊失色”。獒吧既是一个爱犬者的俱乐部。

藏獒肺组织对高原低氧环境的适应特性

通过光镜观察了青海省果洛藏族自治州达日县8只藏獒肺脏的组织结构,并对其高原低氧环境的适应性进行了研究.结果表明:藏獒肺胸膜较厚,其中富含大量胶原纤维和弹性纤维;支气管、细支气管管壁较厚,固有层与外膜有较多弹性纤维;肺呼吸部肺泡管的数量多,每支呼吸性细支气管分出多条宽大的肺泡管;许多肺泡常呈现半充满状态的小囊,分布在肺泡管周围;肺泡隔内毛细血管丰富,并呈扩张状态,管腔内红细胞数量较多.

藏獒精液冷冻过程中pH值及甘油对其活力的影响

为探讨pH值和甘油对藏獒精液冷冻保存前后精子活力的影响，筛选6条种公藏獒在其繁殖季节（9—12月份）以不同pH值梯度（5．5，6．0，6．5，7．0，7．5）稀释液和不同甘油平衡时间（10，20，30，40，50，60，70，80，90min）对藏獒精液进行冷冻，检查精子活力变化。结果表明，在藏獒精液冷冻过程中，pH值为6．5的稀释液中精子在冷冻前后有较高的活力；甘油平衡时间对藏獒精液活力有较大影响，冻前精子活力随甘油作用时间而下降，在甘油平衡时间为20min所得藏獒冻后精子活力效果较好。

藏獒犬11个STR基因座遗传多态性

目的建立犬STR复合扩增体系，为犬个体识别和亲权鉴定提供一种检测方法。方法用自行建立的11个犬STR基因座复合扩增体系，使用AB13130XL遗传分析仪，对107份藏獒唾液DNA样本的扩增产物进行检测及统计学分析。结果除1个基因座杂合度低于60％，其他10个基因座杂合度均高于70％；11个基因座PIC值均在0．6以上；11个基因座中有8个基因座的个体识别率在0．938以上，其余3个基因座均在0．826以上；父权排除率除TETRA为0．267，其余在0．401—0．749之间，偶合机率1．08×10^-18。结论此11个犬STR基因座在藏獒犬中具有较高的个体识别能力，可用于犬类个体识别和亲权鉴定。

藏獒线粒体DNA D-loop区序列测定及其分类地位研究

根据家犬线粒体基因组DNA序列设计引物,获得了藏獒(Tibetan mastiff)线粒体DNA D-loop区全序列,并以灰狼、郊狼作为外类群对藏獒、家犬亚种内6个大型家犬品种进行了系统发育分析。试验结果发现:藏獒线粒体DNA D-loop区序列全长1250 bp,与家犬源序列的同源性为96.06%,其中有20个碱基缺失;系统发育分析发现藏獒、家犬亚种内6个大型家犬品种与灰狼聚为一大类,而郊狼自成一类,说明藏獒与其他家犬品种一样起源于灰狼,是家犬亚种内的一个品种,在分类地位上隶属于食肉目、犬科、犬属、狼种、家犬亚种;在家犬亚种内,藏獒与英国牧羊犬、兰伯格犬聚为一类,而德国牧羊犬与瑞典猎鹿犬、黑俄罗斯更犬聚在一起,再与圣伯纳犬聚为一类,从分子水平上验证了英国牧羊犬等大型犬可能含有藏獒血统的观点。

基于Cytb基因多态性对藏獒群体遗传结构及系统进化的研究

本试验通过对甘肃藏獒和西藏藏獒共70个个体的线粒体Cytb基因进行扩增测序,应用生物信息学软件进行遗传结构和系统进化分析,为藏獒品种资源保护与合理开发利用提供参考依据。结果表明:在所分析的70条藏獒序列中,共检测到6种单倍型,8个多态位点,仅占分析总位点数的0.7%。甘肃藏獒与西藏藏獒的单倍型多样度(Hd)、核苷酸多样度(Pi)、平均核苷酸差异数(K)分别为0.595、0.002 37、2.703和0.674、0.002 51、2.857,即2个藏獒群体的遗传多样性水平相近。2个群体之间存在很强的基因流,未发生遗传分化,变异主要来自群体内部。根据Cytb基因单倍型网络图和系统发育树推断甘肃和西藏地区的藏獒为单一母系起源,逐步形成3个进化分支。

河曲藏獒生长发育的研究

对河曲藏獒初生、断奶、3月龄、6月龄、12月龄、18月龄、24月龄体质量和体尺进行了测定和分析。结果表明:河曲藏獒公犬体质量从3月龄开始极显著地大于母犬(P<0.01),体高从12月龄开始极显著地大于母犬(P<0.01),胸围只在6月龄极显著大于母犬(P<0.01)。在其它生长阶段中,公母犬间无明显差异(P>0.05)。河曲藏獒有较高的平均日增重,公、母犬最大日增重分别为220.66 g,193.66 g,12月龄体质量分别为48.80 kg,44.65 kg。在断奶到6月龄期间加强对藏獒幼犬培育十分重要。

藏獒的研究概况

本文介绍藏獒的培育与繁殖,包括藏獒的管理、饲喂、繁殖性能的研究等;藏獒生长发育的研究;从外形和外貌、毛色、适应性与气质等方面提供了藏獒综合鉴定标准及品种选育研究;对藏獒食欲低下、细小病毒病、犬瘟热、佝偻病、肠套叠、子宫脱出症等病症的治疗与防治做了概述;从藏獒血液核型、血液蛋白质、血液生化指标和参数等方面论述了藏獒的血液学参数研究概况。

甘油浓度和平衡时间对藏獒精液冷冻效果的影响

以藏獒精液为研究对象,观察甘油浓度和平衡时间对对藏獒精液冷冻-解冻后品质的影响。试验表明,甘油浓度为2%和3%时,冷冻-解冻后精子在活力、精子畸形率和顶体完整率方面都显著优于甘油浓度1%和4%(P<0.05),但2%和3%浓度之间无显著差异(P>0.05);精子于甘油中经不同时间平衡后,冷冻-解冻后精子活力和顶体完整率以15 min和30 min显著优于其他平衡时间(P<0.05),但2者之间无显著差异(P>0.05)。精液在甘油浓度为3%、甘油平衡时间为15 min时冷冻效果较好。

不同海拔高度的藏獒肺动脉血管特性及结构

[目的]探讨藏獒肺动脉血管的结构及对高海拔低氧的适应特性。[方法]通过光镜观察及形态学测量对来自青海和甘肃两地藏獒的肺动脉血管的特性及结构进行研究。[结果]藏獒肺动脉分为弹性动脉、肌性动脉和微动脉。肌性动脉又分为中动脉和小动脉。研究表明藏獒肺动脉平滑肌含量并没有随海拔而明显变化。2组藏獒在肺血管平滑肌含量方面差异不显著(P>0.05),但均高于牦牛和驼马。藏獒肺胸膜较厚,胸膜内有大量的胶原纤维和弹性纤维,肺脏表面有许多高低不平的皱襞,而且藏獒相邻肺泡间的肺泡隔内有丰富的毛细血管和大量红细胞。[结论]藏獒肺组织结构是其对高原低氧环境的一种遗传适应,与海拔高度无关。

不同海拔地区藏獒肺组织结构及肺动脉血管壁的比较观察

通过光镜观察及形态学测量方法对青海省果洛藏族自治州达日县(海拔4 000 m左右)及甘肃省兰州地区各5只藏獒肺的组织结构和肺动脉血管壁的特性进行了研究。结果表明,藏獒肺胸膜较厚,其中富含大量胶原纤维和弹性纤维;支气管、细支气管管壁较厚,固有层与外膜有较多弹性纤维;肺呼吸部肺泡管的数量多,每支呼吸性细支气管分出多条肺泡管,肺泡管宽大;许多肺泡常呈现萎陷的小囊,分布在肺泡管周围;肺泡隔内毛细血管丰富,并呈扩张状态,管腔内红细胞数量较多。动脉血管壁测量结果显示,不同海拔地区藏獒肺小动脉中膜肌层厚度与血管外径的百分率差异不显著(P>0.05),但高于牦牛和驼马。

2个中国藏獒群体遗传多样性及遗传分化的研究

本研究以青海土种犬和藏狮犬为对照,采用RAPD技术对河曲藏獒和青海藏獒群体的遗传多样性及遗传分化进行了分析。研究结果表明,河曲藏獒和青海藏獒群体的多态性位点百分率分别为85.53%和98.16%,平均多态性位点百分率为91.85%。藏獒群体遗传变异分析显示两个藏獒群体的有效等位基因数(Ne)、Nei氏平均预期基因杂合度(H)和Shannon遗传信息指数(I)的平均值分别为1.5354、0.3191和0.4807;且两个藏獒群体93.09%的变异来自群体内,仅6.91%变异来自群体间;两个群体间的基因流为3.3679。研究还发现两个藏獒群体之间的Nei氏标准遗传距离(D)为0.0505。本研究结果说明藏獒群体内遗传变异丰富,不同地域的藏獒群体之间存在广泛的基因交流,群体之间遗传分化程度很低,这为藏獒品种资源保护与合理开发利用提供了参考。

pH值和含甘油稀释液平衡时间对藏獒精液冷冻保存活率的影响

试验筛选6条种公藏獒在其繁殖季节9—12月份以不同pH梯度(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5)稀释液和不同甘油平衡时间(10、20、30、40、50、60、70、80min和90min)对藏獒精液进行冷冻,检查冷冻前后活率变化。结果表明:藏獒精子在pH为6.5的稀释液中有较高冷冻前后活率;甘油平衡时间对藏獒精液活率有较大影响,以甘油平衡时间为20min所得藏獒冷冻精液的效果较好。

藏獒和松狮犬犬瘟热的病理学观察

对藏獒和松狮犬的犬瘟热自然感染病例进行了临床观察、尸体剖检以及病理组织学检查。结果显示,病毒主要侵害犬的呼吸、消化、神经、心血管和免疫系统。肺脏呈严重的间质性肺炎和支气管肺炎的变化,肺泡壁结构消失,肺泡腔内有大量巨噬细胞;胃、肠黏膜充血、水肿,上皮细胞坏死、脱落;脑膜和实质充血、水肿,可见微血栓形成;心脏明显扩张,右心肥大,心室腔内有鸡脂样凝血块;免疫器官受损严重,脾脏和淋巴结均呈明显退行性病变。在胃腺上皮细胞、肝细胞、肺泡上皮细胞和细支气管上皮细胞内发现嗜酸性的核内或胞浆包涵体。

不同蛋白质来源和蛋白质水平对幼年藏獒适口性的影响

试验选取5种动物性蛋白质原料(鸡肉粉65、鸡肉粉80、猪肉粉80、鱼粉65、鸭架粉65)和2种植物性蛋白质原料(豆粕、玉米蛋白粉)配制成不同蛋白质来源的日粮8种,并配制4种不同蛋白质水平(19.92%、23.24%、27.90%、34.28%)日粮,比较究了幼年藏獒对不同蛋白质来源和不同蛋白质水平适口性的差异。试验选取健康幼年藏獒16只,随机分成2组,每组8个重复,每个重复1只。采用国际通用的适口性比较方法——双盆法,记录每只藏獒每日采食量和首选日粮,并计算出采食率。结果表明,玉米蛋白粉日粮的采食率略高于豆粕日粮,但差异不显著(P>0.05)。猪肉粉80日粮的采食率极显著高于鸡肉粉65(P<0.01);鸡肉粉80日粮的采食率极显著高于鸡肉粉65(P<0.01);鸡肉粉65与鱼粉65及鸭架粉65日粮适口性无明显差异(P>0.05)。不同蛋白质含量,27.90%日粮采食率极显著高于23.24%日粮(P<0.01),且显著高于34.28%日粮(P<0.05)。由此可以得出幼年藏獒对植物性蛋白质玉米蛋白粉和豆粕的适口无明显差异,动物性蛋白质高蛋白含量的鸡肉粉80和猪肉粉80适口性较好。蛋白质水平27.90%的犬粮与23.24%和34.28%相比,对幼犬适口性更佳。

不同剂型及稀释精液平衡时间对藏獒冻精品质的影响研究

为了探讨每剂含不同前进运动精子数（≥1 000万个和≥2 000万个）和稀释精液不同平衡时间（1 h、2 h、3.5 h）对藏獒冻精品质的影响,试验比较了0.25 mL细管剂型藏獒冻精解冻后精子活力、精子顶体完整率、精子畸形率、精子37℃存活时间。结果表明：每剂含前进精子数≥2 000万个与≥1 000万个相比,藏獒冻精解冻精子活力、精子顶体完整率、精子畸形率差异不显著（P〉0.05）;而每剂含前进运动精子≥2 000万个组的藏獒冻精解冻后37℃存活时间优于每剂含前进运动精子数≥1 000万个组,且差异显著（P〈0.05）。藏獒稀释精液平衡2 h组的冻精活力显著高于平衡1 h组和3.5 h组（P〈0.05）,而平衡1 h组和3.5 h组间差异不显著（P〉0.05）。冻精顶体完整率以平衡2 h组最高,为（41.00±1.47）%,与平衡3.5 h组间存在显著差异（P〈0.05）。平衡2 h组的冻精畸形率低于平衡1 h组和3.5 h组。说明藏獒0.25 mL细管剂型以每剂含前进运动精子数≥2 000万个,稀释精液平衡时间以2 h为宜,可获得较好的冷冻效果。

不同温湿指数对藏獒外周血淋巴细胞凋亡及HSP70蛋白表达的影响

选择体重、年龄相近的藏獒10只,研究不同温湿指数(TH I)对藏獒的生理常数、外周血淋巴细胞凋亡及HSP70蛋白表达的影响。研究结果表明:(1)夏季高温季节,随TH I升高,藏獒的直肠温度和呼吸频率也逐渐升高,极显著高于春季非热应激组;(2)夏季高温热应激显著增加了藏獒外周血淋巴细胞的凋亡率,淋巴细胞早期凋亡率在TH I为83.58时达到最高,与非热应激组相比差异极显著;(3)夏季高温热应激诱导外周血淋巴细胞HSP70蛋白的表达,与非热应激组相比差异极显著。结论:(1)夏季高温热应激显著提高了藏獒的直肠温度和呼吸频率;(2)热应激诱导藏獒外周血淋巴细胞发生凋亡;(3)热应激诱导藏獒外周血淋巴细胞HSP70蛋白过表达。

藏獒急性异物性肺炎病例的病理诊断报告

异物性肺炎（Foreign body pneumonia）又称为吸入性肺炎、坏疽性肺炎,是一种因异物误入肺部而引发的以肺组织坏死为特征的肺炎。一般发病经过为异物先引起支气管肺炎,后继发腐败菌感染使肺组织腐败分解。临床表现为呼吸极度困难、鼻腔流出脓性恶臭鼻液。此病发病急、发展迅速,常急剧恶化,导致机体呼吸衰竭或继发呼吸道及其他脏器的感染而死亡,治愈率低,多预后不良。藏獒发生异物性肺炎的病例还未见报道。