响应面优化提取玄参碱溶性多糖及对高眼压小鼠视网膜的影响

采用单因素及响应面优化微波提取玄参碱溶性多糖(简称多糖)工艺,并对高眼压症小鼠进行21天灌胃不同剂量多糖后测定小鼠眼压变化和通过研究其视网膜结构变化、氧化反应和炎症反应初步探索其机制。结果表明多糖的最佳提取条件为:微波功率400 W,微波时间16 min,微波温度72℃,NaOH浓度5.5%,并在料液比1/25(g/mL),在此条件下多糖提取率为18.75 mg/g。多糖可以降低小鼠的眼压和有效保护视网膜结构,其机制是通过提高SOD、GSH-px抗氧化酶类活性来提高视网膜抗氧化能力和抑制TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子的表达,是一种潜在的功能性食品添加剂。

基于高通量测序技术的玄参对大鼠有效性和安全性研究

目的研究玄参干预对大鼠基因表达谱的影响,探讨玄参干预对大鼠的潜在保护和毒性作用及其机制。方法将20只雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为玄参组和空白组,每组10只。玄参组大鼠给予玄参提取物1350 mg·kg-1灌胃,空白组灌胃给予等容积0.9%氯化钠溶液,均为1次/d,连续15 d。分别于灌胃15 d后,检测肝脏组织的基因表达谱,通过时间序列趋势分析软件(Short Time-Series Expression Miner,STEM)筛选具有趋势表达的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并对其进行基因本体论(Gene Ontology,GO)功能注释和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析。结果玄参组筛选76个DEGs,其中28个上调,48个下调,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。KEGG通路分析结果显示,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、无翅型小鼠乳腺肿瘤病毒整合位点(Wingless-Type MMTV Integration Site Family,Wnt)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)、非受体酪氨酸激酶家族-信号转导子和转录激活子(Janus Kinase-Signal Transducer and Ac-tivator of Transcription,Jak-STAT)、核因子激活的B细胞的κ-轻链增强(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、Toll样受体(Toll-like receptor)、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)、催产素(Oxyto-cin)、神经生长因子受体(TNFRSF16)相关蛋白1[nerve growth factor receptor(TNFRSF16)associatedprotein 1,Ngfrap1]和神经营养因子受体相关死亡结构域(neurotrophin receptor associated death domain,Neurotrophin)这9条信号通路,包含Mecom、Amhr2、Pias2、Ticam2、Cyp7a1、Ngfrap1和Nfatc4这7个靶基因。经查阅文献,Mecom可能为表征玄参对大鼠潜在保护作用的靶基因,而另外6种则可能为表征玄参对大鼠潜在毒性作用的靶基因。结论玄参作用的两重性,既可对机体产生预防和治疗作用,也会产生潜在的不良反应。

玄参水提取物对高糖暴露条件下INS-1细胞AMPK的激活作用

目的研究玄参水提取物(AESN)对高糖(HG)条件下INS-1细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性的影响。方法将INS-1细胞培养于HG培养基中,并给予不同浓度AESN共孵育处理;利用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测AESN干预对细胞增殖/活力和焦亡小体形成的影响,使用Western blotting法观察AESN对细胞内AMPK表达及磷酸化水平的影响;利用时间分辨-荧光共振能量转移(TR-FRET)实验检测AESN对AMPK激酶活性的影响。结果CCK-8检测结果显示同正常培养条件相比,HG暴露显著降低INS-1细胞增殖/活力并增加焦亡小体形成数量,Western blotting检测结果表明HG暴露可导致细胞内AMPK磷酸化水平下降;而AESN共孵育可呈浓度依赖性地增加INS-1细胞增殖/活力、抑制焦亡小体形成并激活AMPK。TR-FRET实验结果表明,AESN可浓度依赖性增加AMPK激酶活性。结论AESN对HG暴露条件下INS-1细胞AMPK具有激活作用。

贝莱斯芽孢杆菌对玄参根腐病的田间防效

为研究玄参根腐病的生物防治措施,以贝莱斯芽孢杆菌为供试材料,通过在定植期、苗期和营养生长前期使用,研究不同处理方式对玄参根腐病的防治效果。结果表明,贝莱斯芽孢杆菌对玄参根腐病防治效果较好,其防治效果受使用时间影响较大,定植期使用效果优于苗期和营养生长前期。使用次数对防治效果影响较大,同在定植期使用,追施2次效果优于1次。在连续使用3次的情况下,其田间防效最高可达77%。该研究可为玄参根腐病的有效防控提供指导依据。

玄参提取物调控circ_0038467/miR-495对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的:探讨玄参提取物对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响及作用机制。方法:采用肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞建立细胞损伤模型并给予不同剂量玄参提取物处理。si-NC、si-circ_0038467分别转染肺泡上皮细胞,1×108 CFU/ml肺炎链球菌处理,pcDNA-circ_0038467转染肺泡上皮细胞,40µg/ml玄参提取物与1×108 CFU/ml肺炎链球菌处理;MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;ELISA检测IL-6、IL-10水平;qRT-PCR检测circ_0038467、miR-495表达;双荧光素酶报告实验检测circ_0038467与miR-495的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase3蛋白表达。结果:玄参提取物可浓度依赖性地增强肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞活力(P<0.05),并提高miR-495表达和IL-10水平(P<0.05),而降低circ_0038467表达、IL-6水平、细胞凋亡率和Cleaved-caspase3蛋白表达(P<0.05);转染si-circ_0038467可促进miR-495表达(P<0.05),提高细胞活力和IL-10水平(P<0.05),降低IL-6水平、细胞凋亡率和Cleaved-caspase3蛋白水平(P<0.05);circ_0038467可靶向调控miR-495表达及活性;转染pcDNA-circ_0038467可减弱玄参提取物对细胞增殖、凋亡及炎症的作用。结论:玄参提取物可通过调控circ_0038467/miR-495表达促进细胞增殖,抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤。

地黄配伍玄参对糖尿病肾病大鼠微循环障碍的影响

目的:研究地黄玄参配伍对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护机制。方法:选择40只SD雄性大鼠,随机选取7只作为空白对照组,其余22只采用高脂饲料喂养联合链脲佐菌素腹腔注射构建糖尿病肾病大鼠模型。造模成功后,随机分为模型组(10只)、地黄玄参组(6只)、二甲双胍组(6只);观察各组大鼠治疗前后一般情况,并测定治疗后各组大鼠体质量、血糖、血肌酐、血尿素氮及血脂的变化。结果:与空白对照组比较,模型组体质量下降,血糖、血肌酐、血尿素氮、血脂均明显升高;与空白对照组相比,模型组及给药组的体质量均降低(P<0.001),血糖、血肌酐、血尿素氮、血脂均升高(P<0.05);与模型组相比,给药组体质量升高(P<0.05);给药组间体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05);血糖、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮及肾脏指数给药组均低于模型组(P<0.05),给药组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:地黄配伍玄参能够纠正实验性糖尿病肾病大鼠的糖、脂代谢紊乱,减轻微循环障碍,保护肾功能,减轻糖尿病肾病大鼠肾损害。

玄参对照提取物的PULCON法定值研究和其在中药复方增液汤中的应用

目的采用氢核磁脉冲宽度定量法(Pulse length based concentration determination,PULCON)对玄参对照提取物中的哈巴苷、安格洛苷C和哈巴俄苷进行定性及定值研究,探讨玄参对照提取物代替相应对照品在提升玄参复方制剂质量控制水平的可行性。方法采用Bruker Avance III HD 700超导核磁共振波谱仪,以DMSO-d6为溶剂,苯甲酸为外标物,利用PULCON法比较苯甲酸定量峰(δ_(H)7.94)的峰面积和不同批次玄参对照提取物中3种化学成分的不同定量峰(哈巴苷δ_(H)6.24、安格洛苷Cδ_(H)7.08和哈巴俄苷δ_(H)5.97)的峰面积,测定不同批次中3种成分的含量,并采用配对t检验将测定结果与高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)的定值结果进行比对。分别以已知含量的玄参对照提取物和3个相应对照品为对照,建立增液汤的HPLC含量测定方法,采用配对t检验对2种方法所得结果进行比较。结果采用PULCON法测得3种成分的含量与HPLC法的定值结果基本一致,以玄参对照提取物为对照,3种成分的线性关系相关系数均大于0.9997,平均回收率为99.36%~102.31%。t检验结果显示,2种方法测定的哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷含量P值分别为0.279、0.105、0.623,均大于0.05,表明2种含量测定方法差异无统计学意义。结论PULCON法可在无对照品且无需分离的条件下,直接、快速、准确地分析玄参对照提取物成分的物质组成和含量,并将已标定准确含量的玄参对照提取物用于玄参复方制剂的质量控制,为中药对照提取物在中药质量研究中的应用提供了科学依据。

张锡纯应用玄参撷菁

张锡纯临床应用玄参经验丰富,认为玄参性凉多液而不寒,尤善滋阴,为妇人产乳之要药,能清虚热、滋肾阴治疗产后温病,补肾精、滋阴液治疗产后少乳,且具有清补肾经疗虚热、合肺之性治肺病、补肝益瞳以明目、软坚散结消瘰疬之功。用量以三钱到一两居多,用法多样。同时,张锡纯也十分重视玄参的配伍,如透热之玄参配石膏,养阴之玄参配黄芪,明目之玄参配枸杞子、柏子仁,散结之玄参配牡蛎。张锡纯在《医学衷中参西录》一书中对玄参的用量用法、主治范围及药物配伍都作了详尽的阐述,扩展了后世医家的用药思路,对临床玄参的使用颇具指导意义。

Cocktail探针药物法评价玄参对大鼠细胞色素P450酶的影响

采用Cocktail探针药物法研究玄参对大鼠4种细胞色素P450(CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP1A2)活性的影响.24只健康雄性SD大鼠(Sprague-Dawley rat)随机分为三组:A组为多剂量组,连续7 d给予150 mg/kg玄参.B组为单剂量组,第7 d给予150 mg/kg玄参.C组为对照组.第7 d,各组在给予玄参30 min后,再给予4种探针药物的混合溶液,其中咪达唑仑3 mg/kg、美托洛尔20 mg/kg、氯沙坦5 mg/kg、非那西汀5 mg/kg,分别用以评价CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP1A2的活性.根据设定的时间点收集大鼠血浆样品,处理后的样品采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法测定样品中4种探针药物的浓度.结果可见,玄参对大鼠体内氯沙坦和非那西汀的药代动力学参数无显著影响.单剂量的玄参导致咪达唑仑代谢减慢,多剂量给予的玄参显著诱导美托洛尔代谢.玄参对CYP2C9和CYP1A2的酶活性无明显影响,可以抑制CYP3A4或诱导CYP2D6的酶活性.

苦玄参种子的乙醇提取物的抗炎机制研究

目的对苦玄参种子的乙醇提取物进行体外活性研究。方法在适宜条件下用RAW264.7细胞构建诱导炎症模型脂多糖(LPS),采用MTT法测定细胞活性,采用Griess法和ELISA法分别测定炎症因子TNF-α,IL-6和NO的释放量,采用Westernblot法测定p65、p-IκB、p38、JNK、ERK1/2蛋白的表达水平。结果苦玄参种子乙醇提取物能显著抑制LPS刺激RAW264.7细胞分泌的NO水平,且呈量效关系。抗炎活性表明,苦玄参种子乙醇提取物能显著下调炎症因子IL6、TNF-α的合成,并抑制了RAW264.7细胞中NF-κB信号通路中p-IκB-α和p65的磷酸化表达,以及MAPKs信号通路中p38、JNK、ERK1/2的磷酸化表达。结论苦玄参种子提取物具有一定的抗炎作用。

柴草瓜果 第95讲 玄参的医用处方、单验方和茶饮食疗方法

玄参为“清上彻下,滋阴降火”要药,善于“清咽喉之肿痛,泻无名之火邪”,故凡阴虚证、热毒证均可应用,尤其是邪热内盛、肾阴不足之证更为必用之品。因玄参既能清热凉血,又能滋阴降火,故临床常用于阴虚眼睛干涩、干咳、口干舌燥、咽喉不适等证的辅助治疗。文章简述玄参常用的治五官病证方、治瘰疬痰核癌瘤方、治痈疽疮疡方及其他病证方,引用诸多典籍,记载着方剂的功效、用法与用量,归纳临床配伍要点,并介绍茶饮方、泡酒方及膳食方的临床应用。

苦玄参药材中苦玄参苷ⅠA和ⅠB的含量分析

采用HPLC法对不同产地的苦玄参药材主成分苦玄参苷ⅠA和ⅠB的含量进行分析,发现苦玄参苷ⅠB含量高于苦玄参苷ⅠA;色谱条件:Waters C18(4.6mmi.d.×250mm,5μm)色谱柱,流动相∶乙睛∶水=36?64(体积比),流速为0.8mL/min,检测波长为264nm。苦玄参苷ⅠA、ⅠB分别在0.05～0.50mg/mL和0.072～0.720mg/mL与峰面积有良好的线性关系。苦玄参苷ⅠA的线性回归方程Y=13658X-92.72(r=0.9993),平均回收率为100.58%(n=5),相对标准偏差(RSD)为1.86%;苦玄参苷ⅠB的线性回归方程Y=5258.9X-41.01(r=0.9994),平均回收率为101.15%(n=5),相对标准偏差(RSD)为1.31%。该研究为制定苦玄参药材质量检测标准提供了简便、快速、准确的方法。

玄参化学成分及药理作用的研究进展

玄参作为大宗常用药材之一,具有清热养阴和软坚散结等功效。现代药理学研究表明,其活性成分主要有环烯醚萜苷、苯丙素、黄酮、多糖、三萜、倍半萜、苯甲醇苷及苯乙醇苷等,具有保护心血管系统、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降血糖和保肝等作用。本文通过分析归纳近年来与玄参相关的文献及报道,对其化学成分及药理作用进行综述,旨在阐明玄参的药用价值,为其临床合理用药提供参考。

产地加工与炮制一体化工艺对玄参质量的影响

目的比较产地加工与炮制一体化加工工艺和传统加工方法对玄参质量的影响。方法用硅胶G薄层板对不同玄参进行定性鉴别;对不同玄参浸出物、灰分、水分以及多糖、哈巴苷、哈巴俄苷、桃叶珊瑚苷、安格洛苷C、毛蕊花糖苷、肉桂酸的含量进行测定;用二甲苯诱导小鼠进行耳廓肿胀和醋酸扭体实验,研究不同玄参的镇痛抗炎作用。结果2种玄参的鉴别项和检查项均符合2020年版《中华人民共和国药典》相关规定;一体化玄参的多糖、桃叶珊瑚苷、肉桂酸含量高于传统玄参;与空白组比较,2种玄参饮片均具有镇痛抗炎的效果,药效间的差异无统计学意义。结论一体化玄参的质量评价和功效均与传统玄参相似,值得推广应用。

玄参升麻汤的组方原则及其学术价值初探

首见于《卫生宝鉴》的“玄参升麻汤”,药物组成包括玄参、升麻、白僵蚕、牛蒡子、连翘、防风、黄芩、黄连、桔梗、甘草等10味药物。组方原则可以归纳为“辛散咸软,祛风痰,解热毒”。该组方原则反映了咽喉病的病因病机不外“风”“火”“痰”郁结于咽喉所致,也体现了咽喉病风邪宜散,实火宜泻,虚火宜清降,痰、火、瘀胶结者宜化痰、降火、散结兼用的治疗原则,对于咽喉病的防治有积极的指导作用和学术探讨价值。

基于代谢组学探讨玄参-苍术联合二甲双胍治疗2型糖尿病大鼠作用机制

目的:采用代谢组学方法分析玄参-苍术联合二甲双胍治疗2型糖尿病大鼠的作用机制。方法:采用高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozocin,STZ)建立2型糖尿病大鼠模型,分为空白组、模型组、阳性组和治疗组。治疗后6周,检测各组大鼠体质量、血糖、丙氨酸氨基转移酶、空腹血清胰岛素、核转录因子(NF-κB)、大鼠隐热蛋白(NLRP3)等指标水平,初步评价玄参-苍术联合二甲双胍对2型糖尿病大鼠的治疗作用。进一步采用UPLC-MS/MC非靶向代谢组学揭示各组之间的代谢谱,筛选差异代谢物并进行鉴别。结果:与阳性组比较,治疗组改善临床症状及降低餐后高血糖的作用更为明显(P﹤0.05),且可显著降低NF-κB和NLRP3水平(P﹤0.01)。通过代谢组学筛选出36种差异代谢物作为玄参-苍术联合二甲双胍治疗糖尿病作用机制的相关血清潜在生物标志物。D-谷氨酰胺和D-谷氨酸是玄参-苍术联合二甲双胍治疗糖尿病涉及的相关的代谢通路。结论:玄参-苍术联合二甲双胍治疗糖尿病有效,推测其机制是通过调节D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢通路基因的表达以维持“谷氨酰胺-谷氨酸”动态平衡,抑制NF-κB/NLRP3通路激活,进而提高机体对胰岛素敏感性、调节糖脂代谢紊乱、减轻炎症反应。

HPLC双波长切换法同时测定不同产地玄参中哈巴苷与哈巴俄苷的含量

目的建立HPLC双波长切换法同时测定玄参中哈巴苷、哈巴俄苷的含量,比较不同产地玄参间的差异,对玄参质量进行评价。方法玄参50%甲醇提取物的分析采用Symmetry C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.03%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长210、280 nm。采用SPSS 27.0软件进行方差、聚类和相关性分析。结果哈巴苷、哈巴俄苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.9996),平均加样回收率101.20%、97.97%,RSD 1.63%、0.99%。产自四川成都市彭州市的玄参哈巴苷含量、哈巴苷和哈巴俄苷总量最高,产自河南宋河镇张庄的玄参哈巴俄苷含量最高。聚类分析将19个产地的玄参样品分为4类。哈巴苷含量与经纬度呈负相关,与海拔呈正相关。哈巴俄苷含量与经纬度呈正相关,与海拔呈负相关。结论该方法简便、准确,可用于玄参的质量控制。不同产地玄参的哈巴苷、哈巴俄苷及其总量存在差异。

响应面法优化玄参种芽超声提取哈巴苷、哈巴俄苷工艺

目的:优化玄参种芽提取工艺。方法:建立玄参种芽中哈巴苷、哈巴俄苷含量测定和方法,采用单因素试验,考察甲醇浓度、料液比和浸泡时间3个因素对哈巴苷、哈巴俄苷含量及总含量的影响。结合Box-Behnken响应面法,以哈巴苷、哈巴俄苷总含量为响应指标,考察甲醇浓度、料液比和浸泡时间3个因素对提取工艺的影响。结果:哈巴苷、哈巴俄苷分别在15.63~500.00μg/mL、10.63~340.00μg/mL范围内线性关系良好,哈巴苷、哈巴俄苷平均回收率分别为100.24%、100.56%,RSD分别为1.98%、1.19%。根据回归方程,结合实际操作确定的最佳提取工艺为甲醇浓度44%、料液比1∶51、浸泡25 min,理论总含量为1.84%。结论:甲醇浓度、料液比和浸泡时间对玄参种芽提取有显著影响,得到的工艺稳定可重复,与理论值接近,可为玄参种芽提取技术规范与标准提供理论基础。

玄参桔梗汤合止嗽散联合孟鲁司特钠治疗小儿上气道综合征疗效分析

目的:探讨玄参桔梗汤合止嗽散联合孟鲁司特钠咀嚼片治疗小儿上气道综合征的疗效。方法:选取80例上气道综合征患儿作为观察对象,收集时间为2021年9月到2023年1月,均符合中医辨证风痰证,通过随机数字表法划分成两组,即试验组与对照组,每组各有40例。试验组和对照组分别采用口服玄参桔梗汤合止嗽散联合孟鲁司特钠咀嚼片以及单独服用孟鲁司特钠咀嚼片治疗。持续治疗4周后对疗效进行评价。结果:试验组总有效率高于对照组(95.00%VS 77.50%,P<0.05)。两组患儿接受治疗之后的中医证候积分对比结果中,积分均有降低,而试验组在咳嗽、鼻塞以及咳痰等方面所起到的效果都要比对照组更好(P<0.05)。两组病例接受治疗后咳嗽视觉模拟评分(VAS)均降低,经对比试验组的效果要比对照组更好,且差异具备显著性(P<0.05)。结论:玄参桔梗汤合止嗽散联合孟鲁司特钠治疗小儿上气道综合征确有明显疗效,鼻咽部症状均得以减轻,在临床治疗中值得推广应用。

基于质体基因组学方法研究广义玄参科的系统发育

该研究利用GenBank数据库已公开发表的玄参科及相关类群的107属129个物种的质体基因组数据对广义玄参科的系统发育关系进行了分析。该文利用蛋白质编码基因构建了矩阵,并采用最大似然法及贝叶斯推断重建系统发育树。基于两种分析方法获得的系统发育树的拓扑结构完全一致且分辨率及支持率较高。在ML树中,总分支数为129个,其中支持率≥70%的分支数目为123个。结果表明:(1)广义玄参科不是一个单系类群,隶属于广义玄参科的51个物种(37属)分散于列当科、泡桐科、美丽桐科、通泉草科、母草科、狭义玄参科和车前科。(2)狭义玄参科为单系类群,除原隶属于广义玄参科的Bontia、Calamphoreus、Diocirea、Eremophila、Glycocystis、Leucophyllum、玄参属和毛蕊花属外,还包括了原隶属于马钱科的醉鱼草属和原隶属于苦槛蓝科的苦槛蓝属。(3)唇形目为一个单系,目下共形成了14个支持率高的单系分支,对应于14个科(其中美丽桐科和胡麻科仅包括一个物种,不包括在内),科间关系得到较好的解决,木犀科为最早分化出来的类群,其余的类群共同组成核心唇形目。在核心唇形目中,类群分化的次序依次为苦苣苔科、车前科、玄参科和母草科,其余的科聚成两个大的分支。其中,一个大分支包括5个科,紫葳科、马鞭草科和胡麻科形成中等支持率的一个亚支,其中紫葳科、马鞭草科为姐妹群;爵床科和狸藻科亦形成中等支持率的一个亚支;另一个大分支包括了6个科,类群分化的次序依次为唇形科、通泉草科、美丽桐科+透骨草科,泡桐科和列当科为姐妹群,为较进化的类群。该研究结果表明,传统意义上的玄参科不是一个自然类群,包括的种属分散于唇形目;质体基因组适用于解决广义玄参科的系统发育关系,有待于扩大样本进一步研究。