玉叶金花苷酸甲酯抗炎、镇痛、抑菌作用研究

目的研究玉叶金花苷酸甲酯的抗炎、镇痛、抑菌作用。方法以二甲苯致小鼠耳肿胀模型观察其抗炎作用;通过醋酸致小鼠扭体实验及热板法实验观察其镇痛作用;研究玉叶金花苷酸甲酯对7种常见细菌的抑制效果,采用纸片扩散法观察抑菌圈直径,采用连续稀释法测定最低抑菌质量浓度(MIC)。结果玉叶金花苷酸甲酯的中、高剂量(0.10、0.15g/kg)能显著减轻二甲苯致炎小鼠的耳肿胀度(P<0.05);对于由醋酸引起的小鼠扭体反应,玉叶金花苷酸甲酯各剂量组与空白组比较,有显著性差异;在小鼠热板实验中,与空白对照组相比,玉叶金花苷酸甲酯中、高剂量(0.10、0.15g/kg)对热刺激引发的小鼠痛反应时间有明显的延长作用;玉叶金花苷酸甲酯对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌均有抑制作用,其MIC分别为2.5、10、0.312 5、1.25、1.25、10、0.625 mg/mL。结论玉叶金花苷酸甲酯具有明显的抗炎、镇痛及抗菌作用。

玉叶金花苷酸甲酯对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO分泌量的影响

目的:研究玉叶金花苷酸甲酯对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NO分泌量的影响。方法:采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型,利用NO试剂盒检测NO分泌量。结果:玉叶金花苷酸甲酯能够显著减少LPS诱导的RAW264.7细胞NO的产生和释放,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:玉叶金花苷酸甲酯可能通过减少NO的释放量而发挥抗炎作用。

玉叶金花苷酸甲酯在大鼠体内的药代动力学研究

目的:研究玉叶金花苷酸甲酯在大鼠体内的药代动力学。方法:采用以栀子苷为内标的HPLC法,作为检测大鼠血浆中玉叶金花苷酸甲酯含量测定的方法,色谱条件为:Diamonsil C18(2)色谱柱(150mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇∶0.5%醋酸水溶液(30∶70);流量为1.0 mL·min-1;检测波长为238 nm;柱温为30℃。以DAS 2.0软件对玉叶金花苷酸甲酯一次性静脉注射给药后,大鼠体内的平均血药浓度-时间数据进行隔室模型拟合。结果:大鼠静脉注射MU后,以二室模型(权重为1)计算血药浓度与实测值契合较好,优于其他模型。分布半衰期(t1/2α)为9.892 min,消除半衰期(t1/2β)为55.384 min。结论:检测玉叶金花苷酸甲酯建立的方法简便、准确、稳定,可用于Mussaenoside的药物代谢动力学研究;MU在大鼠体内分布较快,在大鼠体内主要以消除过程为主,代谢速度中等。

HPLC法测定玉叶金花中玉叶金花苷酸甲酯的含量

目的建立玉叶金花药材中玉叶金花苷酸甲酯含量测定的方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil C18(2)(5μm,150mm×4.6mm),流动相条件为甲醇-0.5%冰醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长265nm;柱温25℃。结果玉叶金花苷酸甲酯进样量在1.26～20.10μg线性关系良好;平均回收率为97.64%,RSD值为1.23%(n=6)。结论建立的方法测定快速,定量准确,重复性、稳定性较好,回收率高,可作为玉叶金花药材玉叶金花苷酸甲酯含量测定的方法。

玉叶金花化学成分研究

目的研究玉叶金花的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱对玉叶金花进行分离纯化,通过波谱解析和理化性质对结构进行鉴定。结果从玉叶金花三氯甲烷部位和乙酸乙酯部位分离鉴定了8个化合物:β-谷甾醇(1),熊果酸(2),乙基降麦角甾烯醇(3),月桂醇(4),东莨菪内酯(5),水杨酸(6),玉叶金花苷酸甲酯(7),山栀子苷甲酯(8)。结论化合物3~6均为首次从该植物中分离得到。

HPLC法同时测定壮药玉叶金花中9个成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定壮药玉叶金花中山栀苷甲酯、玉叶金花苷酸甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸及4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸9个成分的含量。方法:采用CAPCELL MGⅡC_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长254 nm,柱温35℃,进样量10μL。结果:玉叶金花中9个成分在各自的线性范围内(新绿原酸0.151~189.2μg·mL^(-1),山栀苷甲酯0.768~960.4μg·mL^(-1),绿原酸0.775~968.7μg·mL^(-1),隐绿原酸0.886~1 107μg·mL^(-1),玉叶金花苷酸甲酯0.734~917.0μg·mL^(-1),8-O-乙酰山栀苷甲酯0.795~993.5μg·mL^(-1),3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸0.872~1 090μg·mL^(-1),3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸0.788~985.3μg·mL^(-1)和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸0.767~958.9μg·mL^(-1))均呈良好的线性关系,平均加样回收率、精密度、重现性和稳定性均符合有关规定。样品中9个成分的含量分别为新绿原酸0.30~1.57 mg·g^(-1),山栀苷甲酯0.34~5.20 mg·g^(-1),绿原酸0.34~5.84 mg·g^(-1),隐绿原酸0.32~2.26 mg·g^(-1),玉叶金花苷酸甲酯0.05~21.63 mg·g^(-1),8-O-乙酰山栀苷甲酯0.07~18.93 mg·g^(-1),3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸1.02~4.21 mg·g^(-1),3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸0.39~5.77 mg·g^(-1),4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸1.38~5.25 mg·g^(-1)。结论:该方法可用于玉叶金花中9种成分的含量测定。

UPLC-MS/MS多组分快速测定结合化学模式识别的玉叶清火片质量控制研究

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定玉叶清火片中10种指标成分(京尼平苷酸、绿原酸、山栀苷甲酯、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、栀子苷、玉叶金花苷酸甲酯、β-蜕皮甾酮、穿心莲内酯、蟛蜞菊内酯、脱水穿心莲内酯)的含量,结合化学模式识别方法对其进行系统、全面和科学的质量评价。方法安捷伦Zorbax SB C18柱(50 mm×3.0 mm,1.8μm);流动相为甲醇-0.1%乙酸(含0.02 mol/L乙酸铵)水溶液,梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min;质谱采用ESI正、负离子同时采集,多反应监测(MRM)模式扫描,并对定量测定结果进行聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),综合评价其质量的差异性。结果在优化的色谱质谱条件下,10种成分分别在0.3525~14.1000、5.402~270.100、0.2058~8.2320、1.050~42.020、4.020~160.800、4.328~173.100、2.044~204.400、2.251~225.000、0.2328~9.3120、4.708~188.300μg/mL线性关系良好(r>0.9991),平均加样回收率95.02%~99.66%(RSD<3.0%);定量分析结果表明大多数批次药物质量较为稳定;但通过CA和PCA均发现不同批次药品质量之间仍然存在微小差异,最后通过OPLS-DA筛出引起批次间质量差异的6个标志性成分,分别是穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、玉叶金花苷酸甲酯、山栀苷甲酯、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、绿原酸。结论实验建立的方法简便、灵敏、高效,可用于玉叶清火片中多种主要活性成分的快速测定;测定结果结合化学模式识别技术可从整体上综合评价药物质量,为玉叶清火片的质量控制研究提供新的科学依据和数据处理方法。