王枣子总黄酮影响佐剂性关节炎大鼠病理的分子机制研究

课题组前期研究发现宿州地方特色药材王枣子中总黄酮(total flavonoids of Isodon amethystoides,TFIA)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)具有一定的治疗作用,并且这种治疗作用可能是通过对miR-152表达的上调实现的,该文进一步研究TFIA对AA大鼠病理机制影响的分子机制。采用完全弗氏佐剂制备AA大鼠,TFIA灌胃治疗,采用Real-time qPCR检测TFIA灌胃治疗对AA大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(fibroblast like synoviocytes,FLS)中miR-152、甲基化酶DNMT1及甲基化结合蛋白MeCP2构成的负调控环路的影响,对miR-152下游经典Wnt信号通路的影响,对AA大鼠病理基因fibronectin表达的影响。TFIA灌胃治疗显著抑制DNMT1表达,逆转了AA大鼠病理中存在的由miR-152,DNMT1和MeCP2构成的负调控环路,向治疗组FLS转染miR-152 inhibitors后,DNMT1表达显著恢复。TFIA灌胃治疗显著上调SFRP4表达,抑制经典Wnt信号通路关键基因β-catenin,C-myc和ccnd1表达,显著抑制AA病理基因fibronectin表达,向治疗组FLS转染miR-152 inhibitors后,逆转了TFIA灌胃治疗对SFRP4,β-catenin,C-myc,ccnd1和fibronectin表达的影响。TFIA可能通过miR-152表达的上调抑制DNMT1表达,上调SFRP4表达,抑制经典Wnt信号关节基因β-catenin,C-myc,ccnd1表达,抑制RA基因fibronectin表达。

王枣子总黄酮对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及机制研究

目的研究王枣子中总黄酮(TFIA)对佐剂性关节炎(AA)的治疗作用及机制。方法采用注射完全弗氏佐剂制备AA模型大鼠后随机分为4组:AA组、AA+TFIA 50mg/kg组、AA+TFIA 100mg/kg组、AA+TFIA 150mg/kg组,每组10只。另设空白对照组大鼠,不造模(n=10)。造模后4d,TFIA各剂量组大鼠采用TFIA灌胃治疗,分别按上述3个剂量灌胃,每天1次,共24d,空白对照组和AA组灌胃生理盐水。治疗第12天、16天、20天、24天采用大鼠关节炎评分法评价TFIA对AA大鼠的治疗作用。治疗第24天处死各组大鼠,分离大鼠滑膜组织,原代培养各组大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS),ELISA检测各组FLS中白细胞介素(IL-1)表达,MTT检测各组FLS增殖活力,real time qPCR检测各组FLS miR-152和经典Wnt信号通路关键基因[β-catenin、细胞周期蛋白基因(ccnd1)]表达。向AA大鼠FLS转染miR-152mimics和对照NC mimics,向TFIA 100mg/kg剂量组大鼠FLS转染miR-152inhibitors和对照NC inhibitors,36h后检测miR-152、β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS的增殖。结果 TFIA各剂量灌胃治疗均能抑制AA大鼠关节炎评分,抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS增殖活力(P<0.05),各剂量组间比较差异无统计学意义(P>0.05),与空白对照组相比,各剂量组均未恢复至正常水平(P<0.05)。与空白对照组相比,AA组FLS中miR-152表达降低(P<0.05),向AA组FLS转染miR-152mimics后,与对照组相比,过表达的miR-152抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达,抑制FLS增殖(P<0.05)。向TFIA100mg/kg剂量组FLS转染miR-152inhibitors,与对照组相比,抑制了miR-152的表达,促进了β-catenin、ccnd1、IL-1表达,促进了FLS增殖(P<0.05)。结论 TFIA对AA大鼠有一定治疗作用,此作用可能通过上调miR-152的表达,影响经典Wnt信号通路实现。

王枣子叶总黄酮的降糖活性研究

目的探讨道地药材王枣子叶总黄酮的降糖活性。方法通过体外α-葡萄糖苷酶活性抑制实验检测王枣子叶总黄酮不同质量浓度对α-葡萄糖苷酶抑制率。采用四氧嘧啶糖尿病小鼠模型,经王枣子叶总黄酮不同剂量组连续灌胃4周,检测不同时间段小鼠空腹血糖变化,并于第28天检测血清TC、TG、HDL-C水平和口服糖耐量。结果王枣子叶总黄酮对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制活性,且呈量效关系。王枣子叶总黄酮各剂量组均能降低糖尿病小鼠血糖和血清TC、TG水平,升高HDL-C水平,改善糖耐量异常及糖尿病引起的脂代谢紊乱情况。结论王枣子叶总黄酮具有显著的降糖活性,能改善糖耐量,其中低剂量效果最好,接近二甲双胍阳性对照。