奶牛的E-玫瑰花环试验

应用E-玫瑰花环试验检测奶(犊)牛的细胞免疫状况,12头小犊牛的E-玫瑰花环率平均25%,9头大牛的E-玫瑰花环率平均为35.8%;白细胞分类计数结果为12头小犊牛淋巴细胞百分比为74.1%,9头大牛的为70.2%,所检出的各项指标均在正常范围内,随着时间的推移,成年奶牛的细胞免疫功能强于小犊牛.

应用E-玫瑰花环试验检测动物T细胞

[目的 ]对人和几种动物的淋巴细胞数目进行测定 .[方法 ]应用T淋巴细胞玫瑰花环实验 .[结果 ]马的淋巴细胞与豚鼠的红细胞结合好 ,但不能与绵羊的红细胞结合 .牛的淋巴细胞与绵羊红细胞及豚鼠红细胞结合好 .豚鼠淋巴细胞与兔红细胞结合率高 .[结论 ]在测定动物的T细胞数时 ,必须同时测试几种动物的红细胞 。

猪瘟弱毒苗注射奶犊牛的E玫瑰花环试验

本实验用E玫瑰花环试验检测奶犊牛的细胞免疫状况,实验组8头奶犊牛注射疫苗前的E玫瑰花环率平均为20%,注射疫苗后第45天E玫瑰花环率平均为26%,而对照组5头犊牛E玫瑰花环率平均为22%,数据显示注射疫苗后比注射疫苗前上升了6%,比对照组上升了4%.实验结果表明犊奶牛注射猪瘟弱毒苗后能够引起细胞免疫的提高.

利用玫瑰花环试验对鸡外周血液T.B淋巴细胞的检测

检测机体循环中的T细胞和B细胞,有助于了解机体的免疫状态,在理论上和临床实践中都有一定意义。利用T细胞上的绵羊红细胞（SRBC）受体和B细胞上的C3受体,进E和EAC玫瑰花环可将T细胞和B细胞区分开来,并进行计数。关于淋巴细胞的玫瑰花环试验,在兽医学方面,在国内已有关于牛、猪的详细报道,但在禽类,还没有见到报道。因此,本文就鸡外周血液淋巴细胞,玫瑰花环试验的测定方法和结果介绍如下:

应用Ea玫瑰花环抑制试验检测奶牛血清EPF活性

应用人淋巴细胞玫瑰花环抑制试验,对河南省奶牛育种中心20头奶牛进行了EPF活性检测。结果表明,18～30月龄初配妊娠母牛血清RIT值为12.84±0.59(n=6),31月龄～5岁经产妊娠母牛RIT值为13.01±0.36(n=8),两者差异显著(P<0.05);母牛在妊娠6～28d的RIT值为12.58±0.26(n=6),妊娠1～2个月的RIT值为13.13±0.34(n=6),妊娠3～4个月,RIT值为13.60(n=2),三者相互之间均差异显著(P<0.05)。妊娠与空怀奶牛的RIT值分别为12.96±0.46(n=14)和8.48±0.29(n=6),两者差异极显著(P<0.01)。经产牛血清EPF活性高于初配妊娠母牛;在6～28d、1～2个月、3～4个月3个妊娠期,母牛血清中EPF活性增加;未妊娠奶牛血清中不存在EPF活性,妊娠母牛的RIT>12。说明应用人淋巴细胞玫瑰花环抑制试验进行奶牛的早期或超早期妊娠诊断是一种有效可行的方法。

马传贫免疫中细胞免疫作用的研究 Ⅰ马传贫弱毒疫苗免疫马外周血玫瑰花环形成试验

随着细胞免疫学的进展,以往被认为是一种功能低下,处于衰老的分化终末的淋巴细胞,已证实是免疫反应中的主要细胞,是体液免疫反应或细胞免疫反应的物质基础,又被人们重新重视起来。淋巴细胞主要分为T细胞与B细胞,它们是两种免疫功能完全不同的免疫潜能细胞。

转移因子的活力测定及E玫瑰花结稳定性考察

临床上转移因子注射液用于病毒性或霉菌性细胞内感染及恶性肿瘤的辅助治疗。转移因子是猪、牛等动物脾脏产生的一簇多肽或蛋白质激素，具有促使淋巴于细胞分化及产生有细胞免疫活性的T细胞亚群的功能。T淋巴细胞表面具有绵羊血红细胞（SRBC）受体，即E受体。将分离的T淋巴细胞与SRBC混合，在一定条件下，与SRBC结合形成E玫瑰花环。T淋巴细胞经45℃加热1h处理可脱去E受体，转移因子町使T淋巴细胞的E受体恢复。本文采用脱E受体的E玫瑰花环试验测定转移因子的活性并对E玫瑰花结、淋巴细胞及脱E受体淋巴细胞稳定性进行考察。

不同剂量环磷酰胺诱导正常小鼠免疫抑制的对比研究

目的观察不同剂量环磷酰胺对正常小鼠免疫抑制的影响。方法采取不同的时间给予正常小鼠腹腔内注射小同剂量的环磷酰胺(CY),观察对小鼠免疫学指标的影响。结果正常小鼠腹腔注射20、80、100mg/kg的CY后,各剂量组均出现不同程度的免疫抑制。结论给予正常小鼠腹腔注射20、80、100mg/kg的CY,可建立免疫抑制模型,并且连续3d腹腔注射剂量为80mg/(kg·d)1CY的效果盛明显。

牛IgG2 Fc受体在COS-7细胞表面的稳定表达

将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染细胞表面稳定表达了boFcγ2R受体分子,转染细胞的玫瑰花环形成率达90%。最后获得稳定表达boFcγ2R受体分子的COS-7转染细胞系,为受体的功能研究提供了良好的技术平台。

胸腺肽α_1的温度诱导原核可溶性表达与简易纯化

将人工合成的人胸腺肽α1(Tα1)基因插入到载体pBV222,转化大肠杆菌DH5α菌株并置42℃诱导表达可溶性融合蛋白。融合蛋白经镍亲和层析柱纯化,加入肠激酶切割,再将酶切反应体系回到镍亲和层析柱。所获穿过液中的重组胸腺肽α1(rTα1),经十二烷基硫酸钠-聚苯烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离及分析,纯度分别为94.5%和72%。以癌症患者外周血淋巴细胞开展玫瑰花环试验,所获rTα1纯品显示出与化学合成Tα1(sTα1)相同的生物学活性。

猪IgGⅡ类Fc受体基因的真核表达及其在组织中的分布状况

利用已克隆的猪IgGⅡ类Fc受体cDNA(swFcγRⅡ)基因序列(DQ026064)设计的引物S29和S20,通过RT-PCR技术从猪外周血白细胞cDNA中扩增了完整的960bp swFcγRⅡ ORF序列。利用基因重组技术将swFcγRⅡ ORF基因成功亚克隆到真核表达载体pcDNA3中。然后用脂质体法转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验鉴定了swFcγRⅡ受体的亲和特性。半定量PCR检测表明,swFcγRⅡmRNA在外周血白细胞、肝、肺和肠系膜淋巴结有较高表达。

猪IgG Ⅱ类Fc受体基因真核表达重组质粒的构建及表达

利用本研究小组克隆的猪IgG Ⅱ类Fc受体cDNA(swFcγRⅡ)基因序列(DQ026064)设计引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增了完整的960 bpswFcγRIIORF序列,利用基因重组技术将swFcγRIIORF基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3,经PCR及双酶切鉴定:扩增出901 bp的PCR产物;KpnI/EcoR I双酶切,切出5 376和901bp DNA片段,表明重组质粒pcDNA/swFcγRⅡ构建成功。然后脂质体法转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验鉴定了swFcγRII配体亲和特性。

人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立

目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcγRⅡ表达质粒pcDNA3-huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆。采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcγRⅡ的表达。结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光。结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒,建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础。

moFcγRⅢ、γ链真核表达载体的构建及其共转染稳定细胞系的建立

将moFcγRⅢ、γ链编码区cDNA分别亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3moRⅢ、pc3moγ;用PvuⅠ线性化重组质粒,以线性化重组质粒共转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测moFcγRⅢ在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和单细胞克隆,在转染细胞表面稳定表达了moFcγRⅢ受体分子。稳定转染细胞系的建立和moFcγRⅢ受体分子基因的表达,为进一步研究moFcγRⅢ的功能提供了基础。

羊胎盘转移因子注射液体液免疫调节作用的研究

[目的]通过研究羊胎盘转移因子注射液对实验动物免疫球蛋白、B淋巴细胞和抗体形成细胞数量变化的影响，探讨受试药品对实验动物体液免疫的调节作用，进而评估其临床体液免疫调节的使用价值。[方法]试验1：用小白鼠进行免疫球蛋白测定试验，比较给药前后小白鼠血清免疫球蛋白的变化；试验2：用大白兔进行EAC玫瑰花环试验，测定给药前后B淋巴细胞数量的变化；试验3：用小白鼠进行溶血空斑试验，比较试验组和对照组抗体形成细胞数的变化。[结果]试验1：试验组小白鼠血清免疫球蛋白含量显著提高（P〈0.05）；试验2：试验组受试动物EAC玫瑰花环的成环细胞数显著高于对照组（P〈0.05）；试验3：试验组小白鼠抗体生成细胞的数量极显著增加（P〈0.01）。[结论]羊胎盘转移因子注射液对受试动物体液免疫有显著调节作用。

鸡胸腺肽β4、β15基因的原核表达及其生物学活性测定

为获得具有生物学活性的鸡胸腺肽β4、β15,根据大肠杆菌密码子偏爱性,设计合成鸡胸腺肽Tβ4、Tβ15基因片段,采用重叠PCR获得完整的Tβ4、Tβ15基因,将其连接到pET-28a(+)载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定,应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用E玫瑰花环试验测定其生物学活性。结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pET28a-Tβ4和pET28a-Tβ15,目的蛋白在大肠杆菌中大量可溶性表达,蛋白质分子量大小均为6kD,镍柱亲和层析获得了纯化的蛋白质。E玫瑰花环试验结果显示,重组Tβ4的活力为35.5%,Tβ15的活力为18.7%,均能够明显增强T淋巴细胞的活性。表明Tβ4和Tβ15基因得到成功表达和纯化,并具有良好的生物学活性。

胸腺肽活性测定方法改进

目的:改进E玫瑰花环试验,用于测定胸腺肽注射液的免疫活性。方法:采用猪血淋巴细胞进行E玫瑰花环试验,以日达仙(Thymosinα1)为对照品,并对试验条件和细节进行分析。结果:对同一批样品进行2次重复试验的结果非常相近。结论:该方法可提高试验的重现性和灵敏度。

早孕因子的生物学特性及其在动物繁殖领域中的应用

早孕因子(early pregnancy factor,EPF)最初发现于孕鼠血清,是妊娠哺乳动物血清中存在的一种具有免疫抑制和生长调节作用的妊娠相关蛋白。EPF的氨基酸序列包括102个氨基酸残基,与伴侣蛋白10(chaperonin 10,Cpn10)高度同源,是Cpn10在细胞外发挥的效应,对温度、酸碱度的耐受性较强,无动物及品种特异性。其生物学特性主要体现在抑制免疫和生长调节两方面:①EPF具有抑制母体的免疫反应而使精子、胚胎免受免疫排斥的作用,也是目前最早确认妊娠的生化标志之一;②EPF能促进肿瘤细胞的生长,也能促进烧伤、溃疡等伤口的愈合。由于EPF能增强抗淋巴细胞血清抑制T细胞花环的形成,因此,玫瑰花环抑制试验是检测EPF活性的经典方法。EPF在动物繁殖领域可用于动物的早期、超早期妊娠诊断,妊娠中断的检测,胚胎移植后的成活情况检测,在评价雄性繁殖力和繁殖免疫疾病的治疗等方面有着重要价值。

胸腺素注射液免疫活性测定实验的探讨

目的 :介绍用E玫瑰花环试验测定胸腺素注射液的免液活性的经验和注意事项。方法 :结合实际工作经验 ,对试验操作细节和条件进行探讨。结果与结论 :采用所推荐的细节和条件可提高试验的灵敏度和重现性。