环(L-脯-L-苯丙)二肽--潜在的磷酸二酯酶抑制剂

利用海藻来源的黄曲霉中提取到的次级代谢产物筛选GPR41的激动剂,发现环二肽类化合物环(L-脯-L-苯丙)二肽(17号)可在多种(G41-CHO,G12-CHO,Mock-CHO,SH-sy5y和HEK293)细胞中引起细胞内cAMP水平升高.实验结果表明,17号化合物引起cAMP升高不依赖于GPCR的激活,且腺苷酸环化酶激活剂forskolin与17号化合物共处理组比fsk单独处理组cAMP进一步增加.实验结果提示,17号化合物可能是通过抑制cAMP水解,从而引起cAMP水平的持续升高.17号化合物与已知的PDE抑制剂具有相似的结构特征,可能是潜在的磷酸二酯酶抑制剂.这是首次发现环(L-脯-L-苯丙)二肽具有在多种细胞内提高cAMP浓度的作用.

环(L-苯丙-L-缬)二肽的合成

以L-(+)-苯丙氨酸甲酯盐酸盐和L-(+)-缬氨酸为原料,经氨基保护、羧基活化等措施合成了新型催化剂环(苯丙-缬)二肽.

环(L-苯丙-L-脯)的合成

从Ｌ苯丙氨酸和Ｌ脯氨酸出发，分别保护两种氨基酸的Ｎ 端和Ｃ端，将Ｎ 端保护的Ｌ苯丙氨酸与Ｃ端保护的Ｌ脯氨酸经ＤＣＣ缩合，得直链二肽，再经Ｐｄ／Ｃ催化氢化，甲醇中回流，得环（Ｌ苯丙Ｌ脯），结构经ＨＲＥＩＭＳ、ＤＥＰＴ

手性环(L-苯丙-L-组)和(D-苯丙-D-组)二肽的合成

环二肽是不对称氰醇化反应的重要催化剂。以L 苯丙氨酸、L 组氨酸和D 苯丙氨酸、D 组氨酸为原料,用苄氧羰基保护苯丙氨酸的N端和进一步用硝基苯酚酯活化其C端,再与C端保护的组氨酸甲酯缩合,得直链二肽,再经Pd/C催化氢化脱保护基,闭环,得环(L 苯丙 L 组)二肽和(D 苯丙 D 组)二肽,结构经元素分析、IR、HNMR等证实。

光活环二肽环(L-脯-L-丙)和环(L-脯-L-缬)的合成

以L-脯氨酸、L-丙氨酸和L-缬氨酸为原料,先用苄氧羰基保护L-脯氨酸的N端,再与C端保护的L-丙氨酸甲酯/L-缬氨酸甲酯缩合,得直链肽,再经Pd/C催化氢化脱保护基,以仲丁醇为溶剂回流关环,得到光活纯的环二肽(L-脯-L-丙)/环(L-脯-L-缬)。该方法耗时短、产率较高、不发生消旋,是一种通用的光活含脯氨酸环二肽的合成方法。

环(L-组-L-脯)二肽的合成

许多环二肽具强的生理活性,以N-叔丁氧羰基-L-组氨酸和L-脯氨酸甲酯盐酸盐为原料,经DCC缩合得直链二肽,再经HCl/Et2O脱Boc保护,弱碱性条件下成环,得环(L-组-L-脯)二肽.结构经ESI-MS、IR、1H NMR、13C NMR等表征.

环(L-丙-L-脯)二肽的合成

以L-(+)-丙氨酸和N-叔丁氧羰基-L-(+)-脯氨酸为原料,分别经中和、缩合、脱保护、环化反应后,以65.3%的总产率合成得到了新型催化剂环(L-丙-L-脯)二肽,结构经IR、1HNMR、13CNMR、元素分析等表征。

环(L-色-L-脯)衍生物的合成及其抑菌活性研究

以L-色氨酸甲酯盐酸盐、芳香醛和N-Fmoc-L-脯氨酸为原料,经过Pictet-Spengler反应、Schotten-Baumann反应、NBS开环反应、碱催化增环反应,得到4个环(L-色-L-脯)的衍生物,其结构均经过熔点测定、NMR、元素分析表征。在抑菌活性测试中发现,该类化合物对细菌有较好的抑制活性。

环(L-亮-L-组)二肽催化不对称氰醇化反应研究

以合成的光学活性环(L-亮-L-组)二肽,在0^-10℃的混合溶剂中、碱性条件下催化氰醇化反应得到光学活性氰醇(S)-α-氰基3-苯氧基苯乙醇,收率85%,对映体过剩值37%。

HPLC法测定仔猪小肠刷状缘膜囊孵育体系中的二肽含量

用高效液相色谱法测定了经仔猪小肠刷状缘膜囊水解后的甘 - L-脯、L-亮 -甘和 β-丙 -组共 3种二肽的剩余含量。分别以水 -三氟乙酸 (质量浓度分别为 0 .1 % ,0 .0 8%和 0 .1 % ,p H值分别为 2 .2 0 ,2 .30和 2 .2 0 )和乙腈 -三氟乙酸 (三氟乙酸质量浓度 0 .1 % )为流动相 ,经 Phenomennex ODS分析柱 (2 50 mm× 4.60 mm,5μm,C1 8)分离 ,在 2 0 0～ 40 0 nm处检测。结果表明 ,3种二肽在 0～ 30 0 μg.m L-1之间 ,其峰面积 (X)对质量浓度 (Y,μg.m L-1 )回归得方程分别为 Y=0 .0 0 0 1 X- 5.6945,(R2 =0 .9946) ;Y=0 .0 0 0 4 X- 1 .41 6 7,(R2 =0 .9999) ;Y=0 .1 842 X- 7.365 4,(R2 =0 .9948)。平均回收率依次为 1 0 0 .0 0 % ,1 0 0 .0 1 %和 99.92 % ,保留时间依次为 7.63,8.0 1和 4.1 7min,最大吸收波长依次为 2 0 1 ,2 0 0和 2 80 nm。该方法快速、简便和准确 ,结果稳定 ,重现性好 。

HPLC法同时测定穿山甲炮制品中3个主要环二肽成分的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定炮山甲中3个成分L-丝-L-酪氨酸环二肽、D-丝-L-酪氨酸环二肽、L-甘-L-酪氨酸环二肽的含量。方法:采用赛分Sepax Bio-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1%TFA乙腈-0.1%TFA水(2∶98)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长210 nm。并以3种环二肽为指标,使用SPSS 22.0软件对40批样品进行聚类分析。结果:3个环二肽分离良好,L-丝-L-酪氨酸环二肽、D-丝-L-酪氨酸环二肽、L-甘-L-酪氨酸环二肽进样量分别在0.056~2.244μg(r=0.999 9)、0.061~2.452μg(r=0.999 7)、0.059~2.348μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系。加样回收率分别为101.8%、98.1%、95.7%,相应的RSD分别为0.76%、2.2%、2.6%;40批样品中3个成分的含量范围分别为0.007 0%~0.23%,0.005 0%~0.14%,0.008 0%~0.18%,盐类增重对环二肽含量有显著影响,聚类分析将其分为3类。结论:本方法准确可靠,适用于炮山甲中环二肽成分的含量测定。

零余子中环肽类化学成分及其生物活性研究

目的探究零余子(bulbils of Dioscorea opposita Thunb.)中含氮类化学成分及其生物活性。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI gel CHP-20、ODS等柱色谱及制备型高效液相分离纯化,结合理化性质及其波谱数据鉴定化合物结构。采用多柔比星诱导的NRK-52E细胞损伤模型及皮质酮诱导的PC-12细胞损伤模型分别检测所得化合物的肾细胞保护作用及神经细胞保护作用。结果从零余子中分离得到15个含氮类化合物,分别鉴定为环(L-苯丙-L-酪)二肽(1)、环(L-缬-L-脯)二肽(2)、环(D-色-D-酪)二肽(3)、环(L-脯-L-酪)二肽(4)、环(L-苯丙-L-丙)二肽(5)、环(L-亮-L-脯)二肽(6)、环(L-异亮-L-脯)二肽(7)、环(D-脯-L-酪)二肽(8)、环(L-苯丙-L-脯)四肽(9)、3-羟基-3-(2-丙酰)-2,4(1H,3H)-喹啉二酮(10)、3-吲哚甲醛(11)、木瓜新碱A(12)、1-核糖醇基-2,3-二酮-1,2,3,4-四氢-6,7-二甲基-喹喔啉(13)、白曼陀罗酰胺(14)、苯丙氨酸(15)。化合物2、5、9、14能显著提高NRK-52E细胞活力。化合物对PC-12细胞活力均无明显影响。结论化合物2~5、7~9、11~14均为首次从薯蓣属植物中分离得到。首次报道化合物2、5、9、14在体外中表现出较好的肾细胞保护作用。

穿山甲高温砂炒炮制增效机制研究

目的穿山甲传统生品不入药,需炮制后方可入药,因此对穿山甲高温砂炒的炮制机制进行研究。方法采用TLC、Nano LC-Q Exactive Orbitrap MS对穿山甲炮制前后的脂溶性成分及蛋白成分的变化进行分析,同时,对炮制过程中显著增加的环二肽成分的形成进行模拟炮制。并对L-丝-L-酪环二肽的活性进行筛选。结果穿山甲经砂炒炮制后,脂溶性成分无显著变化、蛋白成分显著减少,环二肽显著增加。环二肽的形成主要与炮制过程中的受热有关,在低温条件下,直链肽N端可环化生成L构型的环二肽,在高温环境下,直链肽N端及C端均可快速环化生成环二肽。L-丝-L-酪环二肽可延长凝血时间并增加奶牛乳腺上皮细胞增殖率和乳蛋白合成相关基因表达,同时还具有显著的镇痛活性,这与穿山甲传统功效相一致。结论穿山甲经炮制后产生的L-丝-L-酪环二肽可能是穿山甲炮制增效的物质基础。这对揭示穿山甲药效物质基础、寻找穿山甲替代资源、保护穿山甲具有重要意义。

穿山甲、猪蹄甲、羊蹄甲炮制品水溶性成分的比较研究

目的:比较穿山甲、猪蹄甲、羊蹄甲炮制品的水溶性成分为寻找穿山甲替代资源提供参考。方法:本研究以穿山甲、猪蹄甲、羊蹄甲炮制品为研究对象,通过HPLC指纹图谱及多元数据分析对比3种炮制品的水溶性成分。结果:建立了穿山甲、猪蹄甲、羊蹄甲炮制品水溶性成分的指纹图谱,其中穿山甲炮制品指纹图谱确定了20个共有峰,并指认出7种成分,12批穿山甲炮制品相似度在0.813~0.944;猪蹄甲炮制品指纹图谱确定了22个共有峰,指认出4种成分,12批猪蹄甲炮制品相似度在0.882~0.991;羊蹄甲炮制品指纹图谱确定了19个共有峰,指认出4种成分,12批羊蹄甲炮制品相似度在0.865~0.998。穿山甲色谱峰可分为核苷类、肽类2类组分群;3种炮制品核苷组分相似,均含有黄嘌呤、次黄嘌呤、尿苷、尿嘧啶,L-甘-L-酪氨酸环二肽、L-丝-L-酪氨酸环二肽、D-丝-L-酪氨酸环二肽只存在于穿山甲中,3种炮制品的水溶性成分差异显著。结论:本研究系统比较了穿山甲、猪蹄甲、羊蹄甲、炮制品水溶性成分的异同,能够为其临床用药提供参考,对寻找穿山甲替代资源的具有参考意义。

海洋真菌Nigrospora sphaerica中化学成分的研究

目的研究海洋真菌Nigrospora sphaerica菌丝体中的化学成分，以期得到有活性的先导化合物。方法利采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等方法进行分离纯化，通过理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从真菌Nigrospo—Fasphaerica的菌丝体提取物中分离并鉴定了11个化合物，分别为麦角甾-5，7，22E-三烯-3卢-醇（1），胆甾醇（2），吡咯并哌嗪．2，5-二酮[环（脯-甘）二肽]（3），3-甲基-吡咯并哌嗪-2，5-二酮[环（脯-丙）二肽]（4），3-苄基-吡咯并哌嗪-2，5-二酮[环（脯-苯丙）二肽]（5），3-苄基-哌嗪-2，5-二酮[环（甘-苯丙）二肽]（6），5-羟甲基糠醛（7），亮氨酸（8），3，6-二甲基-哌嗪-2，5-二酮[环（丙-丙）二肽]（9），腺嘌呤（10），尿嘧啶核苷（11）。结论化合物1，3～7和11为首次从海洋真菌Nigrospora sphaerica中分离得到。

多花黄精内生真菌Aspergillus ochraceus的代谢产物研究

目的研究多花黄精内生真菌Aspergillus ochraceus的次生代谢产物。方法利用硅胶、SephadexLH-20、中压及高效液相制备等多种柱色谱法分离化合物,根据谱学方法对化合物进行结构鉴定。结果从内生真菌Aspergillus ochraceus中分离得到15个化合物,分别鉴定为6,7-dihydroindolizin-8(5H)-one(1)、polygonatine A(2)、8-oxo-5,6,7,8-tetrahydro-3-indolizinyl methyl acetate(3)、8-羟基色原酮(4)、环(L-亮-L-异亮)二肽(5)、交链孢酚(6)、seco-patulolide C(7)、正丁基-β-D-呋喃果糖苷(8)、Nb-乙酰色胺(9)、N-反式-桂皮酰酪胺(10)、5-羟甲基-2-呋喃糠醛(11)、5,7-二羟基-6,8-二甲基-3-(4′-羟基苯基)色烷-4-酮(12)、5,7-二羟基-6-甲基-8-甲氧基-3-(4′-羟基苯基)色烷-4-酮(13)、25R-3β-羟基螺甾-5-烯-12-酮(14)、25S-3β-羟基螺甾-5-烯-12-酮(15)。结论所有化合物均首次从内生真菌Aspergillus ochraceus中分离得到。