基于毛细管电泳的环介导恒温扩增技术检测方法研究

以大肠杆菌（E.coli）为对象,采用环介导恒温扩增技术（LAMP）对其扩增,在实验室自制的毛细管电泳-诱导荧光平台上建立了LAMP产物的检测新方法。引物F3,B3,FIP,BIP扩增的E.coli LAMP产物大小为240 bp。优化的毛细管电泳条件为：毛细管有效长度/总长度（10 cm/15 cm）,筛分介质溶液为0.5%羟乙基纤维素（1 300 K）,电场强度（100 V/cm）,进样条件（100 V/cm,1.0 s）。毛细管电泳时,DNA长度在100~500 bp范围内与其迁移时间呈线性关系,相关系数为0.996。在相同毛细管电泳条件下对E.coli LAMP产物进行分析,并利用这种线性关系在电泳图中对E.coli LAMP产物与假阳性产物做区分,结果表明,毛细管电泳技术不仅可在15 min内实现LAMP产物及附加产物的快速检测,而且可快速区分LAMP阳性及假阳性实验产物。采用建立的毛细管电泳快速检测LAMP产物的方法,对AB0174 E.coli基因实施了LAMP,结果表明该方法适合DNA LAMP产物的快速检测。

马铃薯PLRV的RT-LAMP检测方法的构建

为了建立高效、便捷且成本较低的检测方法以应用于马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)检疫防控工作,本研究构建了PLRV的逆转录环介导恒温扩增反应(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法。结果表明:本研究构建的马铃薯PLRV的RT-LAMP检测方法,最低检测下限为10 copies/mL,与PVX、PVM、PVV、PVS、CMV等其他马铃薯病毒无交叉反应,具有良好的特异性,为马铃薯病毒检测技术应用奠定一定基础。