食品中单增李斯特菌环介导等温扩增检测技术

目的:建立一种快速、简单地检测食品中单增李斯特菌的环介导恒温基因扩增方法(loop-mediated isother-mal amplification,LAMP),并初步建立荧光定量LAMP检测单增李斯特菌的方法。方法:根据LAMP方法的原理,设计LAMP检测引物,建立LAMP检测方法,同时对方法的特异性、灵敏度、重复性及初始拷贝数的对数值与反应时间之间的线性关系进行评估。结果:使用LAMP引物可以在0.5h内完成检测工作;LAMP检测技术的灵敏度高出聚合酶链式反应检测技术100倍以上,检出限达到1.72×101拷贝/反应,与其他食源性致病菌无交叉反应,平均实验间变异系数小于5%;反应时间与初始模板浓度的常用对数值有良好的线性关系(R2=0.9994)。结论:本方法具有快速、灵敏、特异、操作简单、设备要求低的特点,具有广阔的应用前景。

LAMP法在阪崎肠杆菌快速检测中的应用

针对阪崎肠杆菌的ompA基因设计4条特异性引物(2条内引物、2条外引物),建立一种快速检测阪崎肠杆菌的DNA环介导恒温扩增法(LAMP)。通过对2株阪崎肠杆菌标准菌株、24株阪崎肠杆菌分离株和18株非阪崎肠杆菌测试,结果表明此方法具有很高的特异性;对其灵敏度进行检验,发现该方法的最低检测限可以达到8CFU/mL,具有较好的敏感性。在1份实验室能力验证盲样和26份实际奶粉样品中应用发现,该方法与传统生化方法结果吻合,具有较好的可靠性。