DNA环介导的恒温扩增法在快速鉴定病原微生物中的应用

DNA环介导的恒温扩增(LAMP)反应,是分子生物学领域中的一个新概念,它可以在恒温(60～65℃)条件下,30～60 min内将只有几个拷贝的靶核酸扩增到109水平。该方法的一大特色是,可以通过反应副产物——白色焦磷酸镁沉淀的产生与否判断靶基因的存在。因此,对于病原微生物的鉴定具有高效率、高特异性、高敏感性等特点。LAMP方法在食品安全检测、流行性病毒检测、临床诊断,以及水产养殖等领域的应用及研究已有文献报道。表明,该方法已具有成功应用的现实性,为快速基因检测提供了一种新的技术途径;比PCR方法更具推广性,可望作为常规检测工具。

环介导的恒温扩增技术及其在病毒性疾病诊断中的应用

环介导的恒温扩增(LAMP)是近年来新兴的一种快速DNA扩增技术,其基本原理在于利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下对靶序列进行扩增。LAMP技术具有特异性强、敏感性高、反应迅速、设备简单等特点,在人类病毒性疾病的诊断领域有着广泛的应用。

副溶血弧菌的gyrB基因环介导的恒温扩增技术检测方法的研究

目的建立一种适合基层实验室应用和开展的快速检测副溶血弧菌的DNA环介导的恒温扩增法(LAMP)。方法针对副溶血弧菌的gyrB基因序列设计了4条引物(2条内引物、2条外引物),并对扩增反应条件进行了优化。结果整个检测过程仅需1.5h,可通过肉眼目测或电泳检测判断结果;对3株种系背景明确的副溶血弧菌不同实验对照株、23株副溶血弧菌地方分离株和32株其他肠道菌进行了检测,具有很高的特异性;该方法的最低检测限为24cfu/ml,具有良好的敏感性;应用于61份贝类海产品的现场检测,阳性率为100%,与实时荧光定量PCR方法的检测结果相符,阳性率高于传统的培养鉴定方法。结论本方法具有快速、灵敏、特异、简便、经济等特点,适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值。

环介导的核酸恒温扩增技术概述

环介导的恒温扩增技术是一种新的核酸扩增技术。本文介绍了该技术的原理、引物设计要点、反应体系的配制和产物的检测以及当前该技术在生命科学各领域的应用。

环介导恒温扩增对莱姆病病原伯氏疏螺旋体的分型鉴定

使用环介导恒温扩增技术,基于莱姆病病原伯氏疏螺旋体的外膜蛋白A(OspA)基因,针对伯氏疏螺旋体不同的基因型设计特异性引物,对国内主要的莱姆病病原伯氏疏螺旋体的3个基因型进行分型鉴定。研究结果表明,设计的引物具有良好的特异性,可以对狭义伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi sensu strict)、嘎氏疏螺旋体(B.afzelii)和伽氏疏螺旋体(B.garinii)进行分型鉴定。伯氏疏螺旋体的分型鉴定可以对不同临床症状莱姆病患者的治疗和莱姆病的控制提供一定的依据。

基于颜色判定的环介导恒温扩增法快速检测结核分枝杆菌

目的建立快速检测结核分枝杆菌环介导的恒温扩增法。方法针对结核分枝杆菌特异性保守靶序列IS6110,采用环介导的恒温扩增法(LAMP)引物设计原则设计6条引物,特异性识别靶基因序列上8个独立区域。LAMP反应过程中会产生焦磷酸镁白色沉淀,可以通过实时监测反应液浊度来判断反应结果。结果试验表明,在60～65℃恒温条件下,LAMP反应60 min内即可完成;如果在反应前添加钙黄绿素,可通过反应液颜色的变化来判断反应结果;LAMP方法的最低检出核酸浓度为101 pg/μl,其灵敏度是PCR方法最低检出浓度1.01 ng/μl的10倍,且具有良好的特异性。结论 LAMP方法检测结核分枝杆菌具有简单、快速、价廉、特异性强、灵敏度高等特点,适用于疾控工作及临床筛查或快速检测结核杆菌。

PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展

对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法。

两种基因分析法在口岸沙门菌检测中的应用评价

目的评估以沙门菌属肠毒素基因(Salmonella enterotoxin gene stn)为靶基因建立的环介导恒温扩增(loopmediated isothermal amplification,LAMP)沙门菌快速检测方法在口岸卫生检验中的作用。方法收集河南出入境检验检疫局检测的肉、蛋、奶、水产品、饮料等样本共计165份,采用沙门菌属stn基因LAMP技术、实时荧光PCR与沙门菌显色培养基培养法同时检测,比较沙门菌属stn基因LAMP技术与实时荧光PCR的符合率和一致性,并以显色培养基培养结果为标准评价这两种基因分析方法的敏感性和特异性。结果 165份检验样本检测结果,LAMP检测方法与实时荧光PCR检测结果对比,一致率97.6%,阳性检出率比较差异无统计学意义(χ2=0.10,P>0.05);与显色培养基检测结果对比,一致性强(kappa=0.964),优于实时荧光PCR(kappa=0.952)。结论沙门菌属stn基因LAMP技术较实时荧光PCR敏感性强、特异性高,简便快速,对仪器设备要求不高,是一种适合口岸检验检疫部门使用的沙门菌快速检测方法。