四棱草中环八肽的二维核磁共振谱研究

以二维核磁共振谱 (2DNMR)解析了从四棱草核磁共振谱 (SchnabeliaoligophyllaHand. Mazz.)中分离的环八肽———四棱草环肽 (Schnabepeptide)的结构 .通过1 H 1 HCOSY和1 H 1 HTOCSY归属了组成四棱草环肽的丝氨酸 (L Ser)、异亮氨酸 (L Ile)、甘氨酸 (Gly)、色氨酸 (D Trp)、2个缬氨酸 (L Val)和 2个脯氨酸 (Pro)共 8个氨基酸残基的质子耦合系统 ,1 3CNMR谱的归属则由HMQC和HMQC TOCSY给出 ,由 2DNOESY和HMBC对环肽各残基的连接方式进行了修正 ,鉴定的结果为Cyclo (NH Trp Val Gly Val Ser Ile Pro Pro CO) .

噬菌体展示随机环八肽库的构建

目的 构建表达于噬菌体表面的随机环八肽库。方法 通过自行设计,人工合成编码随机环八肽的寡核苷酸片段,通过延伸引物扩增获得编码随机环八肽的基因片段。将编码基因片段和M13KE噬菌体载体经过EagⅠ和KpnⅠ限制性内切酶双酶切后进行连接,重组产物电转入大肠杆菌ER2738感受态细胞获得噬菌体展示随机环八肽库,噬斑及测序检测库容和多样性。结果 构建的环八肽库库容超过7.5×10 9,重组阳性率为92.5%,不同率为97.3%。结论 成功构建了库容量与多样性都满足筛选要求的噬菌体展示随机环八肽库。

含有精-甘-天冬氨酸序列的环肽与大鼠肝星状细胞体外结合的特性

目的探讨人工合成的含有精-甘-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列的环八肽(cRGD) 与大鼠肝星状细胞(HSC)体外的结合特点。方法采用异硫氢酸荧光素(FITC)标记环八肽(FITC- cRGD);流式细胞仪测定其与大鼠HSC体外结合的荧光强度;荧光显微镜观察FITC-cRGD在HSC内的定位;用氚标记的cRGD(3H-cRGD)与HSC进行受体的放射性配基结合分析,Scatchard作图法计算二者结合的平衡解离常数(Kd)和每个细胞上的最大结合位点数(Bmax)。同时,FITC标记的环肽(cAGA)作为阴性对照肽。结果FITC-cRGD与活化的大鼠HSC的结合具有可饱和性、浓度与时间依赖性以及未标记的cRGD对FITC-cRGD具有竞争性抑制作用。FITC-cRGD荧光主要集中在HSC胞浆中,尤其是胞浆近核周区。受体放射性配基结合分析经Scatchard作图提示Kd为7.05×109mol/L,Bmax约为6.79 ×105。与阴性对照肽相比,RGD序列对识别HSC起重要作用。结论HSC表面具有可供含有RGD序列人工合成环肽结合的位点;制备的含有RGD序列的环肽符台特异性配体的标准;FITC标记不影响环肽生物学活性。