大曲中高产糖化酶菌株的筛选及环境耐受性分析

[目的]分离适应酿造环境的高产糖化酶大曲土著菌株,用于大曲强化,以减少山西老陈醋酿造过程中的大曲用量,提高原料利用率并改善醋品品质。[方法]以酒精发酵24h的酒醅为样品,用Martin培养基对大曲中的霉菌进行分离,分别以透明圈和酶活大小进行初筛和复筛获得高产糖化酶菌株,以生长量为指标进行环境耐受性分析。[结果]初筛获得的10株产糖化酶菌株中M2、M5、M6、M8、M15的产酶能力（U·mL-1）高于公认的糖化酶高产菌株AS3.4309（M0）,依次为M6（3912.08（32.1）〉M5（1413.16（13.92）〉M8（1233.63（71.07）〉M15（1152.47（21.96）〉M2（923.86（22.42）〉M0（828.88（22.23）。环境耐受性分析结果表明,5株霉菌均能耐受6%的乙醇浓度,在pH3.5生长良好,有的甚至能耐受pH2.0,在15~30℃范围内均可生长。[结论]获得的5株霉菌,不仅产糖化酶能力高于公认且应用广泛的AS3.4309,还能耐受山西老陈醋的整个酿造过程。

乳酸利用菌的环境耐受性及对模拟白酒固体发酵的影响

从发酵过程中的窖池分离数十株乳酸利用菌,选取6株检测其在有氧及缺氧条件下的乳酸盐浓度、有机酸浓度、乙醇浓度耐受性及在混合碳源条件下对利用乳酸盐的影响,显示降乳菌对有关环境因素具有一定的耐受性。模拟厌氧固体发酵显示大部分菌株降乳效果达到25%～50%,对乙酸等有机酸水平影响少,而对乙醇含量具有一定影响。

饲用鸡源芽孢杆菌的鉴定及环境耐受性研究

为开发饲用芽孢杆菌用于鸡的生产,从放养的淮南麻黄鸡盲肠内分离了2个菌株,用酵母浸出粉胨葡萄糖培养基分离并纯化,采用常规生化试验、16 S rDNA鉴定为芽孢杆菌。模拟胃肠道内环境研究其耐盐、耐人工胃液和耐胆盐能力显示,这2株芽孢杆菌具有较好的耐盐、耐人工胃液和胆盐能力,可耐过机体胃肠道内环境。耐热性研究表明,这2株芽孢杆菌均能在85℃条件下生长。结果表明所分离的芽孢杆菌可以在肠道内生存,具有耐热性,有利于工业化生产。

芽孢对提高好氧颗粒污泥环境耐受力的作用

为研究好氧颗粒污泥中大量存在的芽孢对其环境耐受力的作用,将好氧颗粒污泥经过低温无营养、高温高压、冷冻和紫外线处理后,监测其活性恢复过程中2,6-吡啶二羧酸根(dpa)的释放、比耗氧速率(SOUR)和以还原2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)为标志的脱氢酶的活性变化。实验结果显示,好氧颗粒污泥中大量存在的芽孢在不良环境条件下处于休眠状态,环境条件改善后能迅速转化为繁殖体细胞,进行正常的代谢活动。作为潜在的生命力,好氧颗粒污泥对不良环境的耐受力增强。芽孢是好氧颗粒污泥不容忽视的重要组分。

金属离子对植物乳杆菌RS66CD生物膜形成及环境耐受性的影响

筛选出对植物乳杆菌RS66CD生物膜形成促进效果最显著的金属离子,确定生物膜形成最适培养条件,探究生物膜形成后对温度、pH、盐浓度和胆盐的耐受性。在培养基里添加Na+、Mn^2+、Ca^2+、Mg^2+和Fe^3+5种金属离子后,利用96孔法及扫描电镜测定生物膜形成量,选出最佳金属离子。对其添加量、培养温度和培养时间下生物膜形成的规律进行研究,确定了生物膜形成的最适条件。结果表明,Na+对生物膜形成具有明显促进效果。在NaCl质量浓度为53 g/L,40℃培养24 h时,生物膜的形成量最大。形成生物膜后的菌株对温度、pH、盐浓度和胆盐的耐受性均有明显提升。Na+可以促进植物乳杆菌生物膜的形成,在工业生产中,可以通过形成生物膜,使微生物在不良环境中保持活性。

单增李斯特菌lmo0331基因缺失株的构建及对环境耐受性的影响

为了研究Lmo0331蛋白在单增李斯特菌环境适应性中发挥的作用,利用同源重组的技术构建LM90SB2△lmo0331基因缺失株,比较在不同温度、pH、渗透压下的生长特性和生物被膜形成能力与野毒株的差异。结果显示,在4℃环境下及含5g/L NaCl的BHI培养基中,LM90SB△lmo0331缺失株的生长速度显著高于LM90SB2野毒株(P<0.05);在pH9的碱性环境及含45mL/L乙醇的BHI培养基中,LM90SB2△lmo0331缺失株繁殖数量低于野毒株(P<0.05);其他条件下,LM90SB△lmo0331缺失株与野毒株的生长无显著差异;LM90SB2和LM90SB2△lmo0331在不同时间点生物被膜形成密度无显著差异。由此表明,Lmo0331蛋白可能在低温和碱性条件下发挥不同作用,这一结果为研究LM在胁迫环境生存机制奠定了基础。

柔性薄膜太阳电池封装及环境耐受性研究

封装材料的选择和封装工艺的确定对柔性薄膜太阳电池在空间的应用非常重要。封装材料采用改性的硅氧烷系列胶水和高透过率含氟薄膜材料,封装工艺采用涂覆方式和覆膜方式相结合,并利用封装设备有效控制涂层厚度及其均匀性。对封装后的柔性薄膜太阳电池进行一系列环境模拟实验,发现实验后太阳电池性能衰减较小,具有良好的环境耐受性。

rnc基因调节变异链球菌环境耐受性及其机制研究

目的 rnc基因敲除后,观察变异链球菌的耐酸、耐氧化、耐高渗透压性能的改变及其可能的调节机制。方法通过长链PCR连接诱变技术,构建rnc基因缺失突变株,分别对比突变菌株与野生菌株对氧化环境、酸性环境及高渗透压环境的耐受能力;采用real-time RT-PCR验证rnc缺失后变异链球菌环境耐受相关基因的转录水平表达变化。结果 rnc基因缺失后,变异链球菌的耐酸性(c2=13.464,P=0.001)及耐氧化性(c2=4.505,P=0.048)较野生菌株显著下降,但耐高渗透压性显著增加(c2=11.971,P=0.001)。环境耐受相关基因lux S与rop A的表达水平显著下调(P<0.001),分别为野生菌株的0.64倍、0.51倍;而htr A与brp A的表达水平显著上调(P<0.001),分别为野生菌株的1.56倍、1.80倍。结论 rnc基因缺失影响变异链球菌环境耐受相关基因的表达,降低了变异链球菌耐酸、耐氧化能力,增强了对高渗透压的耐受能力。

软硬段配比对聚醚-MDI型聚氨酯弹性体力学性能及环境耐受性影响

为研究软硬段配比对聚氨酯弹性体的力学性能及其环境耐受性影响研究,选择了聚醚-二苯基甲烷-4,4’-二异氰酸酯(MDI)型聚氨酯弹性体为研究对象,通过对其软硬段配方的调整制备了系列聚氨酯弹性体,同时对包含力学性能在内的综合环境耐受性进行了研究,为应用于极端工况下的聚氨酯介电弹性体的基体优选提供参考。

phoP调节子对阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的影响

为研究克阪崎罗诺肠杆菌中phoP基因与环境耐受力的关系,采用Red同源重组方法构建阪崎克罗诺肠杆菌的phoP基因缺失菌株,并从生长曲线、酸碱耐受、温度耐受等方面,研究phoP基因缺失前后阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受力的变化。结果表明:phoP基因缺失菌株的生长速度明显延缓,该基因的缺失减弱了菌对外界酸碱和高温的耐受性,并缩短了热致死时间;phoP基因缺失菌株抵御胆盐环境的能力亦有所下降,与野生型菌株相比,它在4%、8%、12%胆盐溶液环境中的存活率分别降低了19.93%(P<0.05)、40.73%(P<0.01)和45.84%(P<0.01)。此外phoP基因缺失菌株对渗透压的耐受力与野生株相比也显著降低(P<0.05)。综合以上结果表明,phoP基因有助于阪崎克罗诺肠杆菌应对外界环境刺激。

LysR型转录因子STM0859对鼠伤寒沙门菌环境耐受性的调控作用

为了解LysR型转录因子STM0859对鼠伤寒沙门菌(ST)环境应激的调控作用,以ST-SL1344强毒株为研究对象,利用温度敏感型质粒和λ-Red同源重组技术构建ST-ΔSTM0859基因缺失突变株,检测分析缺失株对pH、高盐、H2O2和乙醇胁迫环境的适应能力及在不同pH半固体中的运动能力,探究STM0859基因缺失对ST环境应激和运动能力的影响。结果显示,与ST-SL1344强毒株相比,ST-ΔSTM0859缺失株对pH=10、4%NaCl、0.1%H2O2和3%乙醇胁迫环境的适应能力没有显著变化,而在pH=4酸应激环境和半固体运动中生长能力极显著低于亲本株,pH=5时差异显著。提示LysR型转录因子STM0859参与ST对酸胁迫环境适应性的调控,为进一步揭示STM0859转录因子对ST环境应激调控的分子机制奠定基础。

CpxRA双组分系统对小肠结肠炎耶尔森菌环境耐受性和抗生素耐药性的影响

目的探究CpxRA双组分系统对小肠结肠炎耶尔森菌环境耐受性和抗生素耐药性的影响。方法本研究选用Cat-SacB无标记基因敲除系统,利用同源重组双交换原理,构建了基因敲除菌株ΔcpxA和ΔcpxR,以及相应的回补菌株ΔcpxA-cpxA和ΔcpxR-cpxR,然后分别测定了野生型、突变型和回补型在酸性、碱性、高氧和高渗环境中的存活率,以及红霉素、罗红霉素、卡那霉素、链霉素的最小抑菌浓度值。结果cpxA和cpxR基因的缺失使小肠结肠炎耶尔森菌的在酸性环境下的存活率由55.1%分别降为45.9%和42.8%;使该菌在碱性环境下的存活率由43.4%分别降为38.9%和37.2%;在高渗环境下的存活率由44.1%分别降为36.3%和33.7%;在高氧环境下的存活率由20.8%分别降为15.1%和15.8%。cpxA基因的缺失增强了该菌对于氨基糖苷类抗生素:卡那霉素、链霉素的耐药性,而cpxR基因的缺失减弱了该菌对于大环内酯类抗生素:红霉素、罗红霉素的耐药性。结论CpxRA双组分系统参与调控小肠结肠炎耶尔森菌在不良环境中的存活能力以及抗生素耐药性。

一株功能性乳酸菌对胃肠道环境耐受能力的测定

目的对1株具有降胆固醇功能的乳酸菌进行胃肠道环境耐受能力的测定。方法分别测定菌株对胃内酸性和胃蛋白酶的耐受能力以及对小肠内胆盐和胰蛋白酶的耐受能力。结果该菌株对胃肠道有良好的耐受能力。结论本研究为后期菌株在动物及人体内发挥其功能性奠定了实验基础。

前噬菌体对禽致病性大肠杆菌DE205B环境耐受力的影响

禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)DE205B基因组中存在前噬菌体phiv205-1。本文利用RED同源重组技术构建前噬菌体phiv205-1缺失株,采用倍比稀释的方法检测野生株DE205B和前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在酸、盐和氧化应激等不利条件下的存活率,分析前噬菌体对APEC环境适应力的影响。结果显示,与野生株相比,前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1酸性耐受力下降了56.62%(P<0.001),在氧化应激条件下的存活率下降了91.78%(P<0.001)。为研究前噬菌体phiv205-1中影响宿主细菌对酸和氧化应激耐受的基因,采用real-time PCR检测了部分phiv205-1基因在氧化应激环境中的表达量,结果显示基因2971、2989、3327及Erf的表达量显著升高。进一步构建了Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf的单基因缺失株,环境耐受实验结果显示,与野生株相比,单基因缺失株Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf在H2O2环境下的存活率依次降低了89.32%、67.79%、27.84%和71.29%。研究表明,前噬菌体phiv205-1增加了细菌对环境压力的抵抗力,为宿主菌在恶劣条件下的生存提供了多种益处。

柠檬醛对阪崎克罗诺肠杆菌环境压力耐受能力及抗生素敏感性的影响

探究柠檬醛对阪崎克罗诺肠杆菌(Cronobacter sakazakii)环境耐受能力及对抗生敏感性的影响.首先测定柠檬醛对C.sakazakii的亚抑制浓度;随后使用亚抑制浓度的柠檬醛作用C.sakazakii,探究柠檬醛对菌体干燥、热、渗透压、酸、胆盐耐受能力的影响;同时,研究利用E-test?法检测柠檬醛作用后的菌体对抗生素氨苄西林和头孢西丁敏感性的变化;最后利用逆转录实时定量聚合酶链式反应,分析柠檬醛对C.sakazakii环境耐受相关基因转录的影响.结果表明:质量浓度为31.250μg/L的柠檬醛对阪崎克罗诺肠杆菌的生长没有影响,本研究选择31.250μg/L和15.625μg/L为柠檬醛的亚抑制浓度;亚抑制浓度的柠檬醛使菌体耐干燥、耐渗透压、耐热、耐酸、耐胆盐的能力显著降低,且呈现质量浓度依赖性;并且,亚抑制浓度的柠檬醛增强了菌体对氨苄西林和头孢西丁的敏感性;逆转录实时聚合酶链式反应结果表明,柠檬醛降低了与阪崎克罗诺肠杆菌环境耐受能力相关的多个基因的转录水平.综上所述,柠檬醛可降低阪崎克罗诺肠杆菌的多种环境压力耐受并增强菌体对抗生素的敏感性,本研究将为柠檬醛应用于食品生产加工过程中控制阪崎克罗诺肠杆菌奠定理论基础,也为天然活性物质控制食源性致病菌提供新的思路.

酿酒酵母在酒精发酵过程中耐受环境胁迫影响研究

以一株新型酿酒酵母菌株为出发点,以正交实验和当前主流大生产工艺技术为研究手段,研究了该菌种在玉米酒精发酵下的实验效果。初步研究表明,X酵母相对于超级酿酒高活性干酵母,体现出所需营养较少,p H值范围较广,对温度的变化的耐受力较高,是一株较好的酒精发酵菌种。同时,对该菌种的模拟大生产实验结果表明,X酵母在玉米酒精浓醪发酵的环境抑制效果较佳,与对照组相比,酒分平均提高0.3%以上,残总糖、残还原糖、残淀粉含量均得到明显降低。

NKT细胞在小鼠母胎免疫耐受微环境中作用的初步研究

目的探讨自然杀伤T(NKT)细胞在小鼠母胎免疫耐受微环境中的调节作用。方法将48只孕鼠随机分为4组:α-GalCer 1组、α-GalCer 2组、α-GalCer 3组和正常对照组,每组12只。α-GalCer 1、2、3组分别给予α-GalCer 10.3、20.6、41.2mg·L^(-1)腹腔注射,1次·d-1;正常对照组给予0.9%氯化钠注射液0.2mL腹腔注射,1次·d-1。每组实验重复3次。在干预24h后,免疫组织化学SP法检测孕鼠子宫内膜组织中CD3的表达,RT-PCR检测孕鼠外周血单核细胞、子宫蜕膜组织中IL-4mRNA、IFN-γmRNA的表达水平及IFN-γmRNA/IL-4mRNA相对灰度比值。结果在妊娠第3天小鼠干预24h后,与正常对照组比较,20.6mg·L^(-1)的α-GalCer(α-GalCer 2组)明显抑制外周血单核细胞和子宫内膜组织中IFN-γ以及外周血单核细胞中IL-4的mRNA表达,但促进子宫内膜组织中IL-4的mRNA表达(P<0.05)。20.6 mg·L^(-1)的α-GalCer(α-GalCer 2组)促进了外周血单核细胞中IFN-γ/IL-4相对灰度比值的升高,而明显抑制了子宫内膜组织中IFN-γmRNA/IL-4mRNA相对灰度的比值(P<0.05)。在子宫着床期间,由α-GalCer诱导的子宫内膜T细胞数量明显增多。结论围着床期α-GalCer诱导外周NKT细胞活化,可促使外周单核细胞中IFN-γ/IL-4的平衡向Th1漂移,而子宫内膜中活化的NKT细胞使IFN-γ/IL-4的平衡向Th2漂移,有利于子宫内膜形成免疫耐受微环境。

泡菜源屎肠球菌Enterococcus faecium R2的环境胁迫耐受性及安全性评价

屎肠球菌R2是分离于泡菜中的优势产酸菌,可高效利用豆腐黄浆水中的低聚糖产酸制备酸浆,可作为一种新型酸浆纯种发酵剂。该文通过毒力基因检测、万古霉素耐药基因筛查、有害代谢产物实验来评价屎肠球菌R2的安全性,并进一步研究该菌株对外界环境的耐受性,为生产一种新型酸浆纯种发酵剂奠定基础并为其实际生产应用提供科学基础。结果表明,屎肠球菌R2的毒力基因检测和万古霉素耐药基因筛查及有害代谢产物检测结果均为阴性,也不会产生溶血现象;该菌株对外界环境中的酸性、胆盐及高渗透压耐受性较好且具有一定的自聚集性和疏水性。由此可见屎肠球菌R2具有安全性。

特殊环境下环保型聚酯亚胺浸渍漆的测试评价

通过将亚胺单体改性聚酯树脂溶解于低黏度高沸点的丙烯酸酯中,制备了一种环保型聚酯亚胺浸渍漆。在特殊环境下对该漆进行试验,对比测试了试验前后产品的吸水率、粘结强度、拉伸剪切强度和电气强度。结果表明:该聚酯亚胺浸渍漆在冻结-加热、高温-浸水、冷热冲击、长时间浸水、恒温湿热5种环境试验后的力学性能和电气性能保持率均大于70%,表明该漆在特殊环境下的耐受性良好。

罗伊氏乳杆菌J1胃肠道耐受性评价及其对免疫相关基因调控的体外研究

以分离自传统发酵乳制品中的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,L.reuteri)J1为研究对象,对其黏附性能、生长特性、对胃肠道环境的耐受能力以及该菌株作用于Caco-2细胞不同时间后免疫相关基因表达量的动态变化进行评价。结果显示,罗伊氏乳杆菌J1具有良好的黏附性,黏附率达87.93%,具有定植于肠道中的潜力。该菌株在4 h进入对数期,14 h进入稳定期。在肠道耐受性评价中,菌株在pH为2.0和3.0条件下处理3 h后,其存活率分别为86.77%、97.12%;在胆盐质量浓度分别为0.3、0.5和1.0 g/100 mL的培养基中处理4 h后,其存活率分别为105.00%、82.60%和82.18%;经模拟人工胃液处理3 h后转入人工肠液继续培养8 h,存活率达82.71%;该菌株在7 g/100 mL的盐溶液中处理24 h后,其存活率为80.36%。此外,10^8CFU/mL的罗伊氏乳杆菌J1可刺激Caco-2细胞中免疫相关因子IL-1β的表达,抑制促炎因子IL-6和趋化因子IL-8的表达。综上表明,罗伊氏乳杆菌J1具有定植于肠道上皮细胞的潜力,耐受胃肠道环境,并发挥一定的免疫调节作用。