猪繁殖与呼吸综合征病毒反转录环媒恒温检测方法的建立

本研究利用PrimerExplorer V4软件设计了针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N基因保守区6个特异性部位的4种引物,建立了PRRSV的反转录环媒恒温检测方法。利用该方法所建立的反应体系在恒温水浴锅中作用1 h即可得到其特有的阶梯状条带,而且猪细小病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒和健康猪睾丸细胞的扩增结果均为阴性。本方法对PRRSV的最低检出量为1×100个～1×101个基因拷贝。反转录环媒恒温检测方法和普通RT-PCR方法检测临床样品的符合率为96.2%。该方法为现地开展猪繁殖与呼吸综合征的快速诊断和综合防治方案的提出提供了有力的诊断工具。

环媒恒温基因扩增法检测藤黄微球菌的研究

目的建立藤黄微球菌的环媒恒温基因扩增检测方法。方法基于藤黄微球菌23S rRNA基因部分序列设计1套(共4条)能够识别6个区域的特异性引物;优化扩增条件;评估该方法的特异性与敏感性。结果用7个参考株和大肠埃希菌等8种其他临床病原菌检验本检测法,成功地建立了环媒恒温基因扩增(LAMP)检测法。结论环媒恒温基因扩增法检测藤黄微球菌快速、灵敏高、特异性强。

环媒恒温扩增（LAMP）技术在寄生虫检测中的应用

环媒恒温扩增（Loop—mediatedisothermalamplification，LAMP）技术是一种快速、简单、敏感、特异的核酸扩增方法。作为一种新的核酸扩增方法，LAMP法被逐渐应用于寄生虫、病毒、微生物的检测，是最有发展前景的快速诊断方法之一，本文就LAMP技术在寄生虫检测方面的应用发展情况进行综述。

鸡传染性法氏囊病毒反转录环媒恒温检测方法的初步建立

本研究利用Primer Explorer V4软件设计了针对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)VP1基因保守区6个特异性部位的4条引物,建立了IBDV的反转录环媒恒温检测方法。该方法反应体系在恒温水浴锅中作用1 h即可得到其特有的阶梯状条带,加入荧光素后肉眼可直接观察结果。本方法特异性高,对IBDV的最低检出量为10-6稀释倍数,敏感性是普通RT-PCR的100倍。反转录环媒恒温检测方法和普通RT-PCR方法检测临床样品的符合率为93.8%。因此该方法可以作为IBDV的综合防治和疾病诊断的实用方法。

环媒恒温扩增技术及其在疫病检测中的应用

介绍环媒恒温扩增技术的基本原理、特点及其在疫病检测和诊断中的应用情况。环媒恒温扩增技术具有简便、快速、特异性和灵敏性强、扩增效率高等特点,被广泛应用于各种细菌性疾病、病毒性疾病、寄生虫病等很多方面的研究与检测。

利用环媒恒温基因扩增法检测生猪刚地弓形虫

基于已公布的刚地弓形虫Sag2基因序列设计了1套特异引物,经过条件优化,成功建立了针对刚地弓形虫(简称弓形虫)的环媒恒温基因扩增检测法.根据扩增弓形虫和其他几种病原生物的效果对该方法进行评估.结果表明,该方法只检出致病性弓形虫,特异性良好;检测最低速殖子浓度为4个/μL.对长沙、株洲、湘潭三地生猪血样检测的结果是仔猪、成猪和种母猪弓形虫感染率分别为6.45%、7.69%和15.38%.

内引物在环媒恒温基因扩增技术中的作用研究

目的研究内引物在环媒恒温基因扩增(LAMP)中的作用,确定利用LAMP的同一套特异性引物区别具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌基因的可行性。方法采用PCR介导定点突变法对沙门氏菌invA基因定点突变,使其T669→A669、T725→A725,用原LAMP特异性引物扩增含单核苷酸差异序列,观察扩增结果。结果制备的点突变模板C大小与预期值(1 371 bp)一致。LAMP扩增的伤寒沙门氏菌CMCC50098标准株DNA产物的电泳条带呈梯状,而扩增模板C未扩出反应产物。结论LAMP不能利用同一套引物扩增具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌,即可利用同一套引物区分这些病原菌。

环媒恒温基因扩增技术文献计量分析

通过环媒恒温的文献量、文献内容、文献作者分布等方面分析国内外环媒恒温基因扩增技术的研究现状及存在问题,揭示并预测环媒恒温基因扩增技术在基因检测中的特点和研究趋势、发展方向,为环媒恒温科学研究及信息交流提供参考依据。

环媒恒温扩增技术（LAMP）检测原型泡沫病毒

目的利用环媒恒温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP），建立检测原型泡沫病毒（prototype foamy virus，PFV）的方法。方法根据PFV的整合酶核心区基因序列设计了3对LAMP引物，利用有链取代活性的Bst DNA聚合酶在63℃对靶序列进行扩增。优化检测条件，建立PFV的检测方法。结果以含目的片段的质粒为模板建立了PFV的检测方法，运用此方法可特异地检测出PFV，而人免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒、牛泡沫病毒检测均为阴性，检测灵敏度为50拷贝，较聚合酶链反应高一个数量级。系统可以在15min内完成扩增，同时可以在细胞基因组干扰下检出病毒，对混有病毒基因的人外周血单个核细胞（PBMC）总DNA的检测呈现特异阳性反应。结论建立基于PFV整合酶基因的LAMP检测方法，在PFV感染检测方面有应用前景。

嗜水气单胞菌Lamp检测方法的建立及应用

基于嗜水气单胞菌气溶素（aerolysin）基因的序列，设计了1套引物，通过条件优化，成功建立了针对致病性嗜水气单胞菌的环媒恒温基因扩增（Lamp）检测法。采用Lamp法对病原菌进行了扩增，并对病鱼血样进行了检测。结果表明，该法只检出致病性嗜水气单胞菌。对不同浓度的细菌悬液扩增结果表明，Lamp检测嗜水气单胞菌的最低菌液浓度为1．4～14／μL。

家畜胚胎性别鉴定技术的研究进展

性别控制是按照人们的意愿生产特定性别后代的动物繁殖新技术。早期胚胎性别鉴定是人们实现性别控制的重要途径。随着科学技术的发展和各种新的研究工具在性别鉴定中的应用,尤其是聚合酶链式反应(PCR)技术的应用,性别鉴定在生产实践中的应用越来越广泛。本文综述了胚胎性别鉴定方法的基本原理和研究概况,并阐述了该技术存在的问题和发展前景。

猪圆环病毒2型LAMP检测方法的建立与评价

根据猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Rep和Cap基因保守区设计2对引物,1对外引物和1对内引物;利用设计的4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,对PCV2 DNA进行恒温扩增;扩增条件为63℃恒温反应1h;建立了PCV2环媒恒温扩增技术(LAMP)检测方法。对检测方法特异性评价表明,检测方法只能检测PCV2 DNA,对猪圆环病毒1型(Porcine circovirus type 1,PCV1)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)及猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)检测无交叉反应。灵敏度评价表明,该检测方法可以检测到样品中10个拷贝的PCV2 DNA含量。