中医药防治环孢素肾毒性研究进展

环孢素A(cyclosporine A,CsA)是钙调神经磷酸酶抑制剂(calcineurin inhibitor,CNI),目前广泛应用于实体器官移植及自身免疫性疾病的治疗,但其肾毒性导致的慢性环孢素肾病(chronic cyclosporine nephropathy,CCN),严重影响移植器官和患者的长期存活[1]。约1/3患者会出现与CsA剂量相关的肾功能损伤,表现为血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)增高及肾小球滤过率(GFR)下降,慢性、进行性肾毒性多发生于CsA治疗后的12个月,现代医学防治环孢素肾毒性(cyclosporine A nephrotoxicity,CN)措施有限,主要是定期监测血药浓度、改善微循环及调整免疫抑制方案[2]。

钙拮抗剂对环孢素A肾毒性的防护作用及其机制

环孢素Ａ的肾毒性（ＣｓＡ－ＮＴ）限制了它在肾移植临床的应用，寻求防护ＣｓＡ－ＮＴ的方法十分重要，钙拮抗剂（ＣＡ）是一类比较理想的药物。本文对各种ＣＡ对ＣｓＡ－ＮＴ的防护作用及其机制作一综述。

川芎嗪对环孢素A致大鼠离体灌注肾毒性作用的防治研究

本研究应用环孢素 A(CsA)致大鼠离体灌注肾急性血流动力学障碍模型,研究了川芎嗪对 CsA 肾毒性的防治作用。结果表明:川芎嗪可有效地预防 CsA 所导致的离体灌注的肾灌注流量、肾小球滤过率、尿量下降及肾血管阻力升高等血流动力学障碍,而内皮源性舒张因子(EDRF)抑制剂血红蛋白可阻抑川芎嚷的上述作用,提示川芎嗪可能通过保护血管内皮细胞释放 EDRF 而对 CsA 急性肾毒性具有一定的预防作用。

血管紧张素Ⅱ及其受体在慢性环孢素A肾毒性大鼠肾组织中的表达

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体在慢性环孢素A(CsA)肾毒性中的表达。方法 Sprague-Daw-ley大鼠皮下注射CsA(15mg·kg-1.d-1)4周,建立慢性CsA肾毒性模型;正常对照组皮下注射橄榄油。检测各组大鼠的体重、收缩期血压、血CsA浓度、血清肌酐、肌酐清除率;三色染色观察肾小管间质纤维化;免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹法分别检测AngⅡ及其受体AT1和AT2的表达。结果慢性CsA肾毒性组表现为体重减少、血肌酐上升、肌酐清除率下降、肾小管间质带状纤维化(P<0.01)。与对照组相比,毒性组大鼠AngⅡ的免疫活性明显增加(47±7vs13±4,P<0.01),主要分布于入球动脉的肾小球旁器,与肾小管间质纤维化程度紧密相关(r=0.769,P<0.001)。免疫印迹显示毒性组AngⅡ受体AT1的表达明显减少[(114±14)%vs(42±6)%,P<0.01],而AT2的表达增加[(129±23)%vs(469±43)%,P<0.01]。结论在慢性CsA肾毒性中,肾内肾素血管紧张素被激活,表现为AngⅡ免疫活性增加,这种AngⅡ免疫活性与肾小管间质纤维化紧密相关。

阿魏酸哌嗪对环孢素A慢性肾毒性大鼠肾脏的保护作用

目的探讨不同剂量阿魏酸哌嗪（PF）对环孢素A（CsA）慢性。肾毒性大鼠肾脏TGF-β／Smads通路的影响。方法采用低盐饮食加CsA20mg·kg^-1·d^-1灌胃的方法建立环孢素A慢性肾毒性肾脏模型。雄性SD大鼠24只，随机分为正常对照组（N）、模型组（M）、PF低剂量治疗组（P1）、PF高剂量治疗组（P2）。第4周末肾组织行HE染色观察肾组织病理学变化；免疫组织化学和RT-PCR技术检测不同剂量PF对大鼠肾脏TGF-β1、Smad3、Smad7的影响。结果PF能下调CsA慢性肾毒性大鼠肾组织中TGF-β1、Smad3及其mRNA水平的表达，上调Smad7及其mRNA水平的表达。结论PF可能通过下调TGF-β1、Smad3，上调Smad7来发挥其防治CsA慢性肾毒性的作用。

骨桥蛋白和核转录因子在慢性环孢素A肾毒性中的作用

目的探讨炎性介质骨桥蛋白(OPN)的表达和核转录因子在慢性环孢素A(CsA)肾毒性中的作用。方法雄性Sprague-Dawley大鼠喂食低盐(0.05%钠盐)饲料下分为两组,正常对照组给予皮下注射橄榄油(1 mL·kg-1·d-1);毒性组给予皮下注射CsA(15 mg·kg-1·d-1)4周。通过观察炎性细胞浸润(ED-1)和肾小管间质纤维化,比较两组大鼠的肾小管间质损伤程度;采用RNA印迹、免疫组织化学染色方法检测OPN在mRNA和蛋白水平的表达;用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)分析法和免疫印迹法测定核转录因子(NF-κB和AP-1)的结合活性和IκB蛋白的表达。结果毒性组大鼠表现为肾小管间质带状纤维化[(38.9±3.3)%/5 mm2vs(0±0)%/5 mm2,P<0.01]和大量ED-1阳性细胞浸润[(89±9)vs(7±2),P<0.01]。与对照组相比,毒性组大鼠OPN mRNA和蛋白的表达增加[(729±37)%vs(103±4)%,P<0.01],分布于肾小管上皮细胞,其主要位于肾小管间质损伤部位;毒性组核转录因子NF-κB[(218±19)%vs(116±15)%,P<0.01]和AP-1[(735±225)%vs(101±4)%,P<0.01]结合活性增加,而IκB蛋白的表达减少[(9±7)%vs(105±7)%,P<0.01]。直线相关分析示OPN mRNA的表达与肾小管间质纤维化程度(r=0.959,P<0.001)和核转录因子的结合活性呈正相相关(NF-κB:r=0.773,P<0.01;AP-1:r=0.619,P=0.01)。结论炎性介质OPN和核转录因子参与了慢性CsA肾毒性肾小管间质的损伤。

Klotho对CsA慢性肾毒性大鼠肾脏内质网应激相关凋亡的影响

24只雄性SD(Sprague dawley)大鼠在低盐饮食的基础上,随机分为3组:对照组、模型组、治疗组。模型组给予环孢素A(Cyclosporin A,Cs A)30 mg/kg/d腹腔注射共28 d建立慢性肾毒性大鼠模型;治疗组在给予等量Cs A的基础上腹腔注射给予重组可溶性Klotho蛋白(0.02 mg/kg/d腹腔注射,隔日一次)。28 d后处死大鼠,收集肾组织标本;行Masson染色观察肾脏病理损害;TUNEL(Td T-mediated d UTP nick end labeling)染色观察细胞凋亡情况;Western-blot检测肾组织内质网应激标志物兔抗葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(pro-apoptotic protein CCAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)的表达情况。分析发现,模型组大鼠肾脏病理损害明显加重,肾小管上皮细胞大量凋亡,GRP78及CHOP表达显著上调,而Klotho治疗组大鼠肾脏病理损害明显减轻,细胞凋亡减少,GRP78及CHOP的表达明显降低。表明Klotho蛋白可通过抑制内质网应激诱导的凋亡缓解Cs A慢性肾毒性的发生。

依普利酮抑制细胞增殖拮抗急性环孢素A肾损伤的研究

目的探讨盐皮质激素受体阻断剂依普利酮抑制细胞增殖拮抗环孢素A肾损伤的作用。方法经口灌服环孢素A(100 mg.kg-1.d-1),诱导小鼠急性肾脏损伤,给以依普利酮100 mg.kg-1.d-1治疗,d 10采血、摘取肾脏。放免法检测血清醛固酮水平,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PC-NA)、纤连蛋白表达;RT-PCR、Western blot检测PCNA、FN、TGF-β1表达。结果血清醛固酮水平检测显示环孢素A组(318.83±95.72)ng.L-1较空白对照组(82.05±23.04)ng.L-1升高,依普利酮可明显抑制其分泌(149.50±36.20)ng.L-1。环孢素A组肾脏PCNA阳性细胞增多,纤连蛋白表达增强;PCNA、FN、TGF-β1蛋白及mRNA表达较空白对照组明显上调,依普利酮可抑制其表达。结论依普利酮可以抑制醛固酮的分泌、抑制细胞增殖,减轻环孢素A诱导的肾脏损伤。

依普利酮对环孢素A急性肾损伤小管上皮细胞坏死及再生的作用

目的观察盐皮质激素受体阻断剂依普利酮保护环孢素A肾病小管上皮细胞的作用。方法经口灌服环孢素A(100 mg.kg-1.d-1),诱导小鼠急性肾脏损伤,给予依普利酮100 mg.kg-1.d-1治疗,d 5将5-溴脱氧尿嘧啶核苷(40mg.kg-1.d-1)经微型渗透泵皮下注入,10 d后摘取肾脏,HE、PAS检测肾脏病理改变,免疫组化检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞标记再生细胞。结果肾脏病理显示环孢素A组小管上皮细胞坏死、小球包氏囊增厚、间质纤维成分沉积,凋亡细胞增多,免疫组化显示再生细胞数量减少,依普利酮治疗组上皮细胞坏死减轻,间质纤维沉积减少,再生细胞明显增多。结论依普利酮可以通过对醛固酮受体的阻断减轻环孢素A诱导的急性肾脏损伤。

曲尼司特对CsA慢性肾毒性大鼠TGF-β/Smad通路的影响

目的探讨不同剂量曲尼司特(TNL)对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠肾脏TGF-β/Smad通路的的影响。方法雄性SD大鼠34只,随机分成正常对照组、模型组、TNL低剂量治疗组、TNL中剂量治疗组、TNL高剂量治疗组、安博维治疗组。采用低盐饮食加CsA20mg/(kg·d)灌胃的方法建立环孢素A慢性肾毒性大鼠模型。用RT-PCR和免疫组织化学检测不同剂量TNL对大鼠肾脏TGF-β1、Smad3、Smad7的影响。结果TNL能下调CsA慢性肾毒性大鼠肾组织中TGF-β1、Smad3的mRNA水平及在肾脏的表达,上调Smad7的mRNA水平及在肾脏的表达。结论在CsA慢性肾毒性大鼠模型中,TNL可能通过调节TGF-β/Smad通路而发挥抗纤维化的作用,从而减缓CsA慢性肾毒性的进展。

慢性肾脏病临床缓解期的治疗

慢性肾脏病（CKD）的临床缓解期是指原发性或继发性CKD经治疗后部分缓解,仍留有轻度血压高和残留蛋白尿。高血压和蛋白尿是CKD进展的独立危险因素,血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）和血管紧张素受体阻断剂（ARB）已成为治疗高血压和蛋白尿的主要药物。但近年来发现,应用ACEI和ARB后,血压虽已达标,但尿蛋白不能降至正常,有些降至正常后经一段时间又升高。

黄芪-丹参调控脂肪酸代谢改善环孢素A慢性肾毒性的机制

目的:探讨黄芪-丹参通过调控脂肪酸代谢改善环孢素A(CsA)慢性肾毒性的作用。方法:40只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:正常组、模型组、黄芪-丹参低剂量组、黄芪-丹参高剂量组及缬沙坦组,每组8只。以CsA 30 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃建立CsA慢性肾毒性模型,造模时黄芪-丹参低、高剂量组组分别给予4.2、8.4 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,缬沙坦组给予10 mg·kg^(-1)·d^(-1)。6周后观察小鼠肾功能相关血尿指标,HE、Masson及PAS染色观察肾脏病理,肾组织蛋白质测序构建黄芪-丹参干预下的肾脏蛋白表达图谱,并对高度富集的脂肪酸代谢相关通路及差异基因PPARα、GK、Hmgcs2、Plin2、Degs1、Agpat5、Neu1、Pck1进行筛选及验证。结果:与正常组比较,模型组体质量下降、尿量较少,BUN、Scr、UACR、NAG、IL-6、MDA、FFA升高,黄芪-丹参干预后均显著降低(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组肾小管胞质空泡化、扩张及萎缩,肾间质炎症细胞浸润,肾小球基底膜增厚,胶原纤维明显增生,黄芪-丹参干预后均有不同程度改善。鉴定出PPAR信号通路等10条与脂肪酸代谢等密切相关的靶通路,脂肪酸代谢相关通路中的差异蛋白PPARα、GK、Hmgcs2、Plin2、Degs1、Agpat5、Neu1、Pck1均有较高的AUC预测性。与模型组比较,黄芪-丹参上调了PPARα、PGC-1α、Acox1的蛋白表达,下调了TGF-β1、Caspase3的蛋白表达,改善了肾组织凋亡、脂质累积及Ⅰ型与Ⅲ型胶原沉积。PPARα敲减后,PGC-1α、Acox1蛋白表达下调,TGF-β1、Caspase3蛋白表达上调,肾组织凋亡、脂质累积及Ⅰ型与Ⅲ型胶原沉积加剧,黄芪-丹参干预后均有不同程度的改善。结论:黄芪-丹参能够通过调控PPARα/PGC-1α/TGF-β1轴,改善脂肪酸氧化供能,减少肾组织凋亡、脂质累积及胶原沉积,改善机体炎症、氧化应激及脂质过载,保护肾功能。

芸香甙对环孢素A肾毒性防护作用的实验研究

目的:探讨芸香甙(Rutoside,Ru)对环孢素A(cyclosporine A,CsA)肾毒性防护作用及其机制。方法:取雄性SD大鼠20只,随机分为4组(n=5):正常对照组、Ru组、CsA模型组、CsA+Ru治疗组。CsA模型组和CsA+Ru治疗组均用CsA50mg/kg灌胃,Ru组与CsA+Ru组分别腹腔注射NS10ml/kg+Ru20mg/kg。以上各组每天给药一次,连续给药15天。各组大鼠于给药第14天后置代谢笼中收集24h尿液,测定尿Cr、尿蛋白含量。末次给药5个小时后,取血检测血清Cr、BUN含量和肾组织中丙二醛(MDA)含量、内皮素(ET)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;肾组织用10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,HE染色,光镜观察肾组织其形态学变化。结果:Ru对CsA所致的尿蛋白、BUN、Cr、肾组织MDA、ET含量的升高均有显著降低作用,并明显增加肾组织SOD活性,对CsA引起的肾小球与肾小管的病理性损伤有较好的保护作用。结论:Ru对CsA所致的肾脏毒性具有明显的保护作用。

基于“肠-肾轴”理论探讨芪黄四物汤对环孢素A慢性肾毒性的保护机制

目的:探讨芪黄四物汤通过"肠-肾轴"调节肠道菌群进而对环孢素A(CsA)慢性肾毒性的保护作用。方法:24只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:对照组、模型组及芪黄四物汤组,每组8只,以CsA 30mg·kg-1·d-1灌胃建立CsA慢性肾毒性模型,造模时芪黄四物汤组给予0.48g·kg-1·d-1灌胃,模型组及对照组等量0.9%氯化钠溶液灌胃,6周后观察3组小鼠一般情况及肾功能、炎症及尿毒素指标[血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24h尿蛋白定量、白介素-6(IL-6)、硫酸吲哚酚(IS)],HE、Masson染色观察结肠组织及肾脏病理,免疫荧光观察结肠组织闭锁小带蛋白1(ZO-1)及肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)表达,并提取小鼠肠道微生物总DNA进行16S rDNA V3+V4区测序。结果:与对照组比较,模型组小鼠体质量降低,尿量减少,Scr、BUN、24h尿蛋白定量、IL-6、IS指标均显著升高(P<0.05);与模型组比较,芪黄四物汤干预后均显著改善(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠结肠组织ZO-1表达减少,肾组织示肾小球基底膜增厚、小动脉玻璃样变,肾小管空泡变性伴有萎缩、间质炎症细胞浸润、增宽伴有条带状纤维化,胶原纤维及TGF-β1表达增加;芪黄四物汤干预后均有不同程度改善。与对照组比较,模型组小鼠菌群丰度与多样性均降低,厚壁菌门与拟杆菌门比值(F/B)升高(P<0.01),拟杆菌属等致病菌含量增加(P<0.05),乳杆菌属等益生菌含量降低;芪黄四物汤增加了阿克曼属等益生菌含量,改善了菌群紊乱。结论:芪黄四物汤能够通过"肠-肾轴"降低CsA慢性肾毒性小鼠肠道通透性,增加阿克曼属等益生菌的含量、降低拟杆菌属等致病菌的含量,改善炎症及纤维化状态,降低尿毒素水平,保护肾功能。

曲尼司特对CsA慢性肾毒性大鼠AngⅡ和ET-1的影响

研究曲尼司特对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠的肾脏保护作用,发现曲尼司特能减低环孢素A慢性肾毒性大鼠血浆和肾组织中AngⅡ的含量,并下调肾组织中ET-1的表达.结果表明曲尼司特可能通过下调环孢素A慢性肾毒性大鼠血浆和肾组织中AngⅡ的的水平以及肾组织中ET-1的表达,减轻肾脏病理损害,发挥其肾脏保护作用.