钙调神经磷酸酶对前B淋巴细胞及其转化的白血病细胞凋亡影响的研究

本研究比较钙调神经磷酸酶(calcineurin,PP2B,PP3)在小鼠前B淋巴细胞系(S9)及其转化的白血病细胞系(S4C2)中的差异表达,并探讨其参与白血病细胞凋亡的可能机制。用实时定量PCR技术检测H2AX磷酸化酶ATM、ATR、DNA-PKs、JNK1、P38和γ-H2AX磷酸酶PP1、PP2A、calcineurin、PP4、PP6、PP5、γ-PP2c、WIP-1在S9细胞和S4C2细胞之间的表达差异。用CCK-8法和流式细胞术检测伊马替尼(IM)和环孢霉素A(CsA)对细胞的毒性作用和凋亡的影响。利用Western blot技术检测药物对S9细胞和S4C2细胞凋亡的影响。结果发现,钙调神经磷酸酶基因在白血病细胞S4C2中的表达约为S9细胞的3.5倍,而其余基因的表达在两种细胞间无明显差异。IM和CsA对S4C2细胞的促凋亡作用明显强于S9细胞,同时两种药物对S4C2细胞毒性作用高于对S9细胞的毒性作用。钙调神经磷酸酶蛋白在S4C2细胞中的表达高于S9细胞。CsA特异性抑制钙调神经磷酸酶活性后,DNA损伤标记物γ-H2AX在S9细胞的表达明显低于S4C2细胞,而伊马替尼对其表达的影响在两细胞系之间无明显差异,联合应用两种药物时γ-H2AX在S9细胞的表达也低于S4C2细胞。结论:钙调神经磷酸酶在B淋巴细胞白血病细胞中发挥一定的抗凋亡作用,环孢素A抑制钙调神经磷酸酶活性促进了白血病细胞的凋亡。