环形泰勒虫亚端粒编码可变分泌蛋白家族部分基因的研究进展

环形泰勒虫作为一种转化型泰勒虫,可感染牛单核巨噬细胞,并使其发生转化。目前,仅知环形泰勒虫通过劫持宿主细胞信号通路完成转化,但其转化机制尚未阐明。环形泰勒虫亚端粒编码可变分泌蛋白(SVSP)家族作为环形泰勒虫基因组的最大多基因家族,其在虫体-宿主相互作用中的功能尚不清楚。因此,本文通过对环形泰勒虫SVSP家族中部分基因的结构、表达特征、与宿主相互作用和可能发挥的功能进行总结,以期为环形泰勒虫-宿主相互作用机制和致病机理研究提供思路,同时也为癌症基础生物学研究提供借鉴。

新疆和田地区于田县牛源环形泰勒虫种群基因型及遗传多样性分析

为探究新疆和田地区于田县牛源环形泰勒虫种群的基因型分布及遗传多样性,试验首先从该县10个乡镇(阿羌乡、喀尔克尔乡、科克亚乡、木尕拉镇、斯也克乡、先拜巴扎镇、英巴格乡、加依乡、奥依托格拉克乡、阿日希乡)采集疑似环形泰勒虫病患牛血液样本共443份,提取基因组DNA后对牛源环形泰勒虫Tams1基因进行PCR检测,统计10个乡镇牛源环形泰勒虫的阳性样本数及阳性率;然后在发现阳性样本的乡镇中,每个乡镇随机选取2个阳性样本进行测序,将测序结果进行同源性分析并与参考序列共同构建NJ系统发育树,分析基因型;最后对于田县环形泰勒虫种群进行遗传多样性分析。结果表明:在443份牛血液样本中,有93份样本环形泰勒虫检测结果为阳性,阳性率为20.99%;10个乡镇中有9个乡镇牛源环形泰勒虫检测结果为阳性,阳性率在10.45%~45.45%之间,其中阿羌乡阳性率最高,加依乡未检出。18株环形泰勒虫Tams1基因序列的核苷酸相似性为76.0%~100%,同乡镇的2个阳性样本之间的核苷酸相似性为91.0%~100%;这18株牛源环形泰勒虫在NJ系统发育树中未全部聚为一支,一些虫株甚至与其他国内外参考毒株表现出了更近的亲缘关系,但均为G1基因型。于田县G1基因型环形泰勒虫种群多态性位点数为119个,核苷酸多样性为0.053,平均核苷酸差异数为28.95个,单倍型数为12个,单倍型多样性为0.895,Tajima’s D值和Fu and Li’s F值均小于0。说明于田县G1基因型环形泰勒虫种群具有较高的遗传多样性且正在发生扩张。

牛环形泰勒虫烯醇化酶重组蛋白对小鼠免疫应答的研究

为了评估牛环形泰勒虫(Theileria annulata)烯醇化酶(enolase)原核重组蛋白对实验动物体液免疫水平和细胞免疫水平的影响,用His纯化柱和超滤管对pET-32a-enolase进行纯化和浓缩,应用Western blot分析蛋白的反应原性;另外利用牛环形泰勒虫烯醇化酶重组蛋白(r Ta-enolase)免疫Balb/c鼠制备多克隆抗体,经间接ELISA检测血清中重组蛋白的特异性抗体水平。免疫后,取小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,用流式细胞术检测脾脏T细胞亚群情况;用MTT试剂盒检测体外刺激后T淋巴细胞增殖情况;用Spss ANOVA单因素检验进行差异显著性分析。Western blot表明,enolase重组蛋白可与阳性血清发生特异性反应。ELISA检测免疫鼠特异性IgG/IgG1和IgG2a抗体均与对照组差异极显著(P<0.01);流式细胞术检测表明,免疫组(2.53±0.11)与对照组(1.85±0.11)CD4^(+)/CD8^(+)T细胞的比值差异极显著(P<0.01);用r Ta-enolase重组蛋白刺激小鼠脾脏淋巴细胞后明显促进其增殖(P<0.05)。研究结果表明r Ta-enolase免疫小鼠能够诱导小鼠产生极高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平,细胞免疫应答偏向于CD4^(+)T细胞,为后续其在疫苗中的免疫功能提供数据资料。

喀什地区某牛场环形泰勒虫的分子生物学鉴定及分析

试验旨在鉴定喀什地区某牛养殖场的西门塔尔牛的病因,对疑似感染泰勒虫的病牛血液进行PCR检测。运用PCR方法对泰勒虫18S rRNA基因进行扩增、测序,通过MEGA 7.0软件构建系统进化树,同时进行遗传进化分析。结果显示,18S rRNA基因序列与环形泰勒虫中国新疆分离株(OM438135.1)同源性为100.0%,表明该场病牛为环形泰勒虫感染;系统进化树分析结果显示,该虫株与中国和巴基斯坦分离株亲缘关系比较近。研究表明,导致喀什某牛场西门塔尔牛患病的病原体是环形泰勒虫。

基于TashHN基因的牛环形泰勒虫病PCR诊断方法的建立

根据Genbank已发表的环形泰勒虫TashHN基因序列设计合成引物,以此建立基于环形泰勒虫TashHN基因的PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性、稳定性进行验证,并用建立的方法对宁夏固原地区各县共计135份牛血样进行检测。结果表明:建立的基于TashHN的PCR检测方法与中华泰勒虫、东方泰勒虫、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫均无交叉反应;可检测的最低模板浓度为1.64×10^(2) copies/μL;环形泰勒虫的DNA在-20℃冰箱放置8个月后仍可检测出目的条带;该方法利用已有文献中的PCR方法进行一致性检测,从135份牛血样中检测出5份阳性,说明该方法准确可靠。因此,试验建立的基于环形泰勒虫TashHN基因的PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、稳定性强的特点,适用于临床上环形泰勒虫早期感染检测以及流行病学的调查。

新疆一例牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染的病例初报

2021年8月17日,新疆托克逊县一头西门塔尔母牛出现高热、瘤胃胀气、肌肉震颤、呼吸急促、结膜黄染和血红蛋白尿等临床症状。为确认发病原因,采集该牛全血和体表蜱虫样品进行光学显微镜观察、血常规检测和聚合酶链式反应(PCR)检测。血涂片镜检结果显示,患牛疑似牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染;血常规检测显示,血红蛋白、血红细胞压积、平均血红蛋白浓度和中性粒细胞等指标下降,血小板和淋巴细胞百分比等指标上升,提示该牛机体存在贫血和炎症反应;血液样品PCR结果显示,牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体检测均呈阳性;蜱虫样品PCR结果显示,牛环形泰勒虫检测为阳性。综上,患牛最终被诊断为牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染。目前,此3种病原共同感染牛的案例极为少见。本研究为今后牛混合感染牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体的临床诊断提供了参考。

牛环形泰勒虫病的流行特点及防治措施分析

环形泰勒虫病是一种人畜共患寄生虫病,人类和牛都可以感染该病。人类主要通过食用被感染的且未煮熟的牛肉感染该病,牛则主要通过摄入被感染的食物或水源患病。以该病为研究对象,围绕其流行特点、鉴别诊断和防治措施展开讨论,指出要想降低牛患病的概率,关键要从环境、饮食、卫生、养殖方式等角度出发,根据实际情况采取恰当的手段及措施。

广西本地黄牛环形泰勒虫病的诊治报告

牛环形泰勒虫病是由泰勒科泰勒虫属的环形泰勒虫寄生于黄牛、水牛、瘤牛、牦牛及犏牛的红细胞和淋巴细胞内所引起的一种血液原虫病,该病表现为地方性流行并且季节性明显,多呈急性经过,发病率和死亡率高,可给养牛业造成巨大的经济损失^([1-2])。2020年9月,广西西部山区某县牛场发生一起病例,经流行病学调查、病理剖检和实验室检查,确定是由环形泰勒虫感染所致。现将情况报告如下。

环形泰勒虫TA13815蛋白的原核表达及反应原性分析

为研究环形泰勒虫(Theileria annulata)TA13815蛋白功能,对环形泰勒虫虫体蛋白TA13815基因的核苷酸序列及编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,构建pET30a-TA13815重组表达载体,并对其进行原核表达及反应原性分析。SDS-PAGE结果显示,蛋白的分子质量大约为29.663 ku,主要以包涵体形式表达,条带位置显示蛋白的分子质量比预期大,蛋白可能存在翻译后修饰。通过qPCR分析环形泰勒虫3个不同发育阶段,结果显示TA13815 mRNA在3个阶段均有表达,且在裂殖体阶段表达量最高。本试验成功表达了环形泰勒虫TA13815重组蛋白,该重组蛋白有较好的反应原性,且能与抗His标签蛋白的单克隆抗体和环形泰勒虫阳性血清发生特异性反应,而与健康牛血清无交叉反应。TA13815蛋白与东方泰勒虫的核苷酸和蛋白同源性均小于68%,表明该重组蛋白可作为间接ELISA诊断方法的备选抗原。

环形泰勒虫分泌蛋白与其转化细胞互作研究进展

环形泰勒虫是由璃眼蜱属的蜱传播的胞内寄生虫,可感染牛的单核巨噬系统的细胞和红细胞,引起牛的环形泰勒虫病,给畜牧养殖业造成严重的经济损失。与其他顶复门寄生虫不同,环形泰勒虫裂殖体可感染并转化宿主免疫细胞,使其发生永生化,具有某些癌细胞表型;同时,环形泰勒虫转化宿主细胞的特性是可逆的,这为研究胞内寄生虫与宿主细胞相互作用提供了强有力的模型。因此,对环形泰勒虫分泌蛋白与其宿主细胞的相互作用研究进展进行描述,以期为深入理解泰勒虫转化细胞机制和疫苗研制提供参考。

环形泰勒虫裂殖体表面蛋白基因PCR诊断方法的建立

为寻求一种快速灵敏的环形泰勒虫病PCR检测方法,基于环形泰勒虫裂殖体表面蛋白(Theirelia annulata surface protein,TaSP)基因序列保守区设计特异性引物,通过PCR技术扩增出该基因长为393bp的高免疫原性区片段。用该引物对环形泰勒虫、中华泰勒虫、瑟式泰勒虫、尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、马泰勒虫、驽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫基因组模板进行特异性试验,对环形泰勒虫基因组模板进行梯度稀释后扩增,以确定试验的敏感性,同时用本试验建立的方法与常规显微镜镜检方法对150份血清样品进行检测。特异性试验结果显示,在被检测的9个样本中,只有环形泰勒虫基因组模板中扩增出了符合大小的特异核苷酸片段;敏感性试验结果表明,PCR对环形泰勒虫的扩增效率可达到10-10;通过对150份血清样品的检测,并与血涂片方法进行比较,结果显示PCR方法具有特异性强、敏感度高等特点,适用于牛环形泰勒虫病的检测。

残缘璃眼蜱人工培育及对环形泰勒虫的实验性传播

将采自内蒙古自治区的残缘璃眼蜱 (Hyalommadetritum )饲喂于牛体 ,观察了成虫、幼虫、若虫在实验室饲喂条件下的生活周期及滞育现象 ;通过蜱传播试验证实 ,残缘璃眼蜱饥饿幼虫、若虫吸入病原 ,其蜕化之若虫、成虫能将环形泰勒虫 (Theileriaannulata)传播给敏感动物 ,而幼虫阶段吸入病原 ,如若虫阶段在兔体饱血 。

环形泰勒虫中国分离株表面蛋白氨基酸序列分析(英文)

目的研究环形泰勒虫表面蛋白(TaSP)在中国分离株中的多态性。方法将来自内蒙古自治区、宁夏回族自治区和新疆维吾尔自治区的3个环形泰勒虫分离株在RPMI1640培养液中进行培养,PCR扩增裂殖体基因组DNA中TaSP基因并进行测序。测序结果用ClustalW2多序列比对软件进行分析,应用在线生物软件进行蛋白质分子组成和基元的预测。结果 3个中国分离株TaSP氨基酸序列比对表明,被称为高免疫原性区的中央部分(第38-161个氨基酸)无论在长度还是氨基酸序列组成上均呈多态性,而N-末端(前37个氨基酸)和C-末端(最后154个氨基酸)极端保守。系统进化树和同源百分比分析表明,中国分离株与土耳其分离株具有较近的亲缘关系,而与印度、摩洛哥和突尼斯分离株差异较大。更为重要的是,在中国分离株之间TaSP存在变异性。这种变异性引起不同分离株间在某些基元,特别是酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点的分布和数量上的变化。结论环形泰勒虫TaSP在不同的中国分离株中具有多态性。

环形泰勒虫病疫苗防制的研究进展

疫苗防制是控制和根除环形泰勒虫病的一种最安全、有效的方法。本文就目前环形泰勒虫病疫苗防制的研 究进展作一全面的综述,并对其未来的发展趋势进行探讨。

环形泰勒虫裂殖体表面蛋白基因高免疫原性区片段的克隆及其表达

根据环形泰勒虫TaA12 72 1株裂殖体表面抗原 (TaSP)基因的序列设计了 1对引物 ,用PCR扩增出该基因长为 393bp的高免疫原性区片段 (SBxp)。将扩增产物连接到 pGEM TEasy载体上 ,转化入大肠埃希氏菌JM 10 9中进行克隆。随后将重组质粒 pGEM SBxp和表达载体 pGEX 4T 1分别以BamHⅠ、XhoⅠ酶切后 ,将酶切的目的片段SBxp亚克隆到原核表达载体中构建了重组表达载体 pGEX 4T 1 SBxp ,并将其转化到BL2 1宿主菌中。提取重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ酶切、PCR鉴定和测序确证后 ,阳性克隆用IPTG诱导表达。收集不同时间的菌液进行SDS PAGE电泳和Westernblotting检测。结果 ,SBxp基因在大肠埃希氏菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 4 3ku的融合蛋白 ,该产物能被牛环形泰勒虫阳性血清所识别。

牛环形泰勒虫病二温式PCR诊断方法的建立及初步应用

为建立特异、敏感、快速的二温式PCR诊断方法,根据牛环形泰勒虫裂殖子表面抗原(tams1)基因,设计了一对特异性引物,扩增出大小为154bp基因片段,经克隆、测序分析,与已知基因序列的相似性为96%。用建立的牛环形泰勒虫病二温式PCR诊断方法,对从新疆牛环形泰勒虫病流行地区采集的50份全血样品进行诊断,阳性率为88%,而血涂片检出的阳性率只有58%。经试验验证,该方法具有特异性高、敏感性强、重复性和稳定性好等优点。表明本试验所建立的二温式PCR诊断方法可用于牛环形泰勒虫病的临床诊断、隐性感染检测和流行病学调查。

牛环形泰勒虫巢式PCR诊断方法的建立

根据GenBank上发表的环形泰勒虫Tamsl基因序列设计2对巢式引物，成功建立了环形泰勒虫病的巢式PCR快速检测方法。验证试验结果表明，PCR扩增产物测序结果与GenBank收录的Tamsl序列同源性在92％～99％，对环形泰勒虫检测具有良好的特异性、重复性以及灵敏度。对新疆焦虫病疫区牛群血样检测发现，巢式PCR检出率为62．2Yoo（61／98），高于常规PCR检出率（58．2％，57／98）和血涂片镜检检出率（35．7％，35／98），提示该巢式PCR方法可用于大规模的环形泰勒虫病的流行病学调查。

新疆牛环形泰勒虫虫病的流行病学调查

【目的】2006～2008年全疆14个地州的牛环形泰勒虫病流行病学调查。【方法】使用已建立的牛环形泰勒虫病间接ELISA检测方法,以纯化的重组蛋白GST-Tams1作为抗原。【结果】(1)牛环形泰勒虫病仍是新疆牛梨形病的主要病原。在2006年采集的278份牛血清样品中,阳性血清31份,感染率为11.15%。2007年,在532份牛血清样品中检出阳性血清61份,感染率为11.47%。在2008年的530份牛血清中检出阳性血清61份,感染率为11.51%。(2)2008年,在地方流行性疫病区牛环形泰勒虫感染率高达24%。【结论】新疆牛环形泰勒虫病的特点是疫区分布广,感染率居高不下,保持在11%以上,对动物和人类构成一定的威胁。这是新疆首次利用血清学方法对全疆牛环形泰勒虫病进行大规模的流行病学调查。

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与表达

采用PCR方法扩增环形泰勒虫Tams1基因,将扩增产物与pUcm-T载体连接,重组质粒经PCR和双酶切鉴定、测序确认后被亚克隆于pGEX-4T-2表达载体中。构建的表达重组质粒经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,克隆的Tams1基因片段长846bp,为一个完整的开放阅读框,编码281个氨基酸,与GenBank中的Tams1基因核苷酸同源性在93.6%～99.8%之间;系统进化树分析表明新疆分离株与印度株、毛利塔尼亚株和北非共和国株进化途径一致,与苏丹株、巴林株进化途径相差较远;推测的蛋白质抗原决定簇预测表明,Tams1基因编码的氨基酸具有13个交叉的抗原决定簇;表达的融合蛋白为56ku,能够被环形泰勒虫多克隆血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为进一步开展牛环形泰勒虫的分子生物学诊断、亚单位疫苗和核酸疫苗的研究奠定了可靠的基础。

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与序列分析

采用PCR技术，从新疆焦虫病疫区感染牛的全血中扩增到Tamsl基因，该基因长度为846bp，编码281个氨基酸。同源性分析表明，该基因与其他9个国际流行虫株的核苷酸同源性为93．6％～99．8％，氨基酸同源性为88．6％～99．6％。系统发育进化树分析表明，新疆分离株同印度株、毛利塔尼亚株、土耳其株、北非共和国株进化途径一致，与苏丹株和巴林株进化途径相差较远。氨基酸抗原决定簇分析发现新疆分离株编码的氨基酸有13个抗原决定簇。