环氧化二十碳三烯甘油酸对肿瘤细胞增殖的影响

背景与目的:环氧化二十碳三烯甘油酸(EETs)由细胞色素P450(CYP)表氧化酶从花生四烯酸合成而来,研究发现,CYP表氧化酶在癌组织中明显高表达,而癌旁正常组织中几乎不表达,并且证实CYP表氧化酶及其代谢产物可能与肿瘤的发生、发展存在密切关系。本研究目的在于研究EETs对肿瘤细胞的促增殖作用及其相关的机制。方法:分别以不同浓度的EETs(8,9-EET、11,12-EET和14,15-EET)作用Tca-8113、A549、Ncl-H446和HepG2肿瘤细胞12、24、48h和72h后,MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测外源性EETs对Tca-8113细胞周期的影响。用选择性抑制剂来阻断细胞增殖的MAPK、PI3K/Akt和PKC细胞信号转导通路,并用Westernblot法检测PI3K/Akt和ERK1/2总蛋白水平和磷酸化水平。结果:与对照组和溶媒组比较,EETs可明显促进肿瘤细胞的生长,并呈明显的浓度依赖性和时间依赖性(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,EETs处理后的肿瘤细胞在S-G2/M期的细胞数增多。11,12-EET处理Tca-8113细胞后S期和G2/M期细胞[(49.7±7.5)%vs.(21.0±5.3)%]较对照组明显增多(17.2±9.7)%vs.(4.9±7.3)%],差异有统计学意义(P<0.01)。用EETs培养后肿瘤细胞的MAPK和Akt磷酸化水平显著增加,而且其抑制剂能够阻断EETs诱导的细胞增殖作用。结论:EETs具有促进肿瘤细胞增殖的作用,MAPK和PI3K/Akt细胞转导通路在此过程中起重要作用。

花生四烯酸及5,6环氧二十碳三烯甘油酸对血管紧张素Ⅱ刺激钠和碳酸氢根重吸收的作用

目的探讨花生四烯酸(AA)及5,6环氧二十碳三烯甘油酸(5,6EET)在肾近曲小管对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激Na+和HCO3-重吸收的作用机制。方法手工分离野生鼠、cPLA2α缺陷鼠的单根肾近曲小管,分光光度法测定在AA或5,6EET作用下,低浓度(10-10mol/L)AngⅡ引起的Na+/HCO3-离子转运活动度变化,微灌注法测定HCO3-重吸收率的变化,Western blotting法测定不同情况下细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化。结果在浓度10-7mol/LAA或10-7mol/L5,6EET作用下,浓度10-10mol/LAngⅡ刺激野生鼠和cPLA2α缺陷鼠在肾近曲小管Na+和HCO3-的重吸收作用被抑制,同时浓度10-10mol/LAngⅡ刺激ERK的磷酸化作用被抑制。结论在肾近曲小管cPLA2α/P450通路代谢产物AA及5,6EET通过抑制ERK磷酸化,阻止低浓度AngⅡ对Na+和HCO3-的重吸收。

过氧化氢和11,12-环氧二十碳三烯酸对内皮依赖性超极化因子介导的脑基底动脉舒张作用的影响

目的:探讨过氧化氢(H2O2)和11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-EET)在内皮依赖性超极化因子(endothelium-dependent hyperpolarizing factor,EDHF)介导的基底动脉舒张中的作用。方法:采用离体血管舒缩功能测定实验,检测乙酰胆碱(ACh)、H2O2、11,12-EET及过氧化氢酶(CAT)等对大鼠离体脑基底动脉血管环的舒张作用。结果:在30 mmol/L的KCl预收缩的大鼠脑基底动脉环上,ACh可产生浓度依赖性的舒张作用;血管用NO合酶抑制剂(L-NAME,3×10-5mol/L)和前列环素(PGI2)合酶抑制剂(In-do,10-5mol/L)预处理后,ACh对基底动脉仍存在部分舒张作用,即非NO和非PGI2介导的舒张。应用L-NAME和Indo后,11,12-EET对大鼠基底动脉无明显的舒张作用,H2O2仅有轻微舒张作用,CAT对ACh介导的非NO和非PGI2反应没有影响。结论:在大鼠基底动脉中ACh介导的EDHF反应即非NO和非PGI2介导的舒张中不涉及H2O2和11,12-EET。

11,12-环二十碳三烯酸对缺血/再灌注大鼠心肌一氧化氮合酶的影响

目的观察11,12-环二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺血/再灌注大鼠心肌一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法采用健康雄性Wistar大鼠制备心肌缺血/再灌注模型,实验分为5组:11,12-EET缺血/再灌注组(包括EET1、EET2、EET3)组,EET对照组,缺血/再灌注组,假手术组,正常对照组。观察缺血60min及再灌注30min两个时段心脏收缩期左心室内压上升的最大变化速率及舒张期左心室内压下降的最大变化速率;采用化学比色法观察大鼠心肌组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及结构型一氧化氮合酶(cNOS)活性。结果缺血/再灌注组缺血60min及再灌注30min两个时段收缩期左心室内压上升的最大变化速率及舒张期左心室内压下降的最大变化速率均低于假手术组(P<0.01);EET1、EET2及EET3组均高于缺血/再灌注组(P<0.01)。缺血/再灌注组心肌cNOS低于假手术组(P<0.01),EET1、EET2及EET3组均高于假手术组(P<0.01)及缺血/再灌注组(P<0.01),EET2组高于EET对照组(P<0.01)。假手术组iNOS高于EET对照组(P<0.05),缺血/再灌注组高于假手术组(P<0.01);EET1、EET2及EET3组均低于缺血/再灌注组(P<0.01)。结论外源性11,12-EET改善缺血/再灌注心功能损伤同时出现cNOS增加及iNOS减少,提示11,12-EET拮抗缺血/再灌注损伤的作用可能与NOS同功酶改变有关。

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物环氧二十碳三烯酸生物学作用

对于花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶作用生成的环氧二十碳三烯酸(EETs),最初在心血管及肾脏系统中被广泛研究,并发现EETs的舒张血管、抑制血小板的聚集、抑制血管平滑肌细胞的炎症反应及平滑肌细胞的迁移、增强纤维蛋白的溶解等作用,为预防及治疗许多心血管疾病如高血压、动脉粥样硬化等提供了新的研究方向。近来研究发现EETs具有促进机体肿瘤细胞的增殖、迁移等作用,其有可能使EET成为肿瘤治疗的新靶点。深入研究EETs的生物学作用及其作用机制,将为临床治疗某些疾病提供新的思路。

缺血后处理对在体大鼠缺血-再灌注心肌细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统的影响

目的观察缺血后处理拮抗心肌缺血-再灌注损伤时内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸(CYP2J3/EET)系统的变化。方法复制在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤及缺血后处理模型。雄性Wistar大鼠(250～300)g随机分为三组:假手术组(Sham)、缺血-再灌注组(I-R)、缺血后处理组(IPo)。动脉插管测定心功能指标,采用TTC染色法测定心肌梗死范围,采用RT-PCR法检测心脏细胞色素P450表氧化酶亚型2J3(CYP2J3)mRNA表达,采用Western blot方法测定心肌组织CYP2J3蛋白水平的变化,高效液相色谱法测定11,12-EET含量。结果与I-R组相比IPo组左室收缩末压(LVESP)、左室内压最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)均显著升高;心肌梗死面积减少20.76%(P<0.01);与Sham组及I-R组相比IPo组CYP2J3 mRNA、CYP2J3蛋白及11,12-EET含量明显升高(P<0.05)。结论IPo可减轻在体心肌I-R损伤同时上调心脏CYP2J3/EET系统;提示CYP2J3/EET系统可能与IPo拮抗心脏I-R损伤作用相关。

14,15-环氧化二十碳三烯酸对糖氧剥夺/复氧诱导的BV2细胞炎症反应的影响

目的观察14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-EET)对糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导的BV2小鼠小胶质细胞炎症反应的影响。方法将BV2细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组及14,15-EET干预组。在14,15-EET的干预作用下,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定BV2细胞OGD1h后复糖复氧0,3,6,12,24 h时细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;并用噻唑蓝(MTT)实验检测其各时间点细胞活性的改变。同样条件下,Transwell细胞迁移实验用来观察BV2细胞的迁移能力变化。结果与溶剂对照组比较,14,15-EET干预组BV2细胞培养液中分泌的炎症因子浓度显著减少;细胞活性明显降低;迁移能力显著减弱。以上结果均以OGD1h/R12h最具统计学意义。结论 14,15-EET对BV2细胞OGD再灌注损伤后的炎症反应具有一定的抑制作用。

11,12-环二十碳三烯酸对心脏缺血/再灌注损伤大鼠血红素氧合酶-1的影响

目的观察11,12-环二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠心肌血红素氧合酶-1(HO-1)的影响,并探讨其作用机制。方法采用健康雄性Wistar大鼠制备心肌缺血/再灌注模型,实验分为3组:1)缺血/再灌注(I/R)组,2)环氧二十碳三烯酸(EET)组及3)左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组。观察缺血60min再灌注30min时心脏收缩期左心室内压上升的最大变化速率及舒张期左心室内压下降的最大变化速率。采用Westernblot法测定心肌HO-1表达水平。采用化学比色法观察大鼠心肌组织NOS及iNOS活性。结果收缩期左心室内压上升的最大变化速率及舒张期左心室内压下降的最大变化速率EET组高于I/R组(P<0.01);L-NAME组低于EET组(P<0.05)。心肌HO-1表达水平EET组高于I/R组(P<0.05),L-NAME组低于EET组(P<0.05)。EET组cNOS活性高于I/R组(P<0.01),L-NAME组cNOS活性低于EET组(P<0.05);EET组iNOS活性低于I/R组(P<0.01),L-NAME组iNOS活性低于EET组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论外源性11,12-EET能改善缺血/再灌注大鼠心功能损伤程度,增加心肌HO-1表达水平和cNOS活性,降低iNOS活性。提示11,12-EET拮抗心肌缺血/再灌注损伤的作用可能与HO-1表达增加有关,且此时HO-1的表达增加至少部分依赖于cNOS的激活。

树脂负载型催化剂催化环十二碳三烯环氧化的反应研究

以过氧化氢(H_2O_2)为氧化剂,以阴离子交换树脂为载体负载的过氧磷钨酸为催化剂,催化环十二碳三烯选择环氧化生成单环氧化物.采用XRD和SEM等手段对催化剂进行了表征.研究结果表明,以阴离子树脂载体负载的磷钨杂多酸为催化剂在催化环十二碳三烯选择环氧化反应中展现出较好的催化活性.在以过氧化氢为氧化剂,阴离子树脂D261负载过氧磷钨酸为催化剂时,60℃反应4 h,环十二碳三烯的转化率为72.6%,单环氧化物的选择性为74.6%.

环十二碳三烯合成环十二酮和其上游产品研究进展

介绍了以环十二碳三烯为原料合成环十二酮和其上游产品的工艺路线,环十二酮上游产品主要包括环氧环十二碳二烯、环十二烯、环十二醇、环十二烷、环氧环十二烷等,涉及环氧化、氢化等反应过程。叙述了近年来围绕环十二酮和其上游产品研究的相关最新进展,针对不同的工艺路线,着重对反应过程中的催化剂和催化体系进行了阐述。基于现有研究情况,认为环十二碳三烯为原料合成环十二酮过程中,合成路线的合理选择和催化体系的不断改进是该工艺技术突破的关键。

匹诺塞林通过可溶性环氧化物水解酶和环氧二十碳三烯酸对脑缺血大鼠发挥保护作用(英文)

目的:探讨匹诺塞林的脑保护作用与环氧二十碳三烯酸(EETs)及其代谢关键酶可溶性环氧化物水解酶(sEH)之间的关系。方法:大鼠进行大脑中动脉闭塞(MCAO)制备永久性局灶性脑缺血,术后10min,4h,8h和23h经尾静脉注射给予匹诺塞林。手术24h后,大鼠重新麻醉,收集血液和脑等样本进行检测。结果:研究表明匹诺塞林对脑缺血大鼠具有明显的保护作用,可以减轻神经功能障碍及降低梗死面积。重要的是,给予EETs的选择性拮抗剂14,15-EEZE(0.2mg·kg–1)可以减弱匹诺塞林的保护作用。手术24h后,匹诺塞林能明显升高脑缺血大鼠血液和脑组织中14,15-EET水平。匹诺塞林能显著降低缺血大鼠脑中sEH活性并能浓度依赖地抑制重组人sEH活性(IC50,2.58μmol·L–1)。此外,免疫印迹和免疫组化结果表明,10和30mg·kg–1匹诺塞林显著下调sEH蛋白在缺血大鼠大脑,尤其是在海马CA1区的表达。结论:抑制sEH而提高EETs水平可能是匹诺塞林发挥脑保护作用的机制之一。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂在心血管领域中的研究进展

在哺乳动物系统中的可溶性环氧化物水解酶属于α/β水解酶类折叠家族的一个成员,它对环氧脂肪酸具有高度的选择性。环氧花生四烯酸或环氧二十碳三烯酸是其特异性底物。环氧二十碳三烯酸是内皮衍生超极化因子的主要组成成分。因此,环氧二十碳三烯酸具有舒张血管及降低血压作用,同时还具有抗炎、促进纤溶、调节血管生长等多种强大生物学效应,其水解酶的抑制剂—可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以通过减少环氧二十碳三烯酸降解、增加环氧二十碳三烯酸水平从而模拟这些作用。因此,可溶性环氧化物水解酶抑制剂作为具有治疗高血压、动脉粥样硬化和炎症性疾病可能性的药物被广泛研究。

14,15-环氧化二十碳三烯酸对缺血性脑损伤神经元凋亡的影响

目的研究14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-epoxyeicosatrienoic acids,14,15-EET)对缺血性大鼠脑损伤神经元凋亡的影响及干预机制。方法运用大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)方法建立大鼠脑缺血模型,实验分为假手术(sham)组、MCAO组、MCAO+sEH shRNA组、MCAO+14,15-EET组;应用氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)处理SY-5Y神经元细胞的方法建立脑缺血的细胞模型,实验分为正常(control)组、OGD组、OGD+sEH siRNA组、OGD+14,15-EET组;TTC法测定大鼠脑梗死面积;采用Longa进行大鼠神经功能评分;Nissl染色法检测大鼠脑组织神经元细胞数量;MTT法检测细胞存活率;TUNEL方法检测细胞凋亡;ELISA方法检测caspase-3的活性。结果与假手术组相比,MCAO大鼠脑梗死面积明显增加、神经功能损伤加重、神经元丢失增多,凋亡蛋白caspase-3活性增加;给予sEH shRNA可明显减少脑梗死面积、神经功能的损伤及神经元的丢失,并可抑制caspase-3的活性;然而,给予外源性的14,15-EET也可显著减少脑梗死面积、神经功能的损伤及神经元的丢失,同时可减少caspase-3的活性;与正常神经元细胞SY-5Y相比,OGD处理组中,细胞存活减少、凋亡增多,caspase-3活性增加;给予sEH siRNA可明显增加细胞存活,减少凋亡及caspase-3的活性;给予外源性的14,15-EET也可显著增加细胞存活,减少细胞凋亡、caspase-3活性。结论 14,15-EET可减少缺血性大鼠脑损伤神经元凋亡、抑制sEH活性,可能成为缺血性脑血管疾病的潜在治疗靶点。

14,15-环氧化二十碳三烯酸对棕榈酸盐诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:观察14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-EET)对棕榈酸盐(Palmitate)诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法:传代培养大鼠心肌细胞H9c2,分为正常组、溶媒组、Palmitate组、Palmitate+14,15-EET组,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡以及Western blot检测Bax,Bcl-2蛋白表达。结果:Palmitate的刺激可显著降低H9c2细胞的存活率并呈剂量依赖效应,14,15-EET呈剂量依赖性增加不同浓度Palmitate刺激后H9c2细胞存活率;Palmitate可诱导H9c2细胞凋亡,14,15-EET的作用显著抑制了Palmitate诱导的H9c2细胞的凋亡,联用胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)及蛋白激酶B(PKB或AKT)信号通路抑制剂显著抑制了14,15-EET的抗凋亡作用。Palmitate的诱导使Bax表达增加,Bcl-2表达减少;14,15-EET可下调Bax,上调Bcl-2的表达,联用ERK1/2及AKT信号通路抑制剂能显著抑制14,15-EET对Palmitate诱导后H9c2细胞Bax表达水平的下调及Bcl-2表达水平上调的作用(P均<0.05)。结论:Plamitate可诱导H9c2细胞凋亡,14,15-EET可通过下调Bax,上调Bcl-2的表达抑制Palmitate诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用。这些作用可由ERK1/2和AKT信号通路介导。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂与心血管疾病

环氧二十碳三烯酸已被证明通过减少缺血再灌注损伤、抗炎、扩张血管等机制发挥心血管保护作用。可溶性环氧化物水解酶是使环氧二十碳三烯酸代谢和失活的主要酶类。因此可溶性环氧化物水解酶抑制剂抑制可溶性环氧化物水解酶,将提高环氧二十碳三烯酸的有益特性,成为治疗心血管疾病的有效措施。

可溶性环氧化物水解酶与心血管疾病

可溶性环氧化合物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是哺乳动物体内广泛存在的一种酶。sEH通过水解环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)发挥作用。近来研究发现sEH与高血压、终末器官损伤、心肌肥厚及缺血/再灌注损伤关系密切,极有可能成为一种预防和治疗心血管疾病的新靶点。

可溶性环氧化物水解酶在疾病中的作用

花生四烯酸经过细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳三烯酸(epoxy eicosatrienoic acid,EETs),具有扩张血管、降低血压、抗炎等多种生物学功能。在哺乳动物系统中的可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,s EH)具有α/β水解酶折叠结构,对环氧脂肪酸具有高度的选择性。s EH能够快速水解EETs,增加患心血管疾病的风险。目前,研究发现s EH抑制剂具有抑制s EH活性、提高EETs的含量的重要功能。在多种疾病动物模型中应用s EH抑制剂或s EH基因敲除,证实s EH在心肌肥厚、糖尿病、高血压和肾病等疾病中发挥重要的生理作用。因此,s EH已被作为疾病治疗的新靶点而进行研究。本文就s EH的分布、作用机制以及s EH与疾病的关系等方面进行了讨论。

可溶性环氧化物水解酶脲类抑制剂的研究进展

可溶性环氧化物水解酶(Soluble epoxide hydrolases,sEH)是一种能代谢环氧脂肪酸的酶,它在哺乳动物中广泛存在,能将内源性环氧二十碳三烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids or EETs)转化为二羟基二十碳三烯酸(Dihydroxy epoxyeicosatrienoic acids or DHETs)。内源性EETs是由花生四烯酸(Arachidonic acid or AA)经细胞色素P450氧化而来,它是生物体内重要的信号分子,具有调节离子转运和基因表达、血管扩张、抗炎等作用。在动物体内,有很多种途径可以降解EETs,其中sEH将EETs代谢为DHETs是最主要的代谢途径,使EETs的浓度降低,生理活性下降,从而使体内的血压升高,并进一步影响肾脏,心脏等功能。研究表明,抑制sEH的活性可治疗多种心血管疾病及炎症。因此开发新型sEH的抑制剂在治疗相关疾病中具有很好的应用价值。主要概述了sEH的抑制剂的作用机理以及抑制剂研究的最新进展,并展望了抑制剂今后的研究方向。

环氧二十碳三烯酸在心血管系统疾病、炎症和损伤中的作用

环氧二十碳三烯酸是通过细胞色素P4．50代谢花生四烯酸生成的，可被可溶性环氧化物水解酶水解为二氢环氧二十碳三烯酸。抑制可溶性环氧化物水解酶可增加生物体内环氧二十碳三烯酸的浓度。环氧二十碳三烯酸具有重要的生物学功能，在心血管系统疾病、炎症及损伤等疾病中发挥着重要的作用。

环氧二十碳三烯酸在脑出血中的作用研究进展

环氧二十碳三烯酸(EETs)主要由细胞内花生四烯酸在细胞色素P450环氧化酶催化下产生,并可由可溶性环氧化物水解酶降解为活性较低的二羟基二十碳四烯酸。近年来研究发现,EETs在神经组织中具有抗炎症反应、抗动脉粥样硬化、抗细胞凋亡和促进血管生成等作用,已成为多种神经系统疾病防治的新靶点。脑出血是一种严重的急性脑血管疾病,继发性脑损伤是其重要损伤机制之一。目前研究证实EETs对脑出血后的脑组织具有保护作用,因此成为了脑出血防治研究的新热点。笔者现围绕EETs在脑出血中的作用及其机制的研究进展展开综述,以期为脑出血治疗中新的研究方向及治疗靶点的探索提供一定参考。