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环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究
被引量:
3
1
作者
孙金钰
郑屹峰
+4 位作者
巫启明
郭建辉
林春通
刘树滔
饶平凡
《福州大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期795-800,共6页
采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应...
采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应的灵敏性高于大肠杆菌表达的cpYFP.这些结果表明,毕赤酵母表达体系可作为制备重组cpYFP的良好体系,也为cpYFP在自由基生物学领域的广泛应用提供充足的原料来源.
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关键词
环状
排列
黄色
荧光
蛋白
大肠杆菌
毕赤酵母
构建
表达
原文传递
Mito-cpYFP cDNA转基因小鼠的建立及其自由基分布规律的初步探讨
2
作者
戴优
郭静科
+4 位作者
陈琦
刘树滔
周建武
柯李晶
饶平凡
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期1648-1652,共5页
目的:利用可实时动态测量超氧阴离子自由基的环状排列黄色荧光蛋白(circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)构建可实时动态监测活体动物体内自由基的转基因动物模型。方法:应用转基因技术将载有可定位于线粒体内的cpYFP...
目的:利用可实时动态测量超氧阴离子自由基的环状排列黄色荧光蛋白(circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)构建可实时动态监测活体动物体内自由基的转基因动物模型。方法:应用转基因技术将载有可定位于线粒体内的cpYFP(mitochondria-targeted cpYFP,mito-cpYFP)的载体pRP(Exp)-CAGG>mitocpYFP注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,采用PCR及RT-PCR的方法鉴定阳性小鼠,通过荧光观察自由基的分布并辅助鉴定阳性小鼠。结果:PCR、RT-PCR及荧光观察结果表明mito-cpYFP cDNA转基因小鼠构建成功。通过与野生型C57BL/6小鼠交配,得到F1、F2和F3代的新生幼鼠共计494只,其中,阳性幼鼠为255只,阳性率为51.6%。转基因阳性鼠体内出现了绿色荧光,其解剖伤口、肠道、脑部及口腔黏膜等荧光明显,而肾脏、肝脏及胸腺等荧光则较弱,耻骨联合部和膀胱出现绿色荧光,但约0.5 h后消失。结论:我们成功制备了可稳定表达并遗传mito-cpYFP的转基因小鼠品系。在活体动物体内,自由基在黏膜层含量较多。此模型可研究自由基在生物体内的含量及分布规律,为后续生物自由基作为信号分子在机体内传导途径的研究提供有效的工具。
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关键词
转基因小鼠
环状
排列
黄色
荧光
蛋白
自由基
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职称材料
基因编码荧光探针的构建与应用
3
作者
崔萌萌
王殿冰
张先恩
《中国科学:化学》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期1699-1711,共13页
基因编码荧光探针能够可视化探测活细胞中多种分析物及其相关分子事件,已成为细胞生物学等生命科学研究的强大分子工具.本文介绍了基因编码荧光探针的类型和主要应用场景,归纳了现有探针的优点和存在的问题,并对其未来发展进行了展望.
关键词
基因编码
荧光
探针
荧光
共振能量转移(FRET)
环状
排列
荧光
蛋白
(
cpfp
)
原文传递
题名
环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究
被引量:
3
1
作者
孙金钰
郑屹峰
巫启明
郭建辉
林春通
刘树滔
饶平凡
机构
福州大学生物工程研究所
出处
《福州大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期795-800,共6页
基金
973计划资助项目(2010CB530605)
国家自然科学基金资助项目(31071497
+1 种基金
31271859)
福建省自然科学基金资助项目(2011J01306)
文摘
采用基因工程方法,实现了cpYFP在毕赤酵母X33的表达,并与大肠杆菌BL21(DE3)表达做对比.结果表明,毕赤酵母胞外分泌的目的蛋白不仅背景较大肠杆菌表达的清晰,且荧光强度为前者的3倍.同时,毕赤酵母表达的重组cpYFP对超氧阴离子自由基反应的灵敏性高于大肠杆菌表达的cpYFP.这些结果表明,毕赤酵母表达体系可作为制备重组cpYFP的良好体系,也为cpYFP在自由基生物学领域的广泛应用提供充足的原料来源.
关键词
环状
排列
黄色
荧光
蛋白
大肠杆菌
毕赤酵母
构建
表达
Keywords
circularly permuted yellow fluorescent protein (cpYFP)
Escherichia coli
Pichia pastoris
construction
expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
Mito-cpYFP cDNA转基因小鼠的建立及其自由基分布规律的初步探讨
2
作者
戴优
郭静科
陈琦
刘树滔
周建武
柯李晶
饶平凡
机构
浙江工商大学中国科学院上海生命科学研究院-浙江工商大学食品营养科学联合研究中心
福州大学生物科学与工程学院
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期1648-1652,共5页
基金
国家重点研发计划资助项目(No.2016YFD0400202)
国家自然科学基金资助项目(No.31500685
+2 种基金
No.31571803)
浙江省自然科学基金资助项目(No.LY16C050002
No.LY16C200001)
文摘
目的:利用可实时动态测量超氧阴离子自由基的环状排列黄色荧光蛋白(circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)构建可实时动态监测活体动物体内自由基的转基因动物模型。方法:应用转基因技术将载有可定位于线粒体内的cpYFP(mitochondria-targeted cpYFP,mito-cpYFP)的载体pRP(Exp)-CAGG>mitocpYFP注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,采用PCR及RT-PCR的方法鉴定阳性小鼠,通过荧光观察自由基的分布并辅助鉴定阳性小鼠。结果:PCR、RT-PCR及荧光观察结果表明mito-cpYFP cDNA转基因小鼠构建成功。通过与野生型C57BL/6小鼠交配,得到F1、F2和F3代的新生幼鼠共计494只,其中,阳性幼鼠为255只,阳性率为51.6%。转基因阳性鼠体内出现了绿色荧光,其解剖伤口、肠道、脑部及口腔黏膜等荧光明显,而肾脏、肝脏及胸腺等荧光则较弱,耻骨联合部和膀胱出现绿色荧光,但约0.5 h后消失。结论:我们成功制备了可稳定表达并遗传mito-cpYFP的转基因小鼠品系。在活体动物体内,自由基在黏膜层含量较多。此模型可研究自由基在生物体内的含量及分布规律,为后续生物自由基作为信号分子在机体内传导途径的研究提供有效的工具。
关键词
转基因小鼠
环状
排列
黄色
荧光
蛋白
自由基
Keywords
Transgenic mice
Circularly permuted yellow fluorescent protein
Free radicals
分类号
R393 [医药卫生—基础医学]
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
基因编码荧光探针的构建与应用
3
作者
崔萌萌
王殿冰
张先恩
机构
中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室
中国科学院深圳理工大学(筹)合成生物学院
出处
《中国科学:化学》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期1699-1711,共13页
基金
国家重点研发计划(编号:2017YFA0205500,2018YFA0902702)
国家自然科学基金重大项目(编号:21890743)
中国科学院战略性先导科技专项(B类)(编号:XDB29050100)资助项目。
文摘
基因编码荧光探针能够可视化探测活细胞中多种分析物及其相关分子事件,已成为细胞生物学等生命科学研究的强大分子工具.本文介绍了基因编码荧光探针的类型和主要应用场景,归纳了现有探针的优点和存在的问题,并对其未来发展进行了展望.
关键词
基因编码
荧光
探针
荧光
共振能量转移(FRET)
环状
排列
荧光
蛋白
(
cpfp
)
Keywords
genetically encoded fluorescent sensing probes
fluorescence resonance energy transfer(FRET)
circularly permuted fluorescent protein(
cpfp
)
分类号
Q811.4 [生物学—生物工程]
O657.3 [理学—分析化学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究
孙金钰
郑屹峰
巫启明
郭建辉
林春通
刘树滔
饶平凡
《福州大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
原文传递
2
Mito-cpYFP cDNA转基因小鼠的建立及其自由基分布规律的初步探讨
戴优
郭静科
陈琦
刘树滔
周建武
柯李晶
饶平凡
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
下载PDF
职称材料
3
基因编码荧光探针的构建与应用
崔萌萌
王殿冰
张先恩
《中国科学:化学》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
原文传递
已选择
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