环状脱氧核糖核酸在脑血管疾病中的初步研究进展

随着高通量测序技术的发展,以往许多被认为是＂垃圾＂的脱氧核糖核酸（RNA）被证实有重要的生物学功能,如长链非编码RNA（即不被翻译成蛋白质的RNA）,微小RNA（microRNA）,小核RNA等。环状RNA是最近几年发现的一种特殊非编码RNA,因其呈封闭环状而得名,其中很大一部分具有一定的保守性与特异性。有研究发现,有一些环状RNA在大脑中呈特异性表达。

六月青皂苷体外对乙型肝炎病毒共价闭合环状脱氧核糖核酸抑制作用的研究

目的:观察六月青皂苷(terpenoids of Liuyueqing,TLYQ)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状脱氧核糖核酸(cccDNA)复制的作用。方法:取HepG 2.2.15细胞,分为正常对照组、阿昔洛韦(ACV)阳性对照组、TLYQ低、中、高剂量组,各组细胞置CO2孵箱(37℃,5%CO2)中培养24 h后,TLYQ低、中、高剂量组加入TLYQ(终浓度分别为21.25,42.5,85 mg·L-1),阳性对照组加ACV(终浓度为1.02 mg·L-1),正常对照组加等体积培养液,以上每个浓度设3瓶,于培养72 h,144 h分别取细胞上清液,用实时荧光定量PCR法检测HBV ccDNA拷贝数。结果:在细胞培养72 h时,TLYQ高剂量组HBV cccDNA拷贝数即明显下降(P<0.05),在144 h高、中剂量组下降显著(P<0.05或P<0.01),低剂量组下降不明显。TLYQ作用呈明显的量效和时效反应关系。结论:TLYQ在体外有明显的抑制乙肝病毒的作用,可能是六月青主要活性成分之一。

共价闭合环状DNA检测方法的研究进展

对共价闭合环状脱氧核糖核酸的检测已成为乙型肝炎患者的临床药物试验研究及病理诊断的重要检验方法。目前,普遍采用三种对共价闭合环状脱氧核糖核酸定量检测的方法:选择性聚合酶链反应法,侵入者探针法和嵌合引物荧光聚合酶链反应法。每种方法均有各自的原理和优缺点,同时对提高检测的特异性,避免假阳性发生等方法学上的内容有共同点。由于目前尚未标准化,临床需根据实际选择合适的方法,使检查在操作,结果和价格上达到最大的优化。

慢性乙型肝炎患者HBV cccDNA的检测

目的建立和优化肝细胞内乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测方法。方法蛋白酶K裂解法释放肝细胞核内HBV cccDNA及基因组DNA,细胞裂解液进行核酸纯化后用酚-氯仿法抽提,并采用酶消化和设计特异性引物两种方法排除其他病毒复制中间体对检测结果的干扰,最后进行聚合酶链式反应(PCR)。结果以HBV松弛环状DNA(rcDNA)、阴性肝细胞、阴性血清作为对照,以包含HBV基因组全序列的质粒作为阳性对照,HBV感染者肝组织的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后出现的条带与目标片段分子量相等,且产物的DNA测序结果显示其序列与目标序列一致。外周血HBeAg(+)患者组肝组织检测结果的阳性率高于HBeAg(-)患者组。结论该方法检测肝细胞内cccDNA具有较高的特异性、敏感性,且成本较低。本方法临床标本初步检测结果显示病毒复制活跃患者肝组织中HBV cccDNA的阳性率较复制低的患者为高。

HBV感染恢复期血清标志物与肝细胞HBV cccDNA检测对照

目的:了解肝组织乙肝病毒共价闭合环状脱氧核糖核酸(HBV cccDNA)与血清HBV复制指标的关系,以探索判定抗HBV的疗程终结点的观察方法。方法:既往HBV感染者、乙型肝炎肝硬化肝癌及慢性乙型肝炎(CHB)患者各13例,将血清HBV DNA、HBV-M及肝组织HBV cccDNA检测结果进行对照。结果:肝硬化肝癌及CHB患者抗-HBe阳性分别为12例和9例,血HBV DNA阳性分别为6例和8例,肝细胞HBV cccDNA均阳性;既往HBV感染13例中,HBsAg阴性,抗-HBs和/或抗HBc阳性各7和6例,有3例肝细胞中HBV cccDNA阳性。抗-HBs阳性的7例肝细胞HBV cccDNA阴性,抗-HBe阳性及抗HBs合并抗-HBe阳性者,肝细胞HBV cccDNA分别为105拷贝/ml和103拷贝/ml,与抗-HBs阳性组对照,t=4.5、4.0(P均<0.01),差异有非常显著性意义。CHB患者核苷类治疗后全应答,肝组织HBV cccDNA仍均为阳性。结论:抗-HBs阳性HBV感染后恢复期血清,肝组织HBV cccDNA阳性比率明显低于CHB抗HBe阳性HBV DNA阴性病例。抗病毒治疗CHB的终点,应是血清抗-HBs阳性的出现。

慢性乙型肝炎患者接受核苷(酸)类似物治疗后发生低病毒血症的危险因素及机制研究

目的研究慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者接受核苷(酸)类似物[nucleos(t)ide analogues,NAs]治疗下发生低病毒血症(low-level viremia,LLV)的危险因素及机制。方法选取2021年5月~2023年3月淄博市第一医院感染科门诊就诊的NAs治疗疗程大于48周且高敏HBV DNA<2000IU/ml的115例CHB患者,根据高敏HBV DNA定量结果分为持续性LLV组(n=34)、间歇性LLV组(n=32)及持续病毒学应答(sustained virologic response,SVR)组(n=49);收集患者NAs治疗前临床特征及实验室指标进行组间比较,采用Logistic回归分析确定LLV发生的危险因素;抽取患者NAs治疗后血清进行肝功能指标、乙型肝炎病毒双链松弛环状DNA(hepatitis B virus doublestrand relaxed circular DNA,HBV rcDNA)及前基因组RNA(pregenomic RNA,pgRNA)检测并进行结果的组间比较,探讨LLV发生的机制。结果持续性LLV组、间歇性LLV组及SVR组乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阳性率分别为70.59%,53.13%和10.20%,乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)(lgIU/ml)结果分别为3.27(3.03,3.61),3.04(2.93,3.26)和2.99(2.20,3.16)。间歇性LLV组和持续性LLV组HBeAg阳性率均高于SVR组(χ^(2)=14.005,27.192,均P<0.001),持续性LLV组HBsAg结果高于SVR组(Z=-3.375,P=0.001),差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析发现,患者治疗前HBeAg阳性(OR:8.660,95%CI:2.865~26.183)是患者发生LLV的独立危险因素。持续性LLV组、间歇性LLV组及SVR组HBV rcDNA的阳性率分别为58.82%,6.25%和0.00%,pgRNA阳性率分别为52.94%,18.75%和4.08%。持续性LLV组HBV rcDNA阳性率高于SVR组和间歇性LLV组(χ^(2)=20.504,37.974,均P<0.001),持续性LLV组pgRNA阳性率高于间歇性LLV组和SVR组(χ^(2)=8.328,26.199;P=0.005,<0.001),差异均有统计学意义。结论CHB患者NAs治疗前HBeAg阳性是发生LLV的独立危险因素;NAs治疗后部分LLV患者HBV pgRNA阳性且定量水平高,HBV rcDNA维持在较高的合成水平,NAs无法完成抑制rcDNA的合成,从而导致LLV的发生。

儿童乙型肝炎血清HBV cccDNA及病毒基因型研究

目的了解甘肃省儿童血清乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）及病毒基因型情况。方法随机选择HBV-DNA阳性124例乙肝患JL（男性84例，女性40例），其中HBV携带者65例、慢性乙肝59例（轻度31例、中度18例、重度10例），对以上患儿进行基因分型、肝功、HBV-DNA载量和血清HBVcccDNA检测。结果中、重度慢性乙肝患儿HBVcccDNA阳性率高于携带者和轻度组（F=25．429，P〈0．01）；HBeAg阳性患儿HBVcccDNA检出率高于HBeAg阴性患儿（F=28．386，P〈0．01）；HBVcccDNA阳性组的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素均高于阴性组（t值分别为13．241、11．347、15．013，均P〈0．01）；124例肝炎患儿中，以C、B基因型为主，C基因型为优势，B／C混合型占一定比例，还有一些其他基因型；C基因型患儿中HBVcccDNA阳性的比例高于B基因型患儿（F=23．216，P〈0．01）；而B基因型患儿中HBVcccDNA阴性的比例高于C基因型患儿（F=26．364，P〈0．01）。结论病情越重外周血HBVcccDNA检出率越高，HBVcccDNA和基因型的检测可以较好地反映HBV复制程度和临床严重程度，对诊治乙肝具有一定的指导意义。

慢性乙肝患者血清学标志物与肝细胞HBV cccDNA的研究

目的探讨肝细胞乙肝病毒共价闭合环状脱氧核糖核酸(HBV cccDNA)与血清HBV复制指标的关系和临床意义,为临床判断抗HBV疗程终点提供参考。方法选取郑州大学第一附属医院收治的HBsAg/HBeAg/抗-HBc阳性患者64例、HBsAg/抗-HBe/抗-HBc阳性患者68例和既往HBV感染自然恢复者40例,将血清HBV DNA、HBVM及肝细胞HBV cccDNA检测结果进行对照分析。结果 HBsAg/HBeAg/抗-HBc阳性患者和HBsAg/抗-HBe/抗-HBc阳性患者中HBV DNA阳性者分别为64例(100%)和22例(32.4%),肝细胞HBV cccDNA全部阳性;既往HBV感染自然恢复的40例患者中,HBsAg阴性,抗-HBs阳性的20例中肝细胞HBV cccDNA全部阴性,抗-HBs阴性的20例中有6例肝细胞HBV cccDNA阳性(103拷贝/ml)。同时,对132例HBsAg阳性患者的HBsAg定量结果与其肝细胞HBV cccDNA检测结果分析发现血清HBsAg变化与肝细胞HBV cccDNA正相关。结论抗-HBs阳性HBV感染后恢复期血清,肝组织HBV cccDNA趋于完全清除,抗病毒治疗CHB的终点,应是血清抗-HBs阳性的出现。

关于隐匿性乙型肝炎病毒感染的共识意见解读

2018年10月欧洲肝脏研究协会组织专家在意大利陶尔米纳举行了一个专门针对隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)的研讨会,回顾现有的关于OBI的知识,确定需要进一步研究的问题,并突出现有的争议和新出现的观点,对2008年的共识意见进行了更新。

2019年本刊一些常用词汇可直接用缩写

2019年本刊对一些大家都比较熟悉的常用词汇将允许直接用缩写,即第1次出现时,可以不标注中文,它们是:ALT(丙氨酸转氨酶)AST(天冬氨酸转氨酶)cccDNA(共价闭合环状脱氧核糖核酸)CDC(疾病预防控制中心).

2021年本刊一些常用词汇可直接用缩写

2021年本刊对一些大家都比较熟悉的常用词汇将允许直接用缩写,即第1次出现时,可以不标注中文,它们是:AFP(甲胎蛋白)AIDS(艾滋病)ALT(丙氨酸转氨酶)APTT(活化部分凝血活酶时间)AST(天冬氨酸转氨酶)cccDNA(共价闭合环状脱氧核糖核酸).