环状RNA-VANGL1对胃癌细胞增殖和凋亡的作用及机制研究

目的探讨环状RNA-VANGL1(circ_VANGL1)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其中的分子机制。方法采用qRT-PCR检测circ_VANGL1在胃癌组织和细胞中的表达水平,并分析circ_VANGL1与患者临床病理因素如年龄、性别、肿瘤体积、病理分型、分期、淋巴结转移之间的相关性。构建携带circ_VANGL1全长序列的慢病毒(Lenti-circ_VANGL1)和携带circ_VANGL1 shRNA的慢病毒(Lenti-circ_VANGL1-shRNA)分别转染胃癌细胞株(NCI-N87和HGC-27)。CCK-8实验检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞的增殖变化。AnnexinⅤ/PI实验检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞凋亡的变化。JC-1法检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞线粒体势能变化。Western印迹法检测Fas、FADD、bax、bcl-2、细胞色素C以及Caspase-3活性片段的蛋白表达变化。结果circ_VANGL1在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤体积、分期和淋巴结转移显著正相关。Lenti-circ_VANGL1可以上调NCI-N87和HGC-27细胞内circ_VANGL1表达并促进细胞增殖;Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以下调circ_VANGL1表达并诱导细胞凋亡。Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以导致细胞线粒体膜势能降低。Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以促进Fas细胞表面死亡受体(Fas cell surface death receptor,Fas)、Fas相关蛋白死亡结构域(Fas associated via death domain,FADD)、bax(BCL2 associated X)、胞质细胞色素C(cytoplasmic cytochrome C)以及Caspase-3活性片段表达增高,降低bcl-2和线粒体细胞色素C蛋白表达。miRDB软件显示circ_VANGL1存在12个潜在的靶miRNAs,其中miR-605-3p、miR-377-5p、miR-4468以及miR-5008-5p等4个miRNAs的表达在circ_VANGL1表达下调后显著增高。结论circ_VANGL1在胃癌中表达异常增高,参与调控胃癌细胞的增值和凋亡,在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

核受体NURR1在前列腺癌细胞中的表达及其对环状RNA表达谱的影响

目的探讨核受体NURR1过表达对前列腺癌(PCa)细胞中环状RNA(circRNA)表达谱的影响,为揭示NURR1相关circRNA分子在PCa进展过程中的作用提供参考。方法通过UALCAN和TNMplot分析NURR1在PCa中的表达;通过高通量测序分析筛选NURR1过表达的PCa细胞中特征性circRNA分子表达谱;通过GO和KEGG分析差异表达的circRNA分子的功能和参与的信号通路。结果circ_0000915在DU145、LNCaP以及PC3细胞中均发生显著的下调表达。在核受体NURR1上调表达的DU145细胞中,1个circRNA上调表达(circ_0005991),2个circRNA下调表达(circ_0001460、circ_0001315);在核受体NURR1上调表达的LNCaP细胞中有2个circRNA显著上调表达(circ_0040729、circ_0000722);在NURR1上调表达的PC3细胞中有3个circRNA上调表达(circ_0001577、circ_0000854、circ_0018168),4个circRNA下调表达(circ_013035、circ_0003028、circ_0082096、circ_0005320)。KEGG分析发现差异表达的circRNA分子与背侧/腹侧神经管模式、蛋白质折叠伴侣、无序结构域特异性结合、BMP信号通路的正调控以及神经管模式化功能显著相关。结论circRNA在NURR1介导的PCa进展过程中发挥着重要作用,但是在不同的PCa细胞类型中存在着一定的差异。核受体NURR1与circ_0000915分子在PCa进展中的分子机制有待进一步研究。

急性脑梗死病人血清中环状RNA Carm1的表达情况及与脑损伤严重程度的关系

目的:探究急性脑梗死(ACI)病人血清中环状RNA共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(circCarm1)的表达情况及与脑损伤严重程度的关系。方法:选取我院2021年1月-2022年1月收治的115例ACI病人为研究对象,即ACI组,选取同期的健康体检者100名为对照组。ACI病人根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组(39例)、中度组(40例)、重度组(36例);根据梗死灶体积分为小梗死亚组(38例)、中梗死亚组(41例)、大梗死亚组(36例)。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测血清中circCarm1 RNA表达水平;Pearson或Spearman法分析circCarm1 RNA表达水平与NIHSS评分、梗死范围的相关性。结果:ACI组circCarm1 RNA表达水平高于对照组(P<0.05);重度组circCarm1 RNA表达水平、NIHSS评分高于中度组及轻度组,中度组高于轻度组(P<0.05);circCarm1 RNA的表达水平与NIHSS评分呈正相关(P<0.05);ACI病人大梗死亚组circCarm1 RNA表达水平高于中梗死亚组和小梗死亚组,中梗死亚组高于小梗死亚组(P<0.05);ACI病人circCarm1 RNA表达与梗死范围呈正相关(r=0.325,P<0.05)。结论:ACI病人血清circCarm1 RNA表达水平异常增加,其水平与脑损伤严重程度有关。

乳腺癌组织中环状RNA CDR1as的表达及临床意义

目的探讨环状RNA CDR1as在乳腺癌组织中的表达以及CDR1as在乳腺癌细胞中的调控作用,为乳腺癌治疗提供新靶点。方法选取江苏大学附属武进医院2022年6月至2023年6月收治的45例三阴性乳腺癌患者,采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测乳腺癌组织及其癌旁正常乳腺组织中CDR1as表达情况。购入人正常乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞,采用RT-qPCR检测CDR1as在乳腺正常细胞与癌细胞中的表达情况。通过体外实验验证CDR1as的环状特性,将特异性针对CDR1as的siRNA及过表达载体转入MDA-MB-231细胞,Ad-CDR1as为高表达组,shCDR1s为低表达组,Ad-CON/Si-NC为阴性对照组。并采用蛋白质印迹分析(Western-blot)法检测细胞PCNA蛋白表达水平,MTT法、CCK-8法检测细胞增殖能力的改变,Transwell实验、划痕实验检测乳腺癌细胞迁移、侵袭能力。结果CDR1as在三阴性乳腺癌患者中的表达在不同肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级及临床分期上差异有统计学意义。乳腺癌患者癌组织中CDR1as的表达高于癌旁正常组织。乳腺癌细胞系MDA-MB-231中CDR1as表达量高于MCF-10A细胞。敲低/过表达CDR1as后,CDR1as沉默后乳腺癌细胞的细胞增殖量明显减少,而CDR1as过表达促进细胞增殖,差异有统计学意义。Western-blot结果显示Ad-CDR1as组PCNA表达高于Ad-CON组,Transwell结果显示Ad-CDR1as组细胞侵袭量大于Ad-CON组,而沉默CDR1as后细胞侵袭量显著降低;划痕试验显示,Ad-CDR1as组细胞迁移能力高于Ad-CON组,而沉默CDR1as后细胞迁移能力显著减弱,差异均有统计学意义。结论CDR1as在三阴性乳腺癌患者癌组织中高表达,且与临床病理特征相关。CDR1as在三阴性乳腺癌细胞中高表达,并促进三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,CDR1as可能是治疗三阴性乳腺癌的潜在靶点。

环状人网状蛋白4调节miR-582-5p/神经纤毛蛋白1轴对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状人网状蛋白4(CircRTN4)调节miR-582-5p/神经纤毛蛋白1(NRP1)轴对结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响。方法选取2019年1月至2023年1月河南科技大学第一附属医院收治的CRC患者50例,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹法分别检测患者的癌组织、癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞和CRC细胞中CircRTN4、miR-582-5p mRNA及NRP1的蛋白表达;将SW480细胞分别转染si-RTN4、miR-582-5p inhibitor及相应对照,qRT-PCR检测转染效率;通过平板克隆实验、Transwell小室和流式细胞仪等研究CircRTN4对CRC细胞的影响;蛋白质免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及NRP1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-582-5p与RTN4和NRP1的作用;构建肺癌裸鼠模型,分析敲低RTN4对肿瘤质量、体积及移植瘤中miR-582-5p、NRP1、Ki-67蛋白表达的影响。结果在CRC组织和细胞系中,RTN4、NRP1表达升高,miR-582-5p表达降低(P<0.05);敲低RTN4,降低SW480细胞迁移、增殖与侵袭,下调PCNA、Bcl-2、MMP-2、NRP1表达,促进miR-582-5p、Bax表达及细胞凋亡(P<0.05);miR-582-5p作为RTN4靶点,下调miR-582-5p可减弱RTN4敲低对SW480细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);体内实验显示,抑制RTN4可降低移植瘤质量和体积,降低Ki-67、NRP1表达水平,升高miR-582-5p表达(P<0.05)。结论在CRC组织和细胞系中,CircRTN4高表达,敲低CircRTN4可能通过调节miR-582-5p/NRP1轴抑制CRC细胞的恶性行为。

急性心肌梗死中环状RNA CDR1as位点筛选的研究

目的 探讨PubMed筛选文献、千人基金组计划(1 000 genomes project)、Haploview软件联合应用于筛选与心肌梗死相关的单核苷酸多态性的文献的可行性。方法 使用PubMed网站检索并确定心血管疾病相关基因,1 000 genomes project网站检索中国汉族人群CDR1as基因的单核苷酸多态性(SNP)数据。应用Haploview软件以最小等位基因频率(MAF)>0.05、r2> 0.8作为筛选标签SNPs指标。结果 CDR1as基因41个SNPs位点筛选出3个检测位点,分别为rs12688274、rs5907638、rs76284232。结论 通过PubMed、千人基因组计划和Haploview联合使用可实现标签SNPs筛选,值得进一步探究。

晚期非小细胞肺癌患者血清环状RNA VMP1、PIP5K1A水平与含铂双药化疗效果及预后的关系

目的观察晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清环状RNA VMP1、PIP5K1A水平变化,探讨其与化疗效果及预后的关系探讨血清VMP1、PIP5K1A与晚期非小细胞肺癌化疗效果及预后的关系。方法选择晚期NSCLC患者118例作为NSCLC组,另选择同期健康体检者60例作为对照组。采集两组空腹静脉血,实时荧光定量PCR法检测血清VMP1、PIP5K1A。于化疗前及化疗后行胸部CT检查评估化疗效果,随访1年记录患者生存情况。比较不同临床特征的晚期NSCLC患者血清VMP1、PIP5K1A水平。根据患者血清VMP1、PIP5K1A水平的平均值将NSCLC患者分为VMP1高水平者及低水平者、PIP5K1A高水平及低水平者,绘制Kaplan-Meier生存曲线并比较VMP1、PIP5K1A高低水平者的1年生存率。采用多因素Cox比例风险模型分析晚期NSCLC患者血清VMP1、PIP5K1A水平对预后的影响。结果NSCLC组血清VMP1、PIP5K1A水平均高于对照组(P均<0.01)。TNM分期为Ⅳ期、低分化的晚期NSCLC患者血清VMP1、PIP5K1A水平分别高于TNM分期为Ⅲb期、高中分化者(P均<0.05)。118例晚期NSCLC患者中化疗有效者41例、无效者77例,化疗有效者血清VMP1、PIP5K1A水平均低于化疗无效者(P均<0.01)。NSCLC患者随访1年共生存50例,1年生存率为39.83%。根据晚期NSCLC患者血清VMP1、PIP5K1A水平的平均值将患者分为VMP1高水平者58例、低水平者60例,PIP5K1A高水平者57例、低水平者61例。VMP1、PIP5K1A高水平者1年生存率分别低于VMP1、PIP5K1A低水平者(P均<0.01)。多因素Cox比例风险模型分析结果显示,肿瘤TNM分期Ⅳ期、低分化程度、VMP1高水平、PIP5K1A高水平是晚期NSCLC患者预后不良的独立危险因素(P均<0.05)。结论晚期NSCLC患者血清VMP1、PIP5K1A水平升高,两者与患者化疗效果及预后有关,可对评估晚期NSCLC患者化疗疗效及生存预后有一定价值。

重症肺炎患儿外周血环状RNA circFADS2、circESPL1表达的变化及临床意义

目的研究重症肺炎(SP)患儿外周血环状RNA circFADS2、circESPL1表达的变化及临床意义。方法选择2020年1月至2023年1月期间霍邱县第一人民医院收治的120例SP患儿(SP组)和同期80名健康儿童(对照组)进行研究。检测外周血circFADS2、circESPL1的表达水平。根据肺炎严重程度指数(PSI)将SP患儿分为高危组(PSIⅤ级)、中危组(PSIⅣ级)、低危组(PSIⅠ~Ⅲ级),根据半年预后的随访分为预后良好组和预后不良组。采用logistic回归模型分析SP患儿预后的影响因素,采用ROC曲线分析circFADS2、circESPL1对预后的预测价值。结果SP组外周血circFADS2、circESPL1的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=10.109、5.181,P<0.05);不同病情严重程度SP患儿外周血circFADS2、circESPL1的表达水平呈现:低危组<中危组<高危组,差异均有统计学意义(F=15.831、11.945,P<0.05);预后不良组SP患儿外周血circFADS2、circESPL1的表达水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(t=6.073、3.621,P<0.05);logistic回归分析显示:合并心力衰竭以及外周血circFADS2、circESPL1的表达水平增加是SP患儿预后不良的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示:外周血circFADS2、circESPL联合检测预测SP患儿预后的灵敏度和特异度分别为84.62%和71.43%,高于单一检测(P<0.05)。结论SP患儿外周血中circFADS2、circESPL1表达增加,两者联合检测对SP预后具有预测价值。

环状RNA-circEPSTI1在子宫颈癌生长与侵袭中的作用及机制

目的探讨环状RNA-circEPSTI1在子宫颈癌生长与侵袭中的作用及其机制。方法采用qRT-PCR技术检测子宫颈癌细胞系及组织、正常子宫颈上皮细胞及正常子宫颈组织中circEPSTI1的表达,分析circEPSTI1的表达与子宫颈癌临床病理特征的关系;转染si-circEPSTI1干扰SiHa与HeLa细胞中circEPSTI1的表达,采用qRT-PCR技术验证转染效率。采用CCK-8、Transwell侵袭和裸鼠成瘤实验检测circEPSTI1对子宫颈癌细胞生长与侵袭的影响。采用Western blot法检测circEPSTI1对EPSTI1、Twist、Slug蛋白表达的影响。结果circEPSTI1在子宫颈癌细胞系中的表达水平明显高于正常子宫颈上皮细胞(P<0.01);circEPSTI1在子宫颈癌组织中的表达水平明显高于正常子宫颈组织(P<0.01);circEPSTI1表达与子宫颈癌的高级别FIGO分期、组织学分级以及淋巴结转移密切相关;qRT-PCR结果显示,SiHa与HeLa细胞中circEPSTI1被成功干扰。CCK-8实验显示,si-circEPSTI1组的SiHa与HeLa细胞的OD值均明显低于si-NC组(P<0.01)。在裸鼠成瘤实验中,si-circEPSTI1组的肿瘤质量明显低于si-NC组(P<0.05)。Transwell实验结果显示,si-circEPSTI1组的SiHa与HeLa细胞穿过基质胶的细胞数量均明显低于si-NC组(P<0.01)。Western blot法结果显示,si-circEPSTI1组的EPSTI1、Twist、Slug蛋白表达水平明显低于si-NC组(P<0.05)。结论circEPSTI1在子宫颈癌中表达增高并与子宫颈癌的高级别FIGO分期、组织学分级以及淋巴结转移密切相关,抑制circEPSTI1能够抑制子宫颈癌细胞的生长和侵袭,其机制可能与调控EPSTI1、Twist、Slug信号通路有关。

过表达环状RNA孤儿核受体4A1(circNR4A1/Hsa-circ-0026352)抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖并促进其凋亡

目的环状RNA Hsa-circ-0026352(circNR4A1)在乳腺癌患者组织、外周血、细胞系中的相对表达及其对细胞增殖、凋亡的影响。方法通过人circRNA芯片筛选在乳腺癌组织及癌旁组织中差异表达的circRNA,通过实时定量PCR验证circNR4A1在15对乳腺癌组织及癌旁正常组织、40例患者及40例健康人群外周血以及MCF-7、HCC-1937、MDA-MB-231、T-47D人乳腺癌细胞及MCF-10A人乳腺上皮细胞的表达。使用circPrimer 1.2软件绘制circRNA结构图,使用环状RNA交互作用组(Circular RNA interactome)数据库预测circRNA结合的miRNA和RNA-蛋白结合位点,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行circRNA生物学功能预测。构建circNR4A1过表达载体并转染MCF-7细胞,采用CCK-8法和克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖、Hoechst33258染色结合流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期,实时定量PCR检测癌细胞丝裂原激活蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶(MEK/ERK)信号通路因子K-RAS、MEK、ERK,凋亡相关基因B细胞白血病/淋巴瘤因子2(Bcl2)、B细胞白血病/淋巴瘤因子2关联凋亡因子X(BAX)、B细胞白血病/淋巴瘤因子2细胞死亡激活子(BAD)、胱天蛋白酶3(caspase-3)等mRNA水平,Western blot法检测MEK、ERK、Bcl2、BAD、caspase-3蛋白水平。结果circNR4A1(Hsa-circ-0026352)在乳腺癌组织、外周血、乳腺癌细胞系中表达显著低于癌旁组织、健康人群外周血、人乳腺上皮细胞。在MCF-7细胞中过表达circNR4A1能够抑制癌细胞增殖,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于G1/S期,并抑制MEK、ERK、Bcl2蛋白表达,促进BAD、caspase-3蛋白表达。结论circNR4A1/Hsa-circ-0026352在乳腺癌细胞中低表达,过表达circNR4A1能够显著抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡。

改良PPH治疗结缔组织型环状混合痔疗效及对血清HIF-1a VEGF和MMP-9水平的影响

目的:探讨改良吻合器痔上黏膜环切钉合术(PPH)治疗结缔组织型环状混合痔疗效及对血清缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP-9)水平的影响。方法:回顾性分析2018年9月至2019年6月本院收治的80例结缔组织型环状混合痔患者的临床资料,根据治疗方法不同分为对照组(n=40)和观察组(n=40),对照组给予传统外剥内扎术治疗,观察组给予改良PPH治疗,比较两组围术期指标、临床疗效、疼痛程度(VAS)评分、血清HIF-1a、VEGF和MMP-9水平、并发症发生率及肛门功能评分。结果:观察组手术时间、住院时间及创面愈合时间均短于对照组,术中出血量少于对照组(P<0.05);观察组总有效率高于对照组(95.00%VS 77.50%)(P<0.05);治疗后观察组VAS评分低于对照组(P<0.05);治疗后观察组血清HIF-1a、VEGF、MMP-9水平均低于对照组(P<0.05);观察组并发症发生率低于对照组(7.50%VS 30.00%)(P<0.05);观察组肛门功能评分低于对照组(P<0.05)。结论:改良PPH治疗结缔组织型环状混合痔疗效显著,可缓解疼痛程度,降低血清HIF-1a、VEGF和MMP-9水平,提高肛门功能,且安全性较高,值得临床推广应用。

环状RNA 42398调控转化生长因子-β1/Smad信号通路在大鼠胆道闭锁肝纤维化中的作用机制

目的探讨环状RNA(circRNA)42398调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路在大鼠胆道闭锁肝纤维化中的作用机制。方法取大鼠肝星状细胞株HSC-T6构建慢病毒稳定感染的细胞系,根据转染RNA的不同将细胞分为阴性对照组、circRNA过表达组和circRNA敲低组。阴性对照组细胞转染阴性对照序列,circRNA过表达组细胞转染circRNA过表达序列,circRNA敲低组细胞转染circRNA低表达序列。应用细胞计数试剂盒-8检测各组细胞活性,采用实量定量聚合酶链式反应检测各组细胞中TGF-β1、Smad2和Smad3 mRNA的表达,采用Western blot法检测各组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白的表达。结果各组细胞活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。circRNA过表达组与阴性对照组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。circRNA敲低组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于阴性对照组(P<0.05)。结论在大鼠细胞水平,circRNA 42398可通过调控TGF-β1/Smad信号通路而抑制肝星状细胞活化,从而抑制胆道闭锁肝纤维化,这为胆道闭锁肝纤维化的治疗和预防提供了依据。

环状RNA0005654与特异性蛋白1在甲状腺癌患者中表达水平及临床意义的研究

目的 探究环状RNA0005654(Circ0005654)、特异性蛋白1(SP1)在甲状腺癌患者中的表达情况及临床意义。方法 选择2017年1月—2019年7月在皖西卫生职业学院附属医院及安徽医科大学附属六安医院行根治性手术的甲状腺癌患者76例作为研究对象,术中取甲状腺癌组织及配对癌旁组织,收集患者临床病理资料。甲状腺癌组织与癌旁组织中SP1蛋白表达情况采用免疫组织化学法(IHC)及Western Blot(WB)检测;Circ0005654表达水平利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法进行检测。通过比较癌组织及癌旁组织中Circ0005654、SP1表达的差异性,分析其与甲状腺癌患者临床病理特征之间的关系。统计患者术后3年生存率,分析Circ0005654、SP1水平对患者预后的影响。结果 WB检测显示癌旁组织中SP1表达水平低于癌组织,差异有统计学意义(t=2.795,P=0.019);IHC结果显示,SP1在癌旁组织中的表达阳性率低于癌组织(χ~2=159.61,P<0.001);qRT-PCR检测显示Circ0005654在甲状腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织[(2.13±0.59)vs(0.67±0.56)],两组比较,差异具有显著统计学意义(t=15.608,P<0.0001)。Circ0005654、SP1表达水平与TC患者肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期和包膜侵犯相关(P均<0.05)。根据甲状腺癌组织中Circ0005654表达水平的不同,高表达组3年生存率为77.5%,低于低表达组的94.4%,差异有统计学意义(χ~2=4.395,P=0.036);SP1高表达组和低表达组患者3年生存率分别为78.6%和100%,两组比较,差异有统计学意义(χ~2=4.973,P=0.049)。结论 Circ0005654与SP1在甲状腺癌组织中均存在高表达,与患者肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期和包膜侵犯相关,Circ0005654及SP1水平越高,生存率越低,可能具有促进甲状腺癌进展作用。

分段齿形内扎外切加2∶1消痔灵注射术治疗环状混合痔嵌顿的体会

分段齿形内扎外切加2∶1消痔灵注射是治疗环状混合痔的特色方法,具有保护肛门肛管功能、减少术后并发症的优点,自2007年—2008年以来,我们临床治疗50例环状混合痔嵌顿患者,疗效满意。

环状RNA分子circRNA_103736和circRNA_103737在皮肤鳞癌中的表达及意义

目的探讨环状RNA分子circRNA103736和circRNA103737在皮肤鳞癌中的表达及作用。方法利用CIRC pedia数据库筛选出与皮肤鳞癌相关的环状RNA分子circRNA103736和circRNA103737及其对应基因La蛋白相关家族1(LARP1),选择2017年1月至2019年1月在北京大学深圳医院确诊为皮肤鳞癌患者及自身正常皮肤组织30例。应用荧光定量PCR分别检测两种环状RNA分子及对应基因LARP1在其皮肤鳞癌患者和自身对照组的表达水平,并对其进行生物信息学分析。结果荧光定量PCR分析结果显示,与自身正常对照组相比,皮肤鳞癌患者组织中LARP1的mRNA及其所对应的环状RNA(circRNA103736和circRNA103737)均有明显程度的增加,且差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学结果提示,能与circRNA103736和circRNA103737相结合的miRNA包括hsa-miR-876-5p等。结论皮肤鳞癌患者的circRNA103736和circRNA103737及其对应基因LARP1的表达上调,两种环状RNA分子可能通过竞争性结合hsa-miR-876-5p来参与皮肤鳞癌的发生。

伴环状铁粒幼红细胞增多的骨髓增生异常综合征中IL-1β/Caspase-1介导的细胞焦亡的作用

目的探讨白细胞介素-1β/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(interleukin-1β,IL-1β)/(cysteinyl aspartate specific protease-1,Caspase-1)介导的细胞焦亡在伴环状铁粒幼红细胞增多的骨髓增生异常综合征中(MDS-RS)的机制。方法选取2020年1月至2021年7月我院收治的MDS-RS患者30例,为MDS-RS组;同时选取查体中心健康查体者30例作为对照组。比较两组caspase-1、IL-1β、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、γ干扰素(IFN-γ)。MDS-RS按预后积分系统分为较低危组(n=18)和较高危组(n=12),较低危组给予免疫抑制剂治疗或去甲基化药物治疗,比较患者治疗前、治疗后3个月、治疗后6个月caspase-1、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-a、IFN-γ水平。结果MDS-RS组Caspase-1、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-a、IFN-γ水平高于对照组,IL-4水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。MDS-RS组治疗前后Caspase-1、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-a、IFN-γ水平差异有统计学意义(P<0.05),随着治疗时间延长,患者Caspase-1、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-a、IFN-γ水平逐渐降低,IL-4水平水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Caspase-1和IL-1β在MDS-RS患者血清中高表达,IL-1β/Caspase-1介导的细胞焦亡可能参与了MDS-RS的发生发展,可作为临床评价其预后的重要指标。

天然产物中环状二芳基庚烷类化合物1-(4'-羟基苯基)-7-(3″-甲氧基苯基)-3',4″-环氧-3-庚醇的全合成研究

以简便高效的方法,对从青龙衣抗肿瘤活性部位分离得到的环状二芳基庚烷类化合物1-(4'-羟基苯基)-7-(3″-甲氧基苯基)-3',4″-环氧-3-庚醇进行了首次全合成。产物结构经IR、~1H-NMR、^(13)C-NMR和MS进行了确证。

环状RNA-42398通过调控TGF-β1/Smads信号通路抑制肝星状细胞活化

目的:探讨小鼠环状RNA-42398(mmucirc42398)对肝星状细胞活化的影响及机制是否与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。方法:小鼠肝星状细胞株JS1,分成正常对照组、空载体阴性对照组(vector组)和mmucirc42398过表达组(mmucirc42398组),体外构建mmucirc42398过表达载体,通过脂质体瞬时转染法转入JS1细胞,48 h后RT-qPCR检测mmucirc42398的表达变化,PCR产物经一代测序验证其环化位点,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达。结果:与vector组相比,mmucirc42398组的mmucirc42398表达增加(P<0.01),PCR产物测序验证了其环化位点,提示mmucirc42398过表达质粒成功转入JS1细胞并高效表达;在JS1细胞中过表达mmucirc42398后,α-SMA和Col I蛋白表达显著降低(P<0.01),TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达无显著变化(P>0.05),但p-Smad2和p-Smad3蛋白水平显著降低(P<0.01)。结论:mmucirc42398能抑制肝星状细胞的活化,其机制与调控TGF-β1/smads信号通路有关。