环状RNA ACAP2调节微小RNA-421与B细胞易位基因2轴对心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨环状RNA ACAP2(circACAP2)调节微小RNA(miR)-421/B细胞易位基因2(BTG2)轴对心肌梗死(MI)大鼠心肌损伤的影响。方法构建MI大鼠模型和H9c2细胞模型,将80只大鼠分为假手术组、MI组、小干扰RNA-阴性对照(si-NC)组、si-circACAP2组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-circACAP2组、pcDNA3.1-circACAP2+模拟物(mimic)NC组、pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,每组各10只。将缺氧H9c2细胞置于24孔板中,瞬时转染细胞,分为缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+mimic NC组、缺氧+pcDNA3.1-circACAP2+miR-421 mimic组,另取正常培养的H9c2细胞作为对照组。检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌梗死情况、心肌组织病理变化、circACAP2、miR-421、BTG2 mRNA表达情况、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、H9c2细胞活力和凋亡、心肌组织BTG2蛋白表达、H9c2细胞BTG2蛋白表达。结果MI组circACAP2、BTG2 mRNA表达高于假手术组(1.84±0.21 vs 1.00±0.10,1.68±0.17 vs 1.00±0.10),miR-421表达低于假手术组(0.49±0.05 vs 1.00±0.11,P<0.05);与假手术组比较,MI组梗死面积、CK-MB、LDH活性升高,LVFS、LVEF降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circACAP2组心肌损伤减轻,LVFS、LVEF升高,梗死面积、CK-MB、LDH活性降低(P<0.05);与缺氧+si-NC组比较,缺氧+si-circACAP2组细胞活力升高,凋亡率、CK-MB和LDH活性降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-circACAP2组心肌损伤加重,LVFS、LVEF降低,梗死面积、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05);与缺氧+pcDNA3.1组比较,缺氧+pcDNA3.1-circACAP2组细胞活力降低,凋亡率、CK-MB、LDH活性升高(P<0.05)。结论circACAP2在MI大鼠和H9c2细胞中表达上调,沉默circACAP2可能通过调节miR-421/BTG2轴改善心脏功能,减少心肌损伤,提高心肌细胞活力。

脑胶质瘤组织中环状RNAcircSMAD2的水平及临床意义

目的探讨脑胶质瘤患者组织中环状RNA circSMAD2(hsa_circ_0047603和hsa_circ_0108525)的水平及临床意义。方法收集本院手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织85例,以32例正常脑组织为参照采用实时定量PCR检测脑胶质瘤组织中hsa_circ_0047603和hsa_circ_0108525水平,分层分析hsa_circ_0047603和hsa_circ_0108525水平与脑胶质瘤临床病理特征的关系,结合随访数据和Cox比例风险回归模型评估hsa_circ_0047603和hsa_circ_0108525水平在脑胶质瘤预后中的价值。结果脑胶质瘤组织的hsa_circ_0047603和hsa_circ_0108525水平均高于正常组织(P<0.001)。hsa_circ_0047603和hsa_circ_0108525水平与病理类型、WHO分级、瘤周水肿和浸润深度均有关(P<0.05),而与性别和年龄无关(P>0.05)。单因素分析显示组织hsa_circ_0047603和hsa_circ_0108525水平与脑胶质瘤的总生存期(OS)有关(P<0.05),其中hsa_circ_0047603、hsa_circ_0108525低水平者的中位OS均为47.0个月,优于高水平者的25.5和35.0个月;多因素分析显示hsa_circ_0047603高表达(HR=2.149,95%CI:1.283~3.598,P=0.006)和hsa_circ_0108525高表达(HR=1.844,95%CI:1.022~3.327,P=0.028)均是脑胶质瘤预后不良的独立因素。结论circSMAD2的上调可能对预测脑胶质瘤患者的临床结果有价值,尤其是对那些病理分级高的患者,有作为该肿瘤生物标志物的潜能。

环状RNA UBAP2在结直肠癌中的表达及临床意义分析

目的:分析环状RNA泛素关联蛋白2(UBAP2)在结直肠癌中的表达及临床意义。方法:选取2021年1月—2023年1月江阴市中医院收治的疑似结肠直肠癌患者30例作为疑似组,选取同期健康体检者30例作为健康组。比较两组环状RNA UBAP2表水平,以病理检查结果为“金标准”,计算环状RNA UBAP2对结直肠癌的诊断效能。结果:疑似组环状RNA UBAP2水平高于健康组,差异有统计学意义(P<0.001)。环状RNA UBAP2诊断结直肠癌的灵敏度为95.65%(22/23)、特异度为14.29%(1/7)、准确度为82.14%(23/28)、阳性预测值为78.57%(22/28)、阴性预测值为50.00%(1/2)。结论:环状RNA UBAP2在结直肠癌患者中的表达水平较高,诊断结直肠癌的灵敏度、准确度较高,可为临床诊断提供参考依据。

重症肺炎患儿外周血环状RNA circFADS2、circESPL1表达的变化及临床意义

目的研究重症肺炎(SP)患儿外周血环状RNA circFADS2、circESPL1表达的变化及临床意义。方法选择2020年1月至2023年1月期间霍邱县第一人民医院收治的120例SP患儿(SP组)和同期80名健康儿童(对照组)进行研究。检测外周血circFADS2、circESPL1的表达水平。根据肺炎严重程度指数(PSI)将SP患儿分为高危组(PSIⅤ级)、中危组(PSIⅣ级)、低危组(PSIⅠ~Ⅲ级),根据半年预后的随访分为预后良好组和预后不良组。采用logistic回归模型分析SP患儿预后的影响因素,采用ROC曲线分析circFADS2、circESPL1对预后的预测价值。结果SP组外周血circFADS2、circESPL1的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=10.109、5.181,P<0.05);不同病情严重程度SP患儿外周血circFADS2、circESPL1的表达水平呈现:低危组<中危组<高危组,差异均有统计学意义(F=15.831、11.945,P<0.05);预后不良组SP患儿外周血circFADS2、circESPL1的表达水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(t=6.073、3.621,P<0.05);logistic回归分析显示:合并心力衰竭以及外周血circFADS2、circESPL1的表达水平增加是SP患儿预后不良的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示:外周血circFADS2、circESPL联合检测预测SP患儿预后的灵敏度和特异度分别为84.62%和71.43%,高于单一检测(P<0.05)。结论SP患儿外周血中circFADS2、circESPL1表达增加,两者联合检测对SP预后具有预测价值。

环状RNA GRIN2B通过调控微小RNA-135b对食管癌细胞增殖和侵袭的影响实验研究

目的:探讨环状RNA GRIN2B(circ-GRIN2B)对食管癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用RT-qPCR检测circ-GRIN2B在食管癌细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706和正常食管上皮细胞HET-1A中的表达,筛选circ-GRIN2B表达最低的细胞株进行后续实验。在食管癌细胞中转染circ-GRIN2B过表达质粒(circ-GRIN2B组)和空载对照质粒(NC组)。采用平板克隆实验和Transwell实验检测circ-GRIN2B对食管癌细胞增殖和侵袭的影响。采用circRNADb软件预测circ-GRIN2B与微小RNA-135b(miR-135b)的结合位点并用双荧光素酶报告基因验证两者的靶向关系。采用RT-qPCR检测两组miR-135b表达。采用Western blot检测细胞增殖相关蛋白[周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)、周期素C(Cyclin C)]和侵袭相关蛋白[纤维结合蛋白(FN)、转录因子8(ZLF8)、叉头盒蛋白C2(FOXC2)]表达。结果:与HET-1A细胞比较,circ-GRIN2B在细胞株Eca109、TE-13、KYSE30、OE33、EC9706表达降低,且在EC9706细胞中表达量最低(均P<0.05)。circ-GRIN2B组circ-GR IN2B表达量高于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞集落数量少于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞侵袭数目小于NC组(P<0.01)。miR-135b是circ-GRIN2B的靶基因。circ-GRIN2B组miR-135b表达量低于NC组(P<0.01)。circ-GRIN2B组EC9706细胞增殖相关蛋白和侵袭相关蛋白表达水平较NC组降低(均P<0.05)。结论:circ-GRIN2B在食管癌细胞中低表达,其可能通过下调miR-135b表达抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

维吾尔族2型糖尿病环状RNA_0003340的表达水平与胰岛细胞功能的相关性研究

目的:探讨维吾尔族2型糖尿病(T2DM)环状RNA_0003340的表达水平与胰岛细胞功能的关系。方法:纳入维吾尔族T2DM患者68例及正常对照者68例,测定生化指标,稳态模型评估胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)和胰岛素抵抗指数(HOMA IR),检测外周血环状RNA_0003340表达水平。结果:维吾尔族T2DM组环状RNA_0003340表达水平高于对照组(P<0.01)。Spearman相关分析显示,环状RNA_0003340表达水平与空腹血糖、2h血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、空腹胰岛素、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),与HOMA-β呈负相关(P<0.01);偏相关分析显示,环状RNA_0003340表达水平与空腹血糖、2h血糖、糖化血红蛋白、HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。结论:维吾尔族T2DM环状RNA_0003340表达水平升高,且其表达水平与胰岛细胞功能存在相关性,环状RNA_0003340表达上调可能参与了维吾尔族T2DM的发生。

非小细胞肺癌组织中circBIRC6、APPBP2表达及临床预后意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中环状核糖核酸杆状病毒IAP重复序列6(circBIRC6)、β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2(APPBP2)表达及临床预后意义。方法 收集2018年6月~2020年1月90例在河北北方学院附属第一医院行手术切除的NSCLC组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测circBIRC6、APPBP2表达,并分析二者与NSCLC患者临床病理特征的关系。通过Pearson相关性分析NSCLC组织中circBIRC6与APPBP2 mRNA表达的相关性,Kaplan-Meier法绘制不同表皮生长因子受体(EGFR)基因突变、TNM分期和circBIRC6、APPBP2 mRNA表达的NSCLC患者生存曲线,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果 与癌旁组织比较,NSCLC组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA表达升高(P<0.05)。NSCLC组织中circBIRC6与APPBP2 mRNA表达呈正相关(r=0.817,P<0.001)。NSCLC患者不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA表达比较有差异(P<0.05)。随访3年,90例NSCLC患者总生存率为55.56%(50/90)。EGFR基因突变阳性/阴性NSCLC患者总生存率比较无差异(P>0.05);TNM分期Ⅰ~Ⅱ期NSCLC患者总生存率高于Ⅲ期NSCLC患者(P<0.05);circBIRC6、APPBP2 mRNA高表达组生存率低于circBIRC6、APPBP2 mRNA低表达组(P<0.05)。低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和circBIRC6≥10.97、APPBP2 mRNA≥2.48为NSCLC患者死亡的独立危险因素[OR(95%CI)=3.586(1.080~11.909)、3.632(1.193~11.057)、3.197(1.060~9.640)、3.223(1.086~9.570)、2.767(1.022~7.492)]。结论 NSCLC组织中circBIRC6、APPBP2 mRNA高表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

过/降表达circSTON2的胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力观察

目的观察过/降表达环状RNA-STON2(circSTON2)的胰腺癌细胞株增殖、迁移及侵袭能力变化,初步探讨circSTON2在胰腺癌中的生物学功能。方法体外传代培养人胰腺癌细胞株PANC-1,分为circSTON2过表达组、circSTON2降表达组及对照组,利用质粒转染及siRNA干扰技术分别转染circSTON2过表达质粒、circSTON2-siRNA干扰质粒及空白对照质粒。采用CCK-8法检测培养24、36、48 h时细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果培养24、36、48 h时,细胞增殖能力circSTON2过表达组>对照组>circSTON2降表达组(P均<0.05);迁移细胞数、侵袭细胞数circSTON2过表达组>对照组>circSTON2降表达组(P均<0.05)。结论circSTON2过表达可增强胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,而circSTON2降表达后作用与之相反。

环状RNA UBAP2和环状RNA VRK1在子痫前期患者血清中的表达及其与妊娠结局的关系

目的探讨环状RNA UBAP2(circUBAP2)、环状RNA VRK1(circVRK1)在子痫前期(PE)患者血清中的表达水平及其与妊娠结局的关系。方法选取2019年10月至2022年8月于石家庄市第四医院分娩的134例PE患者作为PE组,另选取同期分娩的134例健康孕妇作为健康组。比较PE组、健康组血清circUBAP2、circVRK1表达水平及不良妊娠结局发生率。依据PE患者妊娠结局,将其分为妊娠良好组(n=94)和妊娠不良组(n=40);比较血清circUBAP2、circVRK1表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清circUBAP2、circVRK1预测PE患者妊娠结局的价值;采用Logistic回归分析PE患者妊娠结局的影响因素。结果PE组患者血清circUBAP2表达水平低于健康组(P<0.05),circVRK1表达水平及总不良妊娠结局发生率高于健康组(P<0.05)。妊娠不良组PE患者收缩压、重度PE占比、血清circVRK1表达水平高于妊娠良好组(P<0.05)。血清circUBAP2、circVRK1预测PE患者妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.686,截断值分别为0.39、2.50,灵敏度分别为77.5%、70.0%,特异度分别为84.0%、63.8%。重度PE、低表达circUBAP2、高表达circVRK1与PE患者妊娠不良结局密切相关(P<0.05)。结论PE患者血清circUBAP2表达水平较低,circVRK1表达水平较高,与PE患者妊娠结局密切相关,且circUBAP2或可成为临床预测PE患者妊娠结局的辅助指标。

环状RNA ATP2B1靶向miR-452-5p降低胃癌细胞系的增殖和侵袭

目的探讨环状RNA circATP2B1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法收集2018年7月至2021年2月福建医科大学附属泉州第一医院胃肠肝胆外科行手术切除并病理学诊断的44例胃癌组织标本及癌旁组织标本。选取4株胃癌细胞系(SGC7901、HS-746T、MGC803、BGC823)和正常胃黏膜上皮细胞系(GES-1)。RT-qPCR检测胃癌组织和细胞系中circATP2B1表达。将circATP2B1表达最低的胃癌细胞分为对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染circATP2B1过表达质粒)。分别采用MTT法和Transwell小室法检测各组胃癌细胞的增殖活性和侵袭能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析circATP2B1可能的作用机制,RT-qPCR和Western blot检测circATP2B1下游基因的表达。结果胃癌组织circATP2B1表达量显著低于癌旁组织(0.92±0.08 vs 3.62±0.23,P<0.01)。胃癌细胞系circATP2B1表达量均显著低于GES-1细胞(P<0.01),其中以HS-746T细胞的表达量最低(P<0.01)。与对照组相比,实验组HS-746T细胞的增殖活性显著降低(P<0.05),侵袭能力显著下降(P<0.01)。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验显示circATP2B1可靶向结合miR-452-5p(P<0.01),miR-452-5p可靶向结合原钙黏附蛋白9(PCDH9)(P<0.01)。与对照组比较,实验组HS-746T细胞miR-452-5p表达显著下降(1.00±0.04 vs 0.24±0.05,P<0.01),PCDH9基因表达显著上升(P<0.01)。结论circATP2B1在胃癌组织和细胞系中低表达,circATP2B1通过靶向结合miR-452-5p正调控PCDH9基因表达,进而降低胃癌HS-746T细胞增殖和侵袭能力。

肿瘤中环状RNA泛素结合相关蛋白2的表达及调控作用研究进展

泛素结合相关蛋白2(UBAP2)是一种新发现的环状RNA,其在诸多人类肿瘤中异常表达并能参与调控肿瘤恶性生物学行为进程如肿瘤细胞的增殖、侵袭转移、抗凋亡和上皮间质转化等。环状RNA UBAP2(circ-UBAP2)的异常表达也与肿瘤的淋巴结转移、TNM分期、微血管浸润等病理特征有关;并且circ-UBAP2与环状RNA临床应用的研究热点如调控肿瘤细胞自噬、诱导细胞放疗和化疗耐受等也紧密相关。本文就circ-UBAP2在肿瘤中的表达、生物学作用及调控机制进行综述。

不同形貌CeO_(2)催化CO_(2)合成环状碳酸酯的研究

以不同形貌CeO_(2)为催化剂,催化CO_(2)和1,3-丙二醇合成三亚甲基碳酸酯。通过SEM、TEM、XPS和XRD对不同形貌CeO_(2)的结构和组成进行了表征。结果表明,当以棒状CeO_(2)为催化剂、2-氰基吡啶为脱水剂,在反应温度为130℃、反应时间为4 h时,三亚甲基碳酸酯的收率为72.5%;R-CeO_(2)具有较多的缺陷位点数量和适宜的比表面积,平均粒径小且具有中等数量的路易斯酸性位点。在此基础上对底物范围进行了拓展,实验结果显示五元环状碳酸酯和六元环状碳酸酯均能得到较好的收率。

环状RNA UBAP2在结直肠癌患者中的表达及与预后的关系

目的探讨环状RNA泛素关联蛋白2(UBAP2)在结直肠癌患者中的表达及与预后的关系。方法以2018年6月至2019年6月在杨凌示范区医院住院接受手术的80例结直肠癌患者为研究对象,收集术前结直肠癌患者外周血标本、术中癌组织标本和癌旁组织标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清及结直肠癌组织、癌旁组织中环状RNA UBAP2表达水平,并分析癌组织中环状RNA UBAP2表达水平与患者临床特征的关系;对患者进行3年随访,采用Kaplan-Meier生存曲线分析结直肠癌组织中环状RNA UBAP2表达水平与患者预后的关系;采用多因素COX回归分析结直肠癌患者预后的影响因素。结果结直肠癌患者外周血中环状RNA UBAP2的表达水平(2.06±0.97)显著高于健康对照者(1.02±0.14),差异有统计学意义(P<0.05);与癌旁组织相比,结直肠癌组织中环状RNA UBAP2的表达水平显著升高(P<0.05);结直肠癌组织中环状RNA UBAP2的表达水平与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、分化程度有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,结直肠癌组织中环状RNA UBAP2高表达患者3年生存率低于低表达患者(P<0.05)。多因素COX回归分析显示,环状RNA UBAP2、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、分化程度是结直肠癌患者预后的影响因素(P<0.05)。结论结直肠癌患者外周血和癌组织中环状RNA UBAP2呈显著高表达,其中癌组织中环状RNA UBAP2表达水平与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、分化程度等临床病理特征及预后有密切联系,对判断患者预后情况具有重要价值。

人环状RNA_0114428对脂多糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用及其机制

目的:探讨人环状RNA_0114428(circ_0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ_0114428通过调节微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/转化生长因子β受体2(TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法:体外培养HK-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2的靶向调控关系,CCK-8法筛选合适的LPS干预浓度和时间。给予10 mg·L^(-1) LPS干预12 h构建HK-2细胞损伤模型,HK-2细胞分为对照组、LPS组、LPS+circ_0114428沉默对照(LPS+si-NC)组、LPS+circ_0114428沉默(LPS+si-circ_0114428)组、LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂对照(LPS+si-circ_0114428+in-NC)组和LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂(LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p)组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中circ_0114428、miR-139-5p和TGFBR2 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中TGFBR2、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL^(-1)β)水平。结果:双荧光素酶报告基因实验,miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2存在靶向调控关系(t=10.171,P<0.05;t=7.682,P<0.05)。CCK-8法检测LPS干预的最佳浓度为10 mg·L^(-1),最佳干预时间为12 h。与对照组比较,LPS组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-circ_0114428组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显降低(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与LPS+si-circ_0114428+in-NC组比较,LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:circ_0114428能减轻LPS诱导的HK-2细胞损伤,其作用机制可能与调节miR-139-5p/TGFBR2轴有关。

环状RNA-胞裂蛋白2/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1分子轴在重症急性胰腺炎中的作用及机制研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-胞裂蛋白2(SEPT2)/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)分子轴在重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及机制。方法选取2019年12月至2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的46例SAP患者作为重症组;并选取本院同期收治的41例轻症急性胰腺炎(MAP)患者作为轻症组;另选取本院同期35名健康体检者作为对照组。3组均采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定血清circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量,采用急性生理和慢性健康评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评估病情严重程度;采用重组慢病毒包装合成有效感染序列sh-SEPT2(干扰组)与过表达序列oe-SEPT2(过表达组)建立动物模型,采用酶联免疫吸附试验测定大鼠生化指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、D乳酸及二胺氧化酶(DAO)],采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1及细胞凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA表达。比较3组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分,采用Pearson相关性分析SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分的相关性;比较干扰组与过表达组大鼠苏木精-伊红染色法(HE)结果、肠黏膜损伤评分、炎症因子水平及cir-cRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量。结果重症组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分均高于轻症组和对照组,且轻症组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分均呈正相关(r>0,P<0.05)。干扰组HE染色下胰岛细胞界限清晰,胰岛丰富,胞浆丰富,形态完整;过表达组大鼠胰岛细胞界限不清,胰岛数量较少,细胞形态不规则,细胞体积较大,边缘不齐;干扰组胰腺损伤评分为(2.58±0.16)分,低于过表达组的(3.95±0.53)分,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组IL-1β、IL-18、TNF-α、D乳酸及DAO水平均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1 mRNA表达及细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PARP-1通过靶向作用于circRNA-SEPT2/miR-150-5p参与SAP的发生与发展,抑制circRNA-SEPT2表达,可减轻SAP肠黏膜屏障损伤,能为SAP治疗提供新的靶点。

CO_(2)与炔丙醇羧环化合成α-亚烷基环状碳酸酯研究进展

CO_(2)是储量丰富、价格低廉、无毒且可再生的C1资源,将CO_(2)转化为高附加值能源及精细化学品是绿色化学的重要研究领域。炔丙醇是有机合成的重要原料,且易于功能化。α-亚烷基环状碳酸酯具有潜在的生物活性,主要应用于药物化学、有机合成等领域。CO_(2)和炔丙醇经羧环化反应制备α-亚烷基环状碳酸酯的过程可实现对CO_(2)的资源化利用,且该反应路线具有原子经济性。围绕CO_(2)与炔丙醇的羧环化反应,系统综述了不同类型催化剂的最新研究进展,为新型催化材料的设计开发指明了方向。

环状RNA KMT2E靶向miR-204-5p/MMP9轴对高糖条件下人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的探究环状RNA KMT2E(circ KMT2E)对高糖(HG)诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的影响及调控机制。方法收集自2018年12月至2020年11月在海南医学院第二附属医院眼科中心进行白内障手术的33例非糖尿病性白内障(DC)患者和33例DC患者的晶状体前囊膜,TUNEL法检测晶状体前囊膜上LEC凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测晶状体前囊膜中circ KMT2E、miR-204-5p和基质金属蛋白酶(MMP)9 mRNA表达水平,采用Pearson法分析circ KMT2E、miR-204-5p和MMP9 mRNA表达水平的相关性。取人晶状体上皮细胞系(HLE-B3),CCK-8法筛选最佳HG浓度及作用时间;将HLE-B3细胞分为对照组、HG组、沉默对照组、KMT2E沉默组、过表达对照组、KMT2E过表达组、KMT2E过表达+miR-NC组、KMT2E过表达+miR-204-5p模拟物组,转染后将HLE-B3细胞用HG处理24 h。RT-qPCR检测各组细胞中circ KMT2E、miR-204-5p和MMP9 mRNA表达水平,验证转染效果;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测细胞中MMP9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测circ KMT2E与miR-204-5p的靶向关系。结果与非DC患者相比,DC患者晶状体前囊膜中LEC凋亡、circ KMT2E、MMP9 mRNA表达水平显著升高,miR-204-5p水平显著降低(P<0.05);Pearson相关分析显示,DC患者晶状体前囊膜中circ KMT2E与miR-204-5p呈负相关,MMP9与miR-204-5p呈负相关,MMP9与circ KMT2E呈正相关。200 mmol/L葡萄糖作用24 h时可显著抑制HLE-B3细胞活力(P<0.05)。转染后,与对照组相比,HG组细胞中circ KMT2E、MMP9 mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著升高,miR-204-5p水平、细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);与HG组相比,KMT2E沉默组细胞中circ KMT2E、MMP9 mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低,miR-204-5p水平、细胞活力、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),KMT2E过表达组上述指标变化则表现出相反的作用(P<0.05);在过表达KMT2E的基础上,上调miR-204-5p,可降低MMP-9表达,明显逆转circ KMT2E过表达对HLE-B3细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-204-5p mimic后,KMT2E-WT细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。结论沉默circ KMT2E可能通过靶向上调miR-204-5p,进而抑制MMP9的表达,减少HG诱导的人LEC凋亡。

鸡circSFMBT2克隆及对DF-1细胞增殖的影响

【目的】验证鸡circSFMBT2的环形结构,探究其表达规律及功能。【方法】以麒麟鸡和DF-1细胞为研究对象,根据反向剪切位点序列特征设计引物,通过PCR和测序验证circSFMBT2的环形结构。通过RNase R和反转录试验分析circSFMBT2的基本特性,利用qRT-PCR探究不同组织、不同时期circSFMBT2的表达水平。通过构建过表达载体,结合qRT-PCR、Edu和CCK-8等试验,探究circSFMBT2对鸡DF-1细胞增殖的影响。【结果】鸡circSFMBT2全长827 nt,由SFMBT2基因外显子12~18环化形成。RNase R耐受性试验表明,circSFMBT2不易被RNase R降解,随机引物对circSFMBT2的反转录效率是Oligo-d(T)18引物的8倍。组织表达谱表明,circSFMBT2在麒麟鸡14胚龄以及1周龄的肝脏和脾脏中高表达、在胸肌和腿肌中低表达。circSFMBT2在胸肌和腿肌的时序表达谱表明,circSFMBT2在胚胎时期表达量较高,出生后表达量迅速下降。在DF-1细胞中circSFMBT2过表达48 h后,增殖标记基因PCNA和CCND1的表达量分别较对照组上调85%和92%。E d u和C C K-8细胞增殖试验表明,鸡c i r c S F M B T 2可以促进细胞增殖进程。【结论】circSFMBT2是鸡SFMBT2基因的一个环状转录本,可以促进DF-1细胞的增殖,研究结果为深入探究鸡circSFMBT2的生物学功能和作用机制奠定了基础。

circMAN1A2调节miR-212-3p/DDIT4轴对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究circMAN1A2靶向miR-212-3p/DNA损伤诱导转录子4(NDA damage-inducible transcript 4,DDIT4)轴对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法qRT-PCR法检测胃癌组织和细胞中circMAN1A2、miR-212-3p表达水平。荧光素酶检测circMAN1A2与miR-212-3p、DDIT4和miR-212-3p的靶向关系。在胃癌细胞SGC-7901、HGC-27中转染si-NC、si-circMAN1A2、si-circMAN1A2+anti-NC、si-circMAN1A2+anti-miR-212-3p、miR-NC、miR-212-3p mimics,将未转染的SGC-7901、HGC-27细胞设为对照。平板克隆实验检测细胞增殖;细胞划痕及Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力。Western blotting检测增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达。结果在胃癌组织及细胞中,circMAN1A2高表达,miR-212-3p低表达;下调circMAN1A2可以靶向上调miR-212-3p表达,且下调DDIT4表达,进而抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。抑制miR-212-3p表达可部分逆转抑制circMAN1A2表达对胃癌细胞恶性增殖的抑制作用。结论在胃癌细胞中抑制circMAN1A2表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其与调节miR-212-3p/DDIT4信号轴有关。