基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能改善机制

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能的改善机制。方法:采用改良线栓法缺血2 h,再灌注24 h建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和丙泊酚低(1 mg/ml)、中(2.5 mg/ml)、高剂量(5 mg/ml)组,各12只,另设含有12只大鼠的假手术组。分组后即开始给药,1次/d,共4周,末次给药12 h后,采用改良神经功能评分(mNSS)法进行神经缺损评分;采用TTC染色法检测脑梗死面积;HE、Nissl染色进行神经元细胞及尼氏小体形态学观察;Tunel法进行神经元细胞凋亡检测;Elisa法检测脑组织cAMP、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)含量;免疫荧光法检测脑组织环磷酸腺苷(cAMP)、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数;Western blot法检测脑组织PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量。结果:模型组大鼠比较假手术组大鼠的mNSS评分、脑梗死面积百分比显著增加(均P<0.05),HE染色和Nissl染色可见明显的神经元细胞损伤和尼氏小体破坏,脑组织cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著下降,模型组大鼠比较假手术组大鼠的cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数和蛋白共表达阳性细胞数也明显下降(均P<0.05)。与模型组比较,丙泊酚给药组大鼠mNSS评分、脑梗死面积百分比显著降低(均P<0.05),HE染色和Nissl染色可见神经元细胞损伤和尼氏小体破坏有不同程度改善,脑组织cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著升高(均P<0.05),cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数均显著升高(均P<0.05)。结论:丙泊酚可能通过cAMP/PKA/CREB通路改善CIRI大鼠神经功能。

糖尿病视网膜病变不同分期患者血清δ样蛋白4和环磷腺苷效应元件结合蛋白水平对微血管损伤的预测价值

目的分析糖尿病视网膜病变(DR)不同分期患者血清δ样蛋白4(DLL4)和环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)水平对微血管损伤的预测价值。方法选择2020年2月—2023年2月收治的80例糖尿病患者为研究对象,依据DR不同分期分为无DR组(n=37)、非增生型DR组(n=19)和增生型DR组(n=24);检测血中DLL4及CREB水平,采用FACS Count流式细胞仪检测患者内皮祖细胞(EPC)、循环内皮细胞(CEC)及循环祖细胞(CPC)水平。结果增生型DR组血中DLL4及CREB水平最高,无DR组DLL4及CREB水平最低,差异有统计学意义(P<0.05);不同DR分期与DLL4、CREB水平呈显著正相关(P<0.05);糖尿病患者血中高DLL4及高CREB水平是影响DR分期的独立危险因素(P<0.05)。增生型DR组血中EPC、CPC水平最低,CEC水平最高,无DR组EPC、CPC水平最高,CEC水平最低,差异均有统计学意义(P<0.05);DLL4、CREB水平与EPC、CPC水平呈显著负相关(P<0.05),DLL4、CREB水平与CEC水平呈显著正相关(P<0.05);DLL4和CREB预测DR患者微血管损伤的曲线下面积(AUC)均大于0.85。结论随着DR分期增加,患者血清DLL4和CREB水平呈显著升高趋势,且DLL4和CREB对其微血管损伤具有较高的预测价值。

环磷腺苷反应元件结合蛋白在消化系统肿瘤中的作用

环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)是有核细胞中广泛存在的转录因子,通过启动靶基因转录调节细胞生长与代谢。在消化系统肿瘤中,CREB主要起到促癌作用,其表达与激活促进肿瘤的发生、发展和转移。CREB除了启动靶基因转录影响肿瘤的发生发展外,还与蛋白质和非编码RNA相互作用影响肿瘤细胞生长,这是CREB在消化系统肿瘤中发挥作用的重要机制。CREB对靶基因的作用并非都是依赖环磷腺苷的,而且对肿瘤的作用具有促癌与抑癌双重性,显示其在肿瘤中的作用网络及其机制具有复杂性。本文就近年来CREB在消化系统肿瘤中作用的研究进展进行综述。

电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力和海马CA1区环磷酸腺苷效应元件结合蛋白及其磷酸化水平的影响

目的探讨电针神庭、百会治疗脑卒中后认知功能障碍的机制。方法 45只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组15只。后两组线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型。电针组于造模后24 h开始电针神庭和百会,共7 d。每天电针后行Morris水迷宫测试。治疗后,取大鼠脑组织TTC染色测量脑梗死体积,免疫组化检测海马CA1区环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化水平(p-CREB)的表达。结果从第4天开始,与模型组相比,电针组大鼠逃避潜伏期及游泳路程缩短(P<0.05);穿越平台次数增多(P<0.05)。电针组大鼠脑梗死体积小于模型组(P<0.05);海马CA1区CREB、p-CREB表达量较模型组增加(P<0.05)。结论电针神庭、百会后,脑缺血再灌注大鼠海马CA1区CREB、p-CREB表达量增加,从而保护神经元,改善学习记忆功能。

蛋白激酶A部分通过环磷腺苷效应元件结合蛋白信号防止足细胞凋亡

目的 探讨转录因子环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）在蛋白激酶A（PKA）信号防止足细胞损伤中的作用。方法 使用条件永恒的小鼠足细胞株（5P12）14~25代分化的足细胞进行研究,细胞分为对照组、阿霉素（ADR）处理组（ADR组）和PKA特异性激动剂（pCPT-cAMP）预孵育＋ADR刺激组（pCPT-cAMP＋ADR组）。CCK-8法检测细胞毒性;Western blotting检测足细胞内被切割的半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved caspase-3）表达;siRNA抑制细胞内CREB表达,免疫荧光共聚焦显微镜和Western blotting检测磷酸化CREB（p-CREB）的定位和表达。结果 ADR诱导足细胞内cleaved caspase-3表达升高,pCPT-cAMP预孵育可显著降低ADR诱导的cleaved caspase-3表达上升。ADR使足细胞减少为原来的（40.45±6.78）%,pCPT-cAMP预孵育使细胞数量恢复为原来的（69.8±5.48）%。Western blotting检测结果显示：pCPT-cAMP分别预孵育5、15 min可使足细胞总蛋白中p-CREB表达分别上升（105.64±38.21）%和（98.61±41.03）%,细胞核内p-CREB的表达上升（114.52±11.28）%和（118.84±14.44）%。免疫荧光共聚焦显微镜检测显示pCPT-cAMP主要引起细胞核内p-CREB表达上升。siRNA可使足细胞CREB蛋白表达下降为原来的（25.1±2.44）%,且pCPT-cAMP预孵育不能防止ADR诱导的cleaved caspase-3表达升高。结论 转录因子CREB介导了PKA信号对足细胞的保护作用。

锌对神经病理性疼痛小鼠学习记忆障碍及海马DG区脑源性神经营养因子及环磷腺苷效应元件结合蛋白表达的影响

目的探讨锌对L5脊神经结扎横切(L5-SNT)术所致神经病理性疼痛(NPP)后的学习记忆功能障碍小鼠海马DG区脑源性神经营养因子(BDNF)及环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法成年小鼠(C57/BL6)48只,随机分为对照组、NPP组及高锌NPP组(Zn-NPP组),NPP组及Zn-NPP组施行左侧L5-SNT手术,3组术后第29天用Morris水迷宫实验测量小鼠空间学习记忆能力,水迷宫实验结束后,采用免疫组化及Western印迹检测各组BDNF及CREB表达。结果对照组、ZnNPP组、NPP组免疫组化及Western印迹结果显示海马BDNF及CREB的表达逐渐增多(P<0.05)。结论锌可改善NPP后小鼠学习记忆能力,其机制可能与海马BDNF及CREB的表达改变有关。

环磷腺苷效应元件结合蛋白磷酸化在胰岛素样生长因子-1抑制耳蜗毛细胞凋亡中的作用

目的探讨磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(P-CREB)对胰岛素样生长因子(IGF)-1抑制小鼠毛细胞凋亡的作用。方法体外培养新生小鼠耳蜗基底膜。实验分为A组:正常对照培养液;B组:庆大霉素(GM)(0.5 mmol/L);C组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(1 ng/ml);D组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(10 ng/ml);E组GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(50 ng/ml);F组:GM(0.5 mmol/L)+IGF-1(100 ng/ml)。培养24 h后收集细胞及固定。应用TUNEL法观察各组耳蜗毛细胞的凋亡情况。应用Western印迹及RT-PCR法观察P-CREB的表达情况。结果 A组无凋亡细胞。B组检测到凋亡细胞。C组细胞凋亡较B组明显减少。D组凋亡细胞减少最明显(与B组相比,P<0.05)。E组及F组凋亡细胞较D组有所增加。P-CREB:Western印迹结果及RT-PCR结果表明:A组及B组P-CREB蛋白及m RNA表达较低。与B组相比,C、D、E及F组P-CREB蛋白及m RNA明显增加,以D组增加最明显。结论 IGF可能通过激活CREB磷酸化抑制毛细胞凋亡。

头针对中风后肢体痉挛大鼠脑皮质中环磷腺苷效应元件结合蛋白影响的研究

目的探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)在中风后肢体痉挛大鼠脑皮质神经元细胞恢复中的作用机制,以及头针对中风后肢体痉挛的治疗效果。方法将45只Sprague Dawley大鼠(SD大鼠)随机分成假手术组15只,实验组30只。实验组采用线栓法进行大脑中动脉闭阻模型(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)造模。将造模成功大鼠随机分到模型组和头针组,给予相应的治疗1周,并每日观察记录改良Ashworth评分、平衡木行走实验评分等动物行为学数据。1周后对大鼠脑组织进行取材,采用尼氏染色观察缺血损伤病变部位的神经元细胞及尼氏小体的变化,并采用Western Blot、PCR检测脑皮质中的CREB、p-CREB及其mRNA的表达。结果行为学检测结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠改良Ashworth评分增高,平衡木行走实验评分降低;与模型组比较,头针组大鼠改良Ashworth评分降低,平衡木行走实验评分增高。头针组大鼠脑皮质神经元排列整齐且尼氏体数量增加,CREB及p-CREB蛋白表达较模型组增加。头针组大鼠脑皮质CREB mRNA表达较模型组增加。结论头针调控对脑皮质内CREB表达水平,促进缺血损伤组织的神经元细胞恢复,改善肢体痉挛状态,促进运动功能恢复。

环磷酸腺苷效应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子信号通路在调心方改善APP/PS1小鼠学习记忆中的作用

目的通过观察APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠海马环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路的变化,探讨调心方对APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆的影响机制。方法将3月龄APP/PS1雄性小鼠54只随机分为模型组(n=18)、多奈哌齐组(n=18)和调心方组(n=18);另设同月龄同品系的C57/BL6雄性小鼠18只为对照组。各给药组给予相应药物。给药12周后,每组采用Morris水迷宫进行行为学测试,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)法检测海马CREB mRNA和BDNF mRNA表达的变化,Western blotting法检测海马磷酸化CREB(p-CREB)、BDNF蛋白表达的变化。结果与模型组比较,调心方组逃避潜伏期显著缩短(P<0.001),在原平台所在象限停留的时间百分比增加(P<0.05),海马CREB mRNA、BDNF mRNA表达较模型组均增加(P<0.05),海马p-CREB、BDNF蛋白表达较模型组明显增加(P<0.01)。结论调心方可有效改善APP/PS1双转基因AD小鼠的空间学习记忆,可能与上调CREB/BDNF信号通路有关。

沉默环磷腺苷效应元件结合蛋白1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白1(cAMP-response element binding protein 1,CREB1)基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法针对人CREB1的基因序列设计并构建2条短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),采用慢病毒转染shRNA至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系抑制其CREB1的表达。将实验组分为shCREB1#1组和shCREB1#2组,同时将shSCR空载质粒转染至上述细胞系作为阴性对照组。采用实时定量PCR和Western印迹法检测转染效率;CCK-8法检测细胞增殖能力;集落形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western印迹法检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果相较于阴性对照组,shCREB1#1和shCREB1#2组MCF-7和MDA-MB-231细胞CREB1基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.001)。沉默CREB1后,MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力减弱,且凋亡率升高(P<0.05)。沉默CREB1使细胞周期蛋白CDK2、CDK4、CDK6、Cyclin D1以及抗凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达下调,而使促凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达上调(P<0.05)。结论沉默CREB1可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并诱导其凋亡。

环磷腺苷效应元件结合蛋白转录共激活因子在食管癌中的表达及与临床病理的关系

探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)转录共激活因子1(CRTC1)在食管癌组织与癌旁组织中的转录水平和翻译水平变化,及其变化与临床病理的关系。收集25例食管癌鳞癌患者的癌组织及与之配对的癌旁组织,通过qRT-PCR检测CRTC1的mRNA水平,Western blot检测CRTC1的蛋白水平。结果表明:在食管癌中,CRTC1蛋白表达低于癌旁组,而mRNA水平高于癌旁组;CRTC1在转录水平上与肿瘤位置和淋巴结转移有关。由此可见:CRTC1在食管癌中存在异常表达,CRTC1的mRNA有望用于食管癌诊断及淋巴结转移评估。

磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白对持续惊厥后海马细胞凋亡调控基因表达的影响

目的观察外源性磷酸环磷腺苷反应元件结合蛋白(p CREB)抗体对惊厥持续状态(SC)后海马细胞凋亡调控基因Bcl-2和c-Jun表达的影响,探讨p CREB在惊厥性脑损伤中的作用及其调控机制。方法成年Wistar鼠48只随机分为正常对照组(NC组,n=24)和惊厥持续状态组(SC组,n=24)。SC组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱发SC模型。两组均根据脑室注射内容分为无注射组、生理盐水注射组(NS组)和抗p CREB注射组(抗p CREB组)3个亚组,每个亚组8只。注射后6 h处死动物。取双侧海马采用免疫组化和原位杂交(ISH)观察Bcl-2蛋白/m RNA、c-Jun蛋白/m RNA的分布,并进行半定量分析。结果 NC组中,3个亚组注射侧Bcl-2蛋白/m RNA表达均无显著性差异(P>0.05),SC组中抗p CREB组低于无注射组和NS组(P<0.05)。NC组和SC组中,3个亚组注射侧c-Jun蛋白/m RNA表达均有非常高度显著性差异(P<0.001),NS组和抗p CREB组c-Jun蛋白/m RNA表达高于无注射组(P<0.05),抗p CREB组高于NS组(P<0.05)。结论 SC后脑室内注射外源性抗p CREB抗体可下调SC后海马Bcl-2蛋白/m RNA表达,上调c-Jun蛋白/m RNA表达。

羧甲基壳聚糖对体外培养许旺细胞环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路的影响

背景:已有研究证实羧甲基壳聚糖对许旺细胞增殖、分泌具有促进作用,但其对许旺细胞内环磷腺苷介导蛋白激酶A信号通路的影响仍需要进一步研究。目的:观察羧甲基壳聚糖对大鼠许旺细胞内环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路的影响。方法:取第2代新生大鼠许旺细胞,以1×109 L-1的细胞浓度接种于6孔板,分4组培养,空白对照组加入PBS,实验组分别加入50,100,200 mg/L的羧甲基壳聚糖溶液培养。培养24 h后,检测许旺细胞内环磷腺苷浓度、蛋白激酶A活性及环磷腺苷反应元件结合蛋白m RNA的表达。结果与结论:与空白对照组比较,羧甲基壳聚糖呈剂量依赖性提高许旺细胞内环磷腺苷浓度(P<0.05),呈剂量依赖性增强许旺细胞内蛋白激酶A活性(P<0.05),呈剂量依赖性提高许旺细胞内环磷腺苷反应元件结合蛋白m RNA的表达(P<0.05)。表明羧甲基壳聚糖可增加许旺细胞内环磷腺苷浓度、促进蛋白激酶A活性,从而激活环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路。

恩格列净调节AMP依赖蛋白激酶/蛋白激酶B/环磷腺苷效应元件结合蛋白信号通路对肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响

目的探讨恩格列净调节AMP依赖蛋白激酶(AMPK)/蛋白激酶B(AKT)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路对肺动脉高压(PH)大鼠肺血管重构的影响。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、PH组、恩格列净低、中、高剂量组、恩格列净+Compound C组,每组各10只。除对照组外,其余5组大鼠均采用低氧处理构建PH模型。低氧处理前,恩格列净低、中、高剂量组分别以7.5 mg/kg、15.0 mg/kg、30.0 mg/kg恩格列净灌胃,恩格列净+Compound C组以30.0 mg/kg恩格列净灌胃同时腹腔注射10 mg/kg Compound C,PH组和对照组予同体积生理盐水灌胃。6组大鼠均每天灌胃1次,连续4周。检测6组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI);采用HE染色观察肺小动脉组织病理学变化并计算肺小动脉管壁厚度在血管外径中的占比(WT%)、肺小动脉管壁面积在血管总面积中的占比(WA%);采用ELISA检测大鼠血清低氧诱导因子(HIF)-1α及内皮素(ET)-1水平;采用Western blot检测大鼠肺动脉组织AMPK/AKT/CREB信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,PH组大鼠mPAP、RVHI、肺小动脉WT%、WA%及血清HIF-1α、ET-1水平均明显升高,肺动脉组织磷酸化AMPK(p-AMPK)/AMPK、磷酸化AKT(p-AKT)/AKT、磷酸化CREB(p-CREB)/CREB表达水平均明显降低;与PH组比较,恩格列净低、中、高剂量组大鼠mPAP、RVHI、肺小动脉WT%、WA%及血清HIF-1α、ET-1水平均依次降低,肺动脉组织p-AMPK/AMPK、p-AKT/AKT、p-CREB/CREB表达水平均依次升高;与恩格列净高剂量组比较,恩格列净+Compound C组大鼠mPAP、RVHI、肺小动脉WT%、WA%及血清HIF-1α、ET-1水平均明显升高,肺动脉组织p-AMPK/AMPK、p-AKT/AKT、p-CREB/CREB表达水平均明显降低(P<0.05)。结论恩格列净能够减轻PH大鼠肺血管重构,可能是通过调节AMPK/AKT/CREB信号通路发挥作用。

齐墩果酸对快速老化小鼠学习记忆能力突触形态及环磷腺苷效应元件结合蛋白表达的影响

目的 观察齐墩果酸对9月龄快速老化动物模型SMAP8小鼠行为学、突触结构完整性以及皮质及海马环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein,CREB）表达的影响.方法 30只9月龄健康雄性SMAP8小鼠随机分为模型组、齐墩果酸组、安理申组,每组10只,10只同龄同源健康雄性正常小鼠作为正常对照组.齐墩果酸组、安理申组给予相应的药物灌胃治疗,正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃.4周后进行Morris水迷宫实验观察行为学变化,电镜观察各组小鼠海马神经元突触形态学变化,采用Western Blot法检测CREB蛋白的表达.结果 （1）Morris水迷宫结果显示：在隐蔽平台实验中,与正常组相比,模型组小鼠潜伏时间[（83.33±4.96）s,（75.13±6.01）s,（71.75±7.77）s,（63.40±8.93）s,（60.97±8.38）s]较长;与模型组相比,齐墩果酸组[（75.97±4.49）s,（64.98±4.93）s,（64.16±6.23）s,（53.47±5.99）s,（47.91±7.64）s]及安理申组[（71.30±7.65）s,（63.32±7.57）s,（59.82±4.69）s,（52.28±5.90）s,（46.22±7.27）s]小鼠潜伏时间明显缩短（P＜0.05）.空间探索实验中,与正常组相比,模型组穿越次数减少;与模型组相比,齐墩果酸组及安理申组小鼠穿越次数增多（P＜0.05）.（2）模型组与正常组相比突触数量少,突触间隙发生融合现象,突触前高度水肿,突触小泡不均一,线粒体数量极少,不能看出清晰的线粒体轮廓,而经齐墩果酸和安理申干预后突触轮廓清晰,突触前轻度水肿,小泡密集均一,不易见到清晰的线粒体膜和嵴结构.（3） Western Blot结果发现,与正常组比较,模型组不论海马还是皮质中的CREB蛋白表达量均下降,与模型组相比,齐墩果酸组与安理申组CREB蛋白表达量均上调（P＜ 0.05）.结论 齐墩果酸具有改善模型小鼠的学习记忆能力的作用,这一作用可能与保护模型小鼠突触形态、提高CREB蛋白表达量有关。

红景天苷改善顺铂引起的小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元损伤的机制

目的探究红景天苷(SAL)改善顺铂(CIS)引起的耳蜗毛细胞(CHC)和螺旋神经节神经元(SGN)损伤的作用及其与环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP效应元件结合蛋白(CREB)通路的关系。方法分离新生C57BL/6小鼠的耳蜗基底膜,分为对照组(C组)、CIS组、SAL组、SAL+SQ22536(cAMP抑制剂)组和SAL+H-89(PKA抑制剂)组,每组20条。C组仅加入无血清BME培养液;CIS组在培养液中加入15μmol/L CIS;SAL组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL;SAL+SQ22536组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和5μmol/L SQ22536;SAL+H-89组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和30μmol/L H-89。各组在培养箱中孵育48 h后,免疫荧光染色观察各组CHC和SGN损伤;试剂盒检测各组耳蜗基底膜中ROS和cAMP含量;Western blot检测各组PKA、p-CREB、CREB、Bcl-2、BDNF、NF-M蛋白水平。结果CIS组CHC排列混乱、体积肿大,SGN细胞核破碎、神经突缺失,SAL可减轻CHC和SGNs损伤。与C组相比,CIS组CHC、SGN数量较少(P<0.05),ROS、cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05);与CIS组相比,SAL组CHC、SGN数量较多(P<0.05),ROS含量较低(P<0.05),cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05)。SQ22536和H-89均可逆转SAL对CHC和SGN的保护作用。结论SAL可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路,促进抗凋亡蛋白和神经保护因子表达,缓解CIS引起的CHC和SGN损伤。

环磷腺苷效应元件结合蛋白基因转染小鼠视网膜神经节细胞的神经保护作用

目的探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）在原代小鼠视网膜神经节细胞（RGC）缺氧模型中对抗缺氧损伤的神经保护作用机制。方法原代细胞取材于C57BL／6小鼠视网膜，Thy-1、Bm-3a、神经丝蛋白（Neurofilament）进行细胞鉴定。实验组：常氧对照组、Ad—CREB组、Ad-绿色荧光蛋白（GFP）组、缺氧模型组。缺氧环境由三气培养箱构建，条件为：94％N2，5％CO2，1％O2。各组细胞在24、48hCREB、脑源性神经营养因子（BDNF）、B细胞淋巴瘤／白血病-2（bel-2）、磷酸肌醇3激酶（P13K）mRNA及蛋白水平通过实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）及Western blot检测。结果观察到细胞中有Thy-1、Brn-3a、Neurofilament表达，证实细胞为RGC。在荧光显微镜下RGC可表达GFP，说明CREB成功转染。阿尔玛蓝（AlarmarBlue）检测结果显示常氧对照组和Ad—CREB组RGC活性明显高于Ad-GFP组和缺氧模型组（P〈0．05）。RT—qPCR和Western blot结果显示Ad—CREB组中CREB、BDNF、bcl-2、P13KmRNA（2．213±0．609、0．703±0．053、0．873±0．075、2．280±0．399）及蛋白表达（0．403±0．011、0．369±0．006、0．516±0．014、0．652±0．011）较Ad—GFP组（mRNA：0．458±0．066、0．432±0．023、0．555±0．103、1．076±0．011；蛋白：0．273±0．003、0．188±0．012、0．404±0．013、0．439±0．017）、缺氧模型组（mRNA：0．800±0．156、0．287±0．023、0．443±0．083、1．096±0．286；蛋白：0．194±0．005、0．134±0．006、0．331±0．011、0．369±0．010）明显上调，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论过表达CREB通过激活P13K信号通路，上调bel-2调节胞内BDNF的表达水平，从而调控RGC的存活，CREB可能是起到保护视神经作用的治疗新靶点。

电针对创伤后应激障碍大鼠杏仁核及海马区环磷腺苷效应元件结合蛋白的表达及与突触蛋白结合能力的影响

目的:观察醒脑调肾电针法对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠杏仁核、海马区环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的表达,及其与突触关键蛋白结合能力的影响,探讨针刺改善PTSD的突触可塑性机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组,每组8只。应用单一连续应激法建立PTSD模型。电针组于"百会""神庭""肾俞"(双侧)穴行电针治疗,每日1次,每次20 min,连续治疗21 d。以自发活动、条件性恐惧反应检测评价行为学改变,运用免疫组织化学法、Western blot法检测杏仁核、海马区CREB的表达,运用染色质免疫沉淀(CHIP)法验证CREB与突触蛋白的结合能力。结果:与空白组比较,模型组自发活动距离减少(P<0.01),条件性恐惧反应检测僵直时间百分比增加(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠自发活动距离增加(P<0.05),条件性恐惧反应检测僵直时间百分比降低(P<0.01,P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠杏仁核、海马脑区的CREB表达水平下降(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠杏仁核、海马区CREB蛋白表达明显提高(P<0.01)。与空白组比较,模型组杏仁核、海马区CREB与突触后致密蛋白95(PSD95)结合能力下降(P<0.01),与突触素(SYN)、生长相关蛋白43(GAP43)结合能力差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,电针组杏仁核、海马区CREB与PSD95蛋白结合能力提高(P<0.05),与SYN、GAP43结合能力无显著变化(P>0.05)。结论:电针可能是通过提高CREB与突触关键蛋白PSD95结合能力以调控PTSD模型大鼠杏仁核、海马脑区突触可塑性,进而改善PTSD大鼠的行为学表现。

环磷酸腺苷信号通路参与调控生长抑素受体5激活对垂体催乳素腺瘤激素分泌的抑制作用

目的探究环磷酸腺苷(cAMP)信号通路在生长抑素受体5(SSTR5)激活对垂体催乳素腺瘤激素分泌抑制作用中的调控机制.方法使用构建的SSTR5过表达GH3细胞系作为垂体催乳素腺瘤的体外细胞模型,采用不同浓度SSTR5激动剂BIM23052联合cAMP激动剂Forskolin(5μmol/L)或百日咳毒素(10 nmol/L)进行细胞刺激,或联合转染过表达环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)作为干预.通过荧光素酶报告基因系统检测不同刺激组间PRL-luc、环磷酸腺苷反应元件(CRE)-Luc、Pit1-Luc、AP1-Luc和雌激素反应元件(ERE)-Luc启动子活性,Renilla荧光素酶基因用作内参以标准化转染效率.组间统计分析采用Student's t检验和单向方差分析.结果为验证GH3细胞中SSTR5过表达的有效性,使用cAMP响应元件报告载体进行监测,GH3SSTR5细胞中CRE报告基因活性显著低于GH3mock组[(74.87±6.66)%比(100.00±5.21)%,t=5.15,P<0.05],提示SSTR5过表达显著抑制CRE转录活性.不同浓度BIM23052(0、0.1、1.0、10.0、100.0nmol/L)联合Forskolin(5μmol/L)预处理GH3SSTR5细胞,CRE报告基因活性分别为(100.00±2.23)%、(17.79±2.30)%、(6.25±0.37)%、(25.27±2.99)%、(44.60±3.25)%,提示BIM23052降低了Forskolin诱导的CRE转录活性,呈现U型剂量响应曲线,在1.0 nmol/L时抑制效果最强(t=71.68,P<0.01).此外,Pit1启动子包含CRE元件,与未添加BIM23052和Forskolin组[CRE报告基因活性(100.00±4.24)%]比较,不同浓度BIM23052(0、0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L)联合Forskolin(5μmol/L)预处理GH3SSTR5细胞,Pit1报告基因活性分别为(317.91±9.03)%、(278.11±4.94)%、(250.72±14.33)%、(176.21±8.88)%、(162.34±7.54)%,表明BIM23052处理同样降低了GH3SSTR5细胞中Forskolin诱导的Pit1启动子活性,且这种降低具有剂量依赖性(P<0.01).然而,BIM23052和百日咳毒素处理对Prl启动子上的其他响应元件,如AP1或ERE(雌激素反应元件),并未表现出明显抑制作用(P>0.05).过表达CREB后,Prl启动子活性从空白转染组[Ctrl组(100.00±12.01)%比BIM组(63.02±15.35)%,t=5.10,P<0.01]到CREB过表达组[Ctrl组(102.17±11.80)%比BIM组(106.27±14.62)%,t=0.58,P>0.05].结论在垂体催乳素腺瘤中,SSTR5通过抑制cAMP-CREB途径来调控催乳素合成.

抑郁症模型大鼠海马区磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白1表达水平及神经元和突触超微结构的研究

目的 探讨抑郁症模型大鼠海马区磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白1（phospho cAMP response element-binding protein 1,p-CREB1）的表达变化对相应神经元、突触超微结构的影响及文拉法辛对p-CREB1表达及神经元、突触超微结构的作用.方法 采用随机数字表法将54只大鼠随机分为正常组（n=12）、抑郁症模型对照组（简称对照组,n=14）、抑郁症模型＋生理盐水组（简称生理盐水组,n =14）和抑郁症模型＋文拉法辛药物干预组（简称药物干预组,n=14）.通过蔗糖水消耗实验、旷场实验检测动物的行为学表现,Morris水迷宫检测学习记忆能力.免疫组织化学检测海马区p-CREB1蛋白表达水平,RT-PCR检测CREB1 mRNA表达水平,透射电子显微镜观察海马区神经元、突触超微结构.p-CREB1阳性细胞数目与Morris水迷宫、突触形态学参数进行相关分析.结果 （1）行为学结果：对照组和生理盐水组蔗糖水消耗分别为（7.4±1.0）、（7.5±1.0） ml/100 g,低于正常组[（9.6±0.3） ml/100g]及药物干预组[（9.4±0.8）ml/100 g;F=17.851,P＜0.01）];Morris水迷宫定位航行实验逃避潜伏期分别为（61.1±10.5）、（59.0±10.6）s,大于正常组[（29.8±10.1）s]及药物干预组[（35.0±8.5）s;F =30.559,P＜0.01].（2）免疫组织化学结果：对照组和生理盐水组大鼠海马p-CREB1阳性细胞数分别为21.07±5.99和24.57±6.97,低于正常组（29.70 ±6.21）及药物干预组（41.50±11.95,F=16.497,P＜0.01）.（3）RT-PCR结果：对照组和生理盐水组大鼠海马CREB1 mRNA吸光度比值分别为0.58±0.47和0.45±0.24,低于正常组（1.03±0.89）及药物干预组（1.10±0.45;F=6.669,P＜0.01）.（4）电镜结果：抑郁症模型大鼠海马神经元和突触超微结构存在病理性改变,药物干预可使其改善.（5） p-CREB1阳性细胞数目与Morris水迷宫、突触形态学参数相关.结论 p-CREB1表达与神经元、突触可塑性有关,文拉法辛可能是通过影响p-CREB1表达和神经元、突触可塑性来发挥治疗作用.