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PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞cNMP的影响 被引量:8
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作者 白文俊 侯树坤 +5 位作者 王晓峰 闫征 何培英 邓庆平 胡小朋 管考鹏 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期88-91,共4页
目的 :观察PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞内cAMP和cGMP的影响 ,为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验依据。 方法 :将PDE5基因反义寡脱氧核苷酸 (含第 1外显子部分序列 )与脂质转染试剂DOTAP共同转染人阴... 目的 :观察PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞内cAMP和cGMP的影响 ,为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验依据。 方法 :将PDE5基因反义寡脱氧核苷酸 (含第 1外显子部分序列 )与脂质转染试剂DOTAP共同转染人阴茎海绵体平滑肌原代细胞 ,以酶联免疫法分别检测转染后不同时间 (1~ 4 8h)海绵体平滑肌细胞内cAMP和cGMP的浓度变化 ,观察反义寡脱氧核苷酸对平滑肌细胞内cNMP的影响。 结果 :转染后 ,反义实验组平滑肌原代细胞内cGMP水平 (1~ 6h)显著高于对照组 (P <0 .0 1)。 结论 :PDE5基因反义寡脱氧核苷酸可以增加人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平 ,本研究有助于了解PDE5基因与cNMP在阴茎勃起中的作用 ,并为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验基础。 展开更多
关键词 反义寡脱氧核苷 细胞转染 海绵体平滑肌细胞 环磷酸核苷酸
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益气活血方调控cAMP/Epac1/Rap1信号改善冠心病气虚血瘀证大鼠的验证 被引量:2
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作者 吴华英 邓凯 +3 位作者 李静 毛一之 李亮 彭清华 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期107-116,共10页
目的:基于环磷酸腺苷(cAMP)/环磷酸腺苷调节鸟嘌呤核苷酸交换因子1(Epac1)/Ras-同源蛋白1(Rap1)信号通路探讨益气活血方对冠心病气虚血瘀证大鼠的心肌保护机制。方法:88只SPF级雄性SD大鼠,按随机数字表分为假手术组(n=12)和实验组(n=76)... 目的:基于环磷酸腺苷(cAMP)/环磷酸腺苷调节鸟嘌呤核苷酸交换因子1(Epac1)/Ras-同源蛋白1(Rap1)信号通路探讨益气活血方对冠心病气虚血瘀证大鼠的心肌保护机制。方法:88只SPF级雄性SD大鼠,按随机数字表分为假手术组(n=12)和实验组(n=76),实验组大鼠采用限制饮食及力竭性游泳复合冠状动脉左前降支(LAD)结扎术构建冠心病气虚血瘀证模型,采集大鼠心电图,将造模成功后的实验组大鼠随机分为模型组、益气活血方低、中、高剂量组(4.28、8.55、17.1 g·kg^(-1))、西药组(单硝酸异山梨酯片,3.6 mg·kg^(-1)),连续给药4周;假手术组及模型组灌胃等体积双蒸水。末次给药后24 h取材,行心脏超声检测左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD),左室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF),腹主动脉采血行血液流变学测定,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆cAMP水平;留取心肌组织进行苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察心肌病理损伤情况,透射电镜观察心肌组织超微结构改变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌Epac1、Rap1GTP酶激活蛋白(Rap1GAP)及Rap1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌Epac1、Rap1GAP及Rap1蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠的LVEDD、LVESD显著增加(P<0.01),EF及FS比率显著下降(P<0.01),表现出心功能减退的“心气虚”症状;全血黏度及血浆黏度显著升高(P<0.01),cAMP含量显著升高(P<0.01),心肌组织胶原纤维显著增生(P<0.01),心肌超微结构受损严重,表现出“血瘀”的病理改变;Real-time PCR结果显示模型组大鼠Epac1及Rap1 mRNA显著降低(P<0.01),Rap1GAP mRNA显著增加(P<0.01);Western blot显示Epac1蛋白表达显著降低(P<0.01),Rap1GAP蛋白表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,益气活血方能改善冠心病气虚血瘀证大鼠心功能、降低血液黏度、降低血浆cAMP含量、减少胶原纤维增生,改善心肌超微结构损伤,以高剂量组作用效果最佳。益气活血方高剂量组能显著增加Epac1 mRNA及蛋白表达(P<0.01),显著增加Rap1 mRNA表达(P<0.01),明显降低Rap1GAP mRNA及Rap1GAP/Rap1蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血方可改善冠心病气虚血瘀证大鼠心功能、降低血液黏度与血浆cAMP含量、改善心肌损伤、减少胶原纤维增生,其心肌保护机制可能与调节cAMP/Epac1/Rap1信号通路有关。 展开更多
关键词 益气活血方 补阳还五汤 冠心病 气虚血瘀证 磷酸腺苷(cAMP)/磷酸腺苷调节鸟嘌呤核苷交换因子1(Epac1)/Ras-同源蛋白1(Rap1)信号通路
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Identification of novel cyclic nucleotide phosphodiesterase gene cDNAs in the brain of guinea pig
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作者 龙跃生 黄敏齐 廖卫平 《Neuroscience Bulletin》 SCIE CAS CSCD 2010年第5期365-370,共6页
Objective Cyclic nucleotide phosphodiesterase(PDE)is a critical component of the nitric oxide(NO)signaling pathway and plays critical roles in cognition and learning,Parkinson’s disease,attention deficit hyperact... Objective Cyclic nucleotide phosphodiesterase(PDE)is a critical component of the nitric oxide(NO)signaling pathway and plays critical roles in cognition and learning,Parkinson’s disease,attention deficit hyperactivity disorder, psychosis and depression.The PDEs in the brain of guinea pig have not yet been reported.The present study aimed to detect the unknown Pde cDNAs in the brain of guinea pig.Methods Reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)and sequence comparison analysis were performed to detect the expression of Pde cDNAs and to assess the identity rates of cDNA and amino acid sequences between guinea pig and human or mouse,respectvely.The RT-PCR primers were located on the conserved region of human PDE and mouse Pde cDNAs.Results Eleven novel Pde cDNAs were detected in the brain of guinea pig(Cavia porcellus),including CpPde1a,CpPde1b,CpPde2a,CpPde4a,CpPde4d,CpPde5a,CpPde6c,CpPde7b, CpPde8a,CpPde9a,and CpPde10a.The identity rates of the Pde cDNA sequences between guinea pig and human ranged from 83.8%to 94.3%,and those of the amino acid sequences ranged from 91.9%to 100%.The identity rates of Pde cDNA sequences between guinea pig and mouse ranged from 84.6%to 92.1%,and those of amino acid sequences ranged from 91.2% to 99.2%.The average identity rate of the 11 Pde cDNA sequences between guinea pig and human was significantly higher(P 0.01)than that between guinea pig and mouse.The putative partial amino acid sequences of guinea pig contained at least one of the conserved domains of human and mouse PDE proteins.Conclusion These results indicate that the brainexpressed Pde genes are identified in guinea pig,which lays the foundation for further investigating the physiological roles of PDE proteins in the brain. 展开更多
关键词 cyclic nucleotide phosphodiesterase the central nervous system nitric oxide guinea pig cross-species comparison
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