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RGS4和D2受体信号通路相关分子在甲基苯丙胺依赖CPP大鼠纹状体的表达变化 被引量:1
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作者 蒙国懿 何繁漪 +4 位作者 隋念含 赵林波 洪仕君 邢豫明 赵永娜 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2017年第12期1377-1381,共5页
目的:研究甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)依赖条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)实验大鼠纹状体G蛋白信号调节因子4(regulator of G-protein signal 4,RGS4)和多巴胺D2受体(dopamine receptor D2)信号通路相关分子... 目的:研究甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)依赖条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)实验大鼠纹状体G蛋白信号调节因子4(regulator of G-protein signal 4,RGS4)和多巴胺D2受体(dopamine receptor D2)信号通路相关分子的表达变化。方法:建立METH依赖CPP大鼠1周组、2周组,应用蛋白质印迹(Western blot)测定各组大鼠纹状体RGS4和D2、抑制性G蛋白α亚基(inhibitory G proteinα-subunit,Gαi)、丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)蛋白表达的变化;应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组大鼠纹状体环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)含量的变化。结果:与生理盐水对照组相比,METH依赖1周组、2周组大鼠在伴药箱的平均停留时间明显延长(P<0.05)。与生理盐水对照组相比,RGS4蛋白在METH依赖1周、2周组的表达均明显下降(P<0.01),且与METH依赖1周组相比,2周组的下降更为明显(P<0.05);与生理盐水对照组相比,D2、Gαi、MAPK蛋白以及cAMP在METH依赖1周、2周组的表达均明显升高(P<0.01),且与METH依赖1周组相比,2周组的升高更为明显(P<0.05)。结论:在METH依赖的CPP大鼠纹状体中,RGS4和D2受体信号传导通路相关分子发生了改变,RGS4可能参与了METH依赖的CPP大鼠纹状体D2受体信号传导通路的调节。 展开更多
关键词 甲基苯丙胺 条件性位置偏爱 g蛋白信号调节因子4 多巴胺D2受体 抑制性g蛋白α亚基 丝裂原激活的蛋白激酶 磷酸
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天麻素调节cAMP/PKA/GRK2信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响 被引量:7
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作者 滑祥廷 洪文明 +1 位作者 张超勇 王斌 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期607-611,共5页
目的探讨天麻素(Gastrodin)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法不同浓度的天麻素(2.5~80.0μmol/L)分别处理U87细胞24、48、72 h,检测细胞增殖确定最佳给药浓度;U87细胞分为对照组(Control组)、天麻素低、中、高浓度组(Gas... 目的探讨天麻素(Gastrodin)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法不同浓度的天麻素(2.5~80.0μmol/L)分别处理U87细胞24、48、72 h,检测细胞增殖确定最佳给药浓度;U87细胞分为对照组(Control组)、天麻素低、中、高浓度组(Gastrodin-L、Gastrodin-M、Gastrodin-H组,天麻素工作浓度分别为5、10、20μmol/L)、天麻素+cAMP/PKA信号通路抑制剂组(Gastrodin+H-89组,20μmol/L的天麻素与10μmol/L的H-89共同处理细胞),分别检测U87细胞增殖、凋亡及cAMP及Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p-PKA、PKA、p-GRK2、GRK2的蛋白表达水平。结果2.5~80.0μmol/L的天麻素均可抑制U87细胞增殖,选择浓度为5、10、20μmol/L的天麻素进行后续实验。与Control组比较,Gastrodin-L、Gastrodin-M、Gastrodin-H组G_(0)/G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率、cAMP、p21、Bax、Caspase-3、p-PKA、p-GRK2蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),S期与G_(2)/M期细胞比例、集落形成数、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),且呈药物浓度依赖性;与Gastrodin-H组比较,Gastrodin+H-89组G_(0)/G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率、cAMP、p21、Bax、Caspase-3、p-PKA、p-GRK2蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),S期与G_(2)/M期细胞比例、集落形成数、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论天麻素可能通过激活cAMP/PKA/GRK2通路抑制脑胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 天麻素 环磷酸腺苷/蛋白激酶a/g蛋白偶联受体激酶2信号通路 胶质瘤 增殖 凋亡
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Nrf2/HO-1、cAMP/PKA在TGR5减轻高糖、高脂诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用机制 被引量:3
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作者 李熠 冯健 《中西医结合心脑血管病杂志》 2021年第21期3667-3673,共7页
目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)、环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)在G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)减轻高糖、高脂诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用机制。方法将大鼠H9C2心肌细胞进行传代培养后分为对照组、高糖+高... 目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)、环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)在G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)减轻高糖、高脂诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用机制。方法将大鼠H9C2心肌细胞进行传代培养后分为对照组、高糖+高脂组、高糖+高脂+齐墩果酸组、干扰组(高糖+高脂+齐墩果酸+TGR5 shRNA)、Nrf2/HO-1组[高糖+高脂+齐墩果酸+Nrf2 siRNA病毒与HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理]、cAMP/PKA组[高糖+高脂+齐墩果酸+SQ22536(cAMP抑制剂)预处理],荧光显微镜观察心肌细胞4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色结果,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组心肌细胞活性,采用活性氧荧光探针检测心肌细胞内活性氧(ROS)水平,应用图像分析法、BCA法分别测定各组心肌细胞表面积、蛋白含量,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组Nrf2、HO-1、PKA水平,以比色法测定肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,高效液相色谱法(HPLC)测定cAMP水平。结果荧光显微镜显示,高糖+高脂组心肌细胞染色强度较对照组增加,而高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组大部分心肌细胞恢复正常,仅少许细胞被染成强蓝色,干扰组染色强度较高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组增加。与对照组比较,高糖+高脂组心肌细胞活性率下降,ROS水平及心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量增加,而高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组心肌细胞活性率高于高糖+高脂组,ROS水平及心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量低于高糖+高脂组,差异均有统计学意义(P<0.01);与高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组比较,干扰组心肌细胞活性率下降,ROS水平及心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量增加,差异均有统计学意义(P<0.01);高糖+高脂组Nrf2、HO-1、PKA、LDH、cAMP水平高于对照组,高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组Nrf2、HO-1、PKA、LDH、cAMP水平均低于高糖+高脂组,干扰组Nrf2、HO-1、PKA、LDH、cAMP水平均高于高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论激活TGR5受体可能对高糖、高脂诱导H9C2心肌细胞损伤有保护作用,其信号转导机制可能与抑制Nrf2/HO-1、cAMP/PKA信号通路有关。 展开更多
关键词 心肌细胞损伤 核因子E2相关因子2 血红素加氧酶-1 磷酸 蛋白激酶A g-蛋白胆汁酸受体1 高糖 高脂 实验研究
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加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺组织TGR5/cAMP/GLP-1信号通路的影响 被引量:11
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作者 柳荣 杨霞 +3 位作者 高艳奎 王佳慧 梁永林 朱向东 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期25-32,共8页
目的:探讨加味葛根芩连汤对肥胖型2型糖尿病(T2DM)模型小鼠血糖血脂及胰腺组织中G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)相关途径的影响。方法:将10只7周龄无特定病原体(SPF)级雄性m/m小鼠及50只7周龄SPF级雄性db/db小鼠在SPF级实验室适应性喂养1周... 目的:探讨加味葛根芩连汤对肥胖型2型糖尿病(T2DM)模型小鼠血糖血脂及胰腺组织中G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)相关途径的影响。方法:将10只7周龄无特定病原体(SPF)级雄性m/m小鼠及50只7周龄SPF级雄性db/db小鼠在SPF级实验室适应性喂养1周。m/m小鼠作为空白组。成模后随机分为5组,每组10只,分别作为模型组、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1))、加味葛根芩连汤高、中、低剂量组(31.9、19.1、6.4 g·kg^(-1)),灌胃体积均为10 mL·kg^(-1),模型组和空白组灌服等体积蒸馏水,1次/d,连续12周。定期检测小鼠空腹血糖(FBG)。药物干预12周后,检测血清中糖化血清蛋白(GSP)、血清葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠胰腺组织病理改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胰腺组织TGR5、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化(p)-PKA、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高糖素样肽-1(GLP-1)蛋白的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测胰腺组织环磷腺苷(cAMP)的含量。结果:与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织出现病理学改变;小鼠FBG、GSP、GLU、TC、TG、LDL-C水平显著增高(P<0.01),HDL-C水平明显降低(P<0.05);胰腺组织中TGR5、p-PKA(Thr197)/PKA、p-CREB(Ser133)/CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达水平显著降低(P<0.01);胰腺组织中cAMP的含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,治疗组胰腺组织病变程度减轻;加味葛根芩连汤高剂量组及二甲双胍组均能够明显降低db/db小鼠FBG、GSP、GLU、TC、TG、LDL-C水平(P<0.05,P<0.01),显著增高db/db小鼠HDL-C水平(P<0.01);除加味葛根芩连汤中剂量组GLP-1蛋白外,加味葛根芩连汤高、中剂量组及二甲双胍组TGR5、p-PKA(Thr197)/PKA、p-CREB(Ser133)/CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达水平均有不同程度的增加(P<0.05,P<0.01);加味葛根芩连汤高、中剂量组及二甲双胍组胰腺组织中cAMP的含量明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论:加味葛根芩连汤能够改善T2DM模型db/db小鼠的葡萄糖稳态,其机制可能与调控TGR5/cAMP/GLP-1信号通路相关蛋白表达有关。 展开更多
关键词 2型糖尿病 加味葛根芩连汤 胆汁酸 g蛋白胆汁酸受体5(TgR5)/(cAMP)/胰高糖素样肽-1(gLP-1)信号通路
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心肌纤维化模型大鼠心肌组织中GRK2的表达以及对胶原合成的影响
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作者 阚丽丽 蒋方国 安丰双 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2013年第9期22-25,30,共5页
目的探讨G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)在心肌纤维化发生过程中的作用。方法皮下注射异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化,采用HE染色观察模型大鼠心肌组织学变化,差速贴壁法分离培养心肌成纤维细胞,检测成纤维细胞中GRK2的表达和胶原Iα含量,采... 目的探讨G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)在心肌纤维化发生过程中的作用。方法皮下注射异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化,采用HE染色观察模型大鼠心肌组织学变化,差速贴壁法分离培养心肌成纤维细胞,检测成纤维细胞中GRK2的表达和胶原Iα含量,采用siRNA干涉法抑制GRK2表达,采用cAMP检测试剂盒检测细胞内cAMP含量。结果 HE染色显示大鼠心肌纤维化模型心肌细胞出现坏死、肥大、淋巴细胞浸润等变化。Western blotting结果显示,异丙肾上腺素诱导模型大鼠心肌成纤维细胞中GRK2表达增加(P<0.05),胶原Iα表达增加(P<0.01)。GRK2特异性siRNA可以显著抑制GRK2的表达(P<0.05)。cAMP含量分析显示,异丙肾上腺素诱导心肌纤维化模型大鼠中心肌组织cAMP含量明显下降(P<0.01),在siRNA抑制GRK2表达后,心肌组织中cAMP水平显著升高(P<0.05)。结论采用siRNA法抑制GRK2表达可以增加细胞内cAMP的含量。GRK2有望成为心肌纤维化防治靶点。 展开更多
关键词 心肌纤维化 g蛋白受体激酶2 磷酸
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