miR-182靶向作用环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1调控人黑素瘤A375细胞的增殖和侵袭

目的探讨miR-182对人皮肤黑素瘤细胞系A375细胞的增殖与侵袭能力的影响,及miR-182影响黑色素细胞增殖的机制。方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-182模拟物或抑制剂转染人黑素瘤A375细胞,以使miR-182过表达或低表达,采用MTT方法检测细胞活力变化,应用Transwell小室法检测A375细胞侵袭能力的变化,同时通过Real-time PCR检测核转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)mRNA的表达情况,采用Western blotting检测CREB1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,miR-182沉默能够显著增强A375细胞增殖和侵袭能力,P<0.01,显著降低CREB1蛋白与mRNA的表达水平,P<0.01;miR-182过表达的作用与之相反。结论 miR-182沉默增强A375细胞增殖和侵袭能力可能与降低CREB1蛋白相关。

冠心病患者血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨冠心病患者血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3(CRTC3)及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化的相关性。方法选取2021年6月—2023年6月本院收治的154例冠心病患者为研究组,根据颈动脉粥样硬化程度分为轻度硬化组、中度硬化组和重度硬化组;另选取154例同期健康体检者为对照组。采用Pearson法分析血清CRTC3及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化指标的相关性。结果研究组血清CRTC3、丙二醛(MDA)、颈动脉斑块面积和中层内膜厚度(IMT)高于或大于对照组,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度硬化组、中度硬化组和重度硬化组血清CRTC3、MDA、颈动脉斑块面积和IMT依次升高或增大,SOD、GSH-Px水平依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清CRTC3、MDA水平与颈动脉斑块面积、IMT呈正相关(P<0.05),SOD、GSH-Px与颈动脉斑块面积、IMT呈负相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,CRTC3、SOD、MDA和GSH-Px联合诊断重度颈动脉粥样硬化的曲线下面积(AUC)为0.990(95%CI:0.982~0.998),灵敏度为96.27%,特异度为76.28%。4项指标联合诊断的价值高于各指标单独诊断,差异有统计学意义(Z_(联合-CRTC3)=2.723,Z_(联合-SOD)=2.698,Z_(联合-MDA)=2.673,Z_(联合-GSH-Px)=2.803,P均<0.05)。结论冠心病患者血清CRTC3、MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px水平显著降低;血清CRTC3、氧化应激水平均与颈动脉粥样硬化密切相关。

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调控耐药性癫痫大鼠海马内脑源性神经营养因子的表达

背景:耐药性癫痫的形成机制尚不清楚,其中环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB)及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在耐药性癫痫形成过程中的作用已被广泛研究。目的:使用慢病毒转染法调控正常大鼠海马CREB表达水平,探究其对耐药性癫痫形成过程及海马内BDNF表达的影响。方法:使用过表达慢病毒或干扰慢病毒调控大鼠海马中CREB表达水平,检测病毒转染结果;大鼠注射病毒7 d后构建氯化锂-匹罗卡品癫痫模型,随后使用苯妥英钠和苯巴比妥进行耐药性筛选,筛选出耐药性癫痫大鼠,分为过表达组、过表达对照组、干扰组、干扰对照组,观察筛药过程中大鼠癫痫发作次数变化,使用蛋白质免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测大鼠海马中CREB及BDNF表达水平。结果与结论:①病毒转染后14 d,大鼠海马区满布绿色荧光,病毒转染水平较好;②药筛前过表达组大鼠癫痫发作次数多于过表达对照组,干扰组大鼠癫痫发作次数少于干扰对照组;药筛后过表达组大鼠癫痫发作次数多于过表达对照组,干扰组大鼠癫痫发作次数少于干扰对照组;③过表达组大鼠CREB、BDNF表达水平高于过表达对照组,同样干扰组大鼠CREB、BDNF水平低于干扰对照组;④结果表明,调控大鼠海马内CREB表达水平会影响大鼠癫痫发作及耐药性癫痫的形成,通过调控CREB表达可能会对耐药性颞叶癫痫大鼠海马内BDNF表达水平产生影响。

奥氮平介导环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B通路对精神分裂模型大鼠的神经修复作用

目的 探讨奥氮平通过对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响对精神分裂模型大鼠的神经修复作用。方法 将60只大鼠纳入对照组、模型组、奥氮平低、中、高剂量组,各组均10只。模型组、奥氮平低、中、高剂量组大鼠进行MK-801腹腔注射0.2 mg/(kg·d),对照组注射等量生理盐水。模型建立成功24 h后,奥氮平低、中、高剂量组分别以0.5、1.0、1.5 mg/(kg·d)奥氮平溶液灌胃,对照组、模型组同剂量生理盐水灌胃。按照共济失调和刻板行为标准对大鼠行为学进行评分;Morris水迷宫实验评定大鼠认知功能及学习能力;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;观察海马组织病理学变化;检测海马区细胞凋亡及CREB/BDNF/TrkB通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠共济失调、刻板行为评分、TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠跨越平台次数、目标象限停留时间、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、磷酸化TrkB(p-TrkB)、TrkB、BDNF蛋白相对表达极显著减少(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著减少(P<0.05)。与模型组比较,奥氮平低、中剂量组跨越平台次数、目标象限停留时间显著增加(P<0.05),奥氮平高剂量组极显著增加(P<0.01)。模型组以及奥氮平低剂量组中海马细胞肿大明显、细胞核破碎分裂、固缩,组织排列杂乱;奥氮平中、高剂量组大鼠海马细胞中少见破碎分裂以及核固缩现象,整体组织与对照组大鼠相似。结论 奥氮平对精神分裂症模型大鼠的神经修复作用机制涉及到改善大鼠认知功能受损、保护大鼠海马神经细胞以及激活CREB/BDNF/TrkB信号通路的表达。

电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力和海马CA1区环磷酸腺苷效应元件结合蛋白及其磷酸化水平的影响

目的探讨电针神庭、百会治疗脑卒中后认知功能障碍的机制。方法 45只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组15只。后两组线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型。电针组于造模后24 h开始电针神庭和百会,共7 d。每天电针后行Morris水迷宫测试。治疗后,取大鼠脑组织TTC染色测量脑梗死体积,免疫组化检测海马CA1区环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化水平(p-CREB)的表达。结果从第4天开始,与模型组相比,电针组大鼠逃避潜伏期及游泳路程缩短(P<0.05);穿越平台次数增多(P<0.05)。电针组大鼠脑梗死体积小于模型组(P<0.05);海马CA1区CREB、p-CREB表达量较模型组增加(P<0.05)。结论电针神庭、百会后,脑缺血再灌注大鼠海马CA1区CREB、p-CREB表达量增加,从而保护神经元,改善学习记忆功能。

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调控转化生长因子β1对人根尖牙乳头干细胞分化的作用

目的观察过表达第二信使环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-responsive element-binding protein,CREB)调控转化生长因子β1(transforming growth factor-beta,TGF-β1)对人根尖牙乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)分化的作用。方法通过采用酶消化法培养hSCAPs,实验分成4组:(1)Control组,即正常矿化诱导液(α-MEM、10%FBS、10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml维生素C、10 nmol/L地塞米松);(2)TGF-β1组,加入正常矿化诱导液后,加入5μg/m L TGF-β1;(3)TGF-β1+LV-empty组,除正常矿化诱导液外,加入转染空病毒载体和TGF-β1,TGF-β1浓度为5μg/m L;(4)TGF-β1+ov-CREB组,除正常矿化诱导液外,加入转染过表达CREB病毒载体和TGF-β1,TGF-β1浓度为5μg/m L。矿化培养2周后,通过茜素红染色观察各组矿化结节形成情况,实时荧光定量PCR法检测各组矿化相关基因,Runt相关基因2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)m RNA的表达。结果 TGF-β1作用SCAPs后,与Control组(1.12±0.11)相比,抑制矿化结节的形成(0.67±0.12)(P<0.05);下调矿化基因RUNX2(0.60±0.03)、DSPP(0.43±0.12)、ALP(0.69±0.05)的m RNA表达(P<0.05)。过表达CREB后逆转TGF-β1对SCAPs分化的抑制作用,与TGF-β1组相比,促进矿化结节的形成(1.27±0.10)(P<0.01)并上调RUNX2(1.33±0.07)、DSPP(1.32±0.11)和ALP(1.26±0.03)m RNA的表达(P<0.05)。结论过表达转录因子CREB能够逆转TGF-β1对hSCAPs分化的抑制作用,促进其分化。

调肝解毒方对慢性癫痫大鼠学习记忆及海马组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的观察调肝解毒方对慢性癫痫大鼠学习记忆与海马组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法60只大鼠腹腔注射印防己毒素制作慢性癫痫模型后,随机分为模型组,调肝解毒方低剂量组、调肝解毒方高剂量组,丙戊酸钠组,每组15只,与正常组(15只)同期观察或治疗60天,以Morris水迷宫观察大鼠空间学习和记忆能力,应用RT-PCR方法检测大鼠海马组织CREBmRNA表达变化,免疫组织化学方法检测海马组织磷酸化的CREB水平变化。结果调肝解毒方低、高剂量组大鼠空间记忆能力高于模型组(P<0.01),海马组织CREBmRNA相对吸光度值增高,pCREB免疫阳性细胞的表达有不同程度增强,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论调肝解毒方可在一定程度上改善反复癫痫大鼠的学习记忆能力,可能与调节海马CREB表达有关。

转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在紫杉醇诱导HeLa细胞周期阻滞中的作用及其机制

目的探讨转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在紫杉醇诱导宫颈腺癌HeLa细胞周期阻滞中的作用及其分子机制。方法 MTT法确定紫杉醇的最佳浓度和处理时间;PCR技术构建pCI neo/CREB(PN)重组质粒及pCI neo/CREB-M(PM)定点突变质粒;流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测磷酸化CREB(pCREB)、CREB、cyclins以及CDKs蛋白表达。结果紫杉醇抑制HeLa细胞增殖的有效条件为0.1μmol/L处理24 h。0.1μmol/L紫杉醇诱导G2/M细胞数量增加,并呈时间依赖性;cyclin A表达量下调,cyclin B1、D1和pCREB表达量上调。此外,紫杉醇的处理对cyclin E、CDK1、CDK2、CDK4和CREB表达量并无显著性改变。然而,PM联合紫杉醇处理后显著性地反转了紫杉醇单独处理引起的cyclin A下调、cyclin B1和cyclin D1的上调,并且细胞周期G2/M期阻滞显著性减少。结论转录因子CREB介导的靶向细胞周期蛋白表达在紫杉醇诱导的细胞周期阻滞过程中扮演重要角色。

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病中表达的意义

目的探讨环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及意义。方法1.实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ALL患儿骨髓单个核细胞CREB的mRNA表达量,以非白血病(NL)患儿10例作对照,对9例ALL患儿进行动态测定。2.ELISA法测定ALL患儿骨髓单个核细胞CREB总蛋白和蛋白磷酸化水平表达。结果1.高危组(HR)CREB的mRNA表达量明显高于NL组、低危组(LR)、中危组(MR),分别为8.49±12.24、1.13±0.81、1.47±1.02、1.24±0.60,Pa<0.05;而其他各组无明显差异。2.HR组CREB总蛋白量(ng/106个细胞)明显高于LR、MR组,分别为0.99±0.43、4.40±4.60,Pa<0.05;HR组CREB蛋白磷酸化的量(U/106个细胞)明显高于LR、MR组,分别为1.95±1.82、8.67±8.19,Pa<0.05。3.MICM分型与CREB高表达相结合,HR-ALL患儿的诊断符合率可达85.0%。4.CREB的mRNA表达量升高提示ALL未缓解或复发。结论CREB在儿童HR-ALL中呈高表达。CREB的表达量及其动态监测对ALL患儿的临床分型和疗效判断有一定的意义。

神经生长因子与降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western印迹法和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组手术侧顶叶皮质CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组;NGF组和CGRP组顶叶皮质CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组;NGF组和CGRP联合应用时CREB与p-CREB的表达更高。结论:NGF与CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,NGF和CGRP有协同作用。

芍药苷调控环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路对脑卒中大鼠的影响

目的探讨芍药苷调控环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路对脑卒中大鼠的影响。方法该研究起止时间为2019年12月至2020年12月。40只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、芍药苷组(灌胃30 mg/kg芍药苷)、H89组[腹腔注射1 mg/kg H89(PKA抑制剂)]、芍药苷+H89组(灌胃芍药苷后腹腔注射H89),除假手术组仅进行动脉分离,其余各组均构建缺血性脑卒中模型,模型构建成功后进行药物干预,持续给药2周,模型组、假手术组以生理盐水代替。根据Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能缺损评分,Morris水迷宫测定大鼠记忆行为学能力,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测大鼠血清炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化,蛋白质印迹法检测大鼠脑组织cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组脑组织受损严重,大鼠神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著升高(P<0.05),记忆行为学能力、脑组织中cAMP[(0.31±0.05)比(1.03±0.23)]、PKA[(0.30±0.06)比(1.05±0.24)]、磷酸化CREB[(0.29±0.08)比(1.02±0.23)]蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,芍药苷组脑组织受损得到缓解,神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著降低(P<0.05),记忆行为学能力、脑组织中cAMP[(0.79±0.20)比(0.31±0.05)]、PKA[(0.75±0.19)比(0.30±0.06)]、磷酸化CREB[(0.77±0.23)比(0.29±0.08)]蛋白表达显著升高(P<0.05);与芍药苷组相比,芍药苷+H89组大鼠脑组织受损加重,神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著升高(P<0.05),记忆行为学能力、脑组织中cAMP[(0.60±0.13)比(0.79±0.20)]、PKA[(0.53±0.12)比(0.75±0.19)]、磷酸化CREB[(0.55±0.14)比(0.77±0.23)]蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论芍药苷可保护脑卒中大鼠的神经功能,可能是通过激活cAMP/PKA/CREB通路实现的。

镧对大鼠海马CA1区环磷酸腺苷应答元件结合蛋白磷酸化的影响

目的探讨镧的神经毒性作用机制。方法 40只Wistar孕大鼠通过自由饮水的方式随机分为正常对照组,LaCl30.25%,0.5%和1.0%染毒组。染毒组仔鼠在断乳前通过母乳染毒,断乳后通过自由饮水的方式染毒1个月。电感耦合等离子体质谱法检测海马CA1区镧含量;磷酸二酯酶法检测海马CA1区钙调蛋白(CaM)活性;Western印迹法检测磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(p-CaMKⅣ),磷酸化环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(p-CREB)和c-jun蛋白表达;RT-PCR法检测c-jun mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,LaCl30.25%,0.5%和1.0%染毒组海马CA1区镧含量显著高于正常对照组,分别为正常对照组的7.3,12.0和20.0倍(P<0.05);海马CA1区CaM活性显著降低,分别为正常对照组的80.7%,59.9%和30.6%(P<0.05);海马CA1区p-CaMKⅣ表达降低,分别为正常对照组的83.0%,57.4%和27.7%(P<0.05),p-CREB表达显著降低,分别降低了24.4%,36.6%和73.2%(P<0.05),c-jun蛋白表达显著降低,分别降低了36.1%,45.9%和83.6%(P<0.05),c-jun mRNA表达显著降低,分别降低了14.8%,27.2%和76.5%(P<0.05)。结论镧可能与钙竞争结合于CaM,造成海马CA1区CaM活性和CaMKⅣ,CREB磷酸化以及c-jun基因转录和蛋白表达水平下降,从而损害大鼠的学习记忆能力。

脑源性神经营养因子经由环磷酸腺苷反应元件结合蛋白磷酸化对缺氧大鼠胚脑皮质神经元细胞的保护作用

转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（Cyclic AMP response element-binding protein，CREB）是胚脑皮质神经元细胞内脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）诱导基因表达的重要调节因子。我们前期的研究表明BDNF对缺氧性神经元损伤具有保护作用，为了阐明BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用是否经过了核蛋白CREB的磷酸化，本研究采用蛋白质免疫印迹法检测单纯缺氧组和BDNF干预组胚脑皮质神经元细胞内CREB及Ser^133磷酸化CREB在不同时间点表达水平的变化。结果显示缺氧及BDNF均能刺激胚脑皮质神经元细胞内Ser^133磷酸化CREB表达增加，在不同缺氧时间点BDNF干预组Ser^133磷酸化CREB表达水平较单纯缺氧组明显增强（P〈0．01），BDNF干预组1h后Ser^133磷酸化CREB表达至高峰，以后持续表达维持6h以上，维持时间较单纯缺氧组明显延长；在缺氧0～3h，BDNF干预组细胞内总CREB表达水平与单纯缺氧组基本一致；随着缺氧时间的延长，单纯缺氧组细胞内CREB表达明显减少，以第5～6h最明显。结果表明，BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用经过了核蛋白CREB的磷酸化。

神经生长因子及降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑环磷酸腺苷反应元件结合蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)及降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达的影响。方法:用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA的表达。结果:缺血再灌注组右侧海马CA1区和顶叶皮质神经元CREB mRNA表达比假手术组减少,NGF组及CGRP组的CREB mRNA表达均高于缺血再灌注组,NGF与CGRP联合应用时CREB mRNA的表达分别高于NGF组和CGRP组。结论:NGF及CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质CREB mRNA的表达,NGF与CGRP联合应用则作用更强,NGF和CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过激活CREB基因转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现。

滋肾益脑方对肾阴虚抑郁模型大鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的：探讨中药复方滋肾益脑方对抑郁大鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-CREB）表达的影响。方法：制备肾阴虚抑郁动物模型后，随机分为空白组，模型组，氟西汀组，滋肾益脑方中、高剂量组，采用免疫组织化学检测p-CREB表达。结果：与空白组比较，抑郁模型大鼠海马内p-CREB表达降低；药物组中以滋肾益脑方高剂量组海马内pCREB表达方面最明显。结论：滋肾益脑方具有抗抑郁、保护神经元的作用。

辣椒素对大鼠脊髓背角中磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

目的观察辣椒素对大鼠脊髓背角中磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响,探讨延髓外侧网状核(LRN)对心脏伤害性感受的下行紧张性调控作用。方法将30只雄性Sprauge Dawley大鼠随机分为空白组、溶媒组、辣椒素组、LRN电损毁组和LRN电损毁+辣椒素组,每组6只。空白组大鼠麻醉后不做手术处理,其余各组大鼠均行心包内插管术,LRN电损毁组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠于心包内插管术后行双侧LRN电损毁。各组大鼠心包插管1 h后,回抽心包积液,溶媒组大鼠心包内注射0.2 mL溶媒(含有0.1 mL的吐温80和0.1 mL无水乙醇),辣椒素组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠心包内注射0.2 mL辣椒素(0.01 g·L-1),LRN电损毁组大鼠心包内不注射任何溶液。心包内注射药物的同时,记录大鼠背斜方肌超出基线活动10%的肌电(EMG)反应数目,空白组于维持麻醉1 h后记录EMG反应数目。各组大鼠经心包内注射药物30 min后,灌注固定液并取T3~T5脊髓,采用免疫组织化学染色法检测各组大鼠脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目。结果空白组、溶媒组、LRN电损毁组大鼠背斜方肌无超出基线活动10%的EMG反应。辣椒素组和LRN电损毁+辣椒素组大鼠背斜方肌EMG反应数目和脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目均显著高于空白组、溶媒组和LRN电损毁组(P<0.05)。LRN电损毁+辣椒素组大鼠背斜方肌EMG反应数目和脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目均显著高于辣椒素组(P<0.05)。结论大鼠心包内注射辣椒素能诱发背斜方肌EMG反应且脊髓背角中pCREB免疫阳性细胞数目增加。LRN对大鼠心脏伤害性感受具有下行紧张性抑制作用。

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白与阿尔茨海默病

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)是一种细胞核内转录因子,调节启动子中具有环磷酸腺苷反应元件的基因转录。在中枢神经系统,CREB具调节神经元生长发育功能并参与神经元突触可塑性、学习记忆的形成过程。CREB在阿尔茨海默病(AD)的病理生理发展过程中起重要作用,其信号通路可能成为治疗AD的一个靶目标。

丙泊酚通过组蛋白脱乙酰酶2/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体信号通路对子代大鼠学习和记忆功能的影响

目的探讨孕早期母体丙泊酚暴露对子代大鼠学习和记忆功能的影响。方法选取孕5-7 d的SD大鼠40只,采用随机数字表法将其分为A、B、C、D组,每组各10只。A组为对照组,B、C和D组妊娠大鼠分别注射0.25%、0.5%和0.75%的丙泊酚。子代大鼠出生后,根据是否给予组蛋白脱乙酰酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)抑制剂将其分为CS组(A组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.25S组(B组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.5S组(C组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.75S组(D组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、CN组(A组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)、I0.25N组(B组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)、I0.5N组(C组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)和I0.75N组(D组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂),每组各10只。比较各组子代大鼠Morris水迷宫实验结果、海马HDAC2、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)、N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体(N-methyl-D-aspartate receptor 2B subunits,NR2B)mRNA及NR2B蛋白表达水平。结果第1-4天I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组子代大鼠的逃避潜伏期均显著长于CN组(均P<0.05),I0.75S组大鼠平台穿越次数显著少于CS组(P<0.05),I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠目标象限停留时间分别显著长于I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05)。当丙泊酚的暴露剂量增加,细胞出现线粒体空泡和高尔基体肿胀,HDAC2抑制剂可减轻丙泊酚暴露引起的子代海马功能障碍。I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组子代大鼠海马HDAC2 mRNA表达水平均显著低于CN组(均P<0.05),CS组、I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠海马HDAC2 mRNA水平分别显著低于CN组、I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05);CS组、I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠海马CREB mRNA水平分别显著高于CN组、I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05);I0.25S组、I0.5S组和I0.75S组子代大鼠海马NR2B mRNA和NR2B蛋白表达水平分别显著高于I0.25N组、I0.5N组和I0.75N组(均P<0.05)。结论孕早期母体丙泊酚暴露损害子代大鼠学习和记忆功能,机制与其调节子代大鼠海马HDAC2/CREB/NR2B蛋白表达有关。

磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白对持续惊厥后海马细胞凋亡调控基因表达的影响

目的观察外源性磷酸环磷腺苷反应元件结合蛋白(p CREB)抗体对惊厥持续状态(SC)后海马细胞凋亡调控基因Bcl-2和c-Jun表达的影响,探讨p CREB在惊厥性脑损伤中的作用及其调控机制。方法成年Wistar鼠48只随机分为正常对照组(NC组,n=24)和惊厥持续状态组(SC组,n=24)。SC组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱发SC模型。两组均根据脑室注射内容分为无注射组、生理盐水注射组(NS组)和抗p CREB注射组(抗p CREB组)3个亚组,每个亚组8只。注射后6 h处死动物。取双侧海马采用免疫组化和原位杂交(ISH)观察Bcl-2蛋白/m RNA、c-Jun蛋白/m RNA的分布,并进行半定量分析。结果 NC组中,3个亚组注射侧Bcl-2蛋白/m RNA表达均无显著性差异(P>0.05),SC组中抗p CREB组低于无注射组和NS组(P<0.05)。NC组和SC组中,3个亚组注射侧c-Jun蛋白/m RNA表达均有非常高度显著性差异(P<0.001),NS组和抗p CREB组c-Jun蛋白/m RNA表达高于无注射组(P<0.05),抗p CREB组高于NS组(P<0.05)。结论 SC后脑室内注射外源性抗p CREB抗体可下调SC后海马Bcl-2蛋白/m RNA表达,上调c-Jun蛋白/m RNA表达。