环纹奥斯特线虫低温冷冻保存研究初报

环纹奥斯特线虫低温冷冻保存研究初报苏进才，张承芸，郝社平，高鹏程，窦兰清，付宝权，柴忠威，朱兴全（甘肃省景泰县畜牧兽医站７３０４００）（中国农业科学院兰州兽医研究所）环纹奥斯特线虫（Ｏｓｔｅｒｔａｇｉａｃｉｒｃｕｍｃｉｎｃｔａ）是一种常见的寄生于羊消...

环纹奥斯特线虫PCR-ELISA快速检测方法的建立

【目的】建立高效、快速、灵敏、特异、准确的环纹奥斯特线虫检测方法。【方法】根据GenBank已发表的奥斯特线虫ITS-2的基因序列,对该上下游引物的5′端分别标记地高辛和生物素,按照PCR-ELISA的操作步骤对所用链霉亲和素的包被浓度、BSA封闭液的封闭浓度、PCR产物的作用时间、酶标二抗的工作稀释浓度以及作用时间、显色时间等进行优化,进而确定反应的最佳条件;以环纹奥斯特线虫、东方毛圆线虫、捻转血矛线虫、羊仰口线虫、甘肃食道口线虫的DNA为模板,在最佳反应条件下进行PCR-ELISA检测其特异性;批内和批间重复性试验检测其稳定性。【结果】建立的环纹奥斯特线虫PCR-ELISA快速检测方法的敏感性比常规PCR高10倍,和其他线虫无交叉反应,特异性强,变异系数小于10%,稳定性好。【结论】建立的高效、快速、特异、安全的Ostertagia circumcincta间隔区ITS-2检测方法,可以为进一步研制用于Ostertagia circumcincta的流行病学调查、诊断试剂提供技术支撑。

羊体的三种线虫在不同温湿度条件下从卵到侵袭性幼虫发育能力的观察

对寄生于羊的捻转血矛线虫、粗纹食道口线虫、环纹奥斯特线虫在不同恒温和恒湿条件下从卵发育到侵袭性幼虫的育成率和所需时间作了观察，温度有４０、３７．５、３５、３０、２５、２０、１５、１０、７．５和５℃等１０个段，相对湿度有１００、９０、８５、８０、７５％等５个相。结果捻转血矛线虫仅在１０～３５℃温度和８０％以上相对湿度条件下能完成发育，１００％相对湿度和２０℃条件下育成率最高；粗纹食道口线虫和环纹奥斯特线虫在７．５～３７．５℃和相对湿度８０％以上能完成发育，也是在１００％湿度和２０℃条件下育成率最高。试验结果可供研究这些寄生虫的地理分布和制定其防治措施时作依据。