基于HPLC-QTOF-MS的环缩肽类rakicidins质谱裂解规律初探

目的和方法采用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(HPLC-QTOF-MS)联用技术,建立了色谱分离、质谱检测的方法,对rakicidin同系物进行碰撞解离研究,推测其质谱裂解规律。结果获得rakicidins在正离子模式下的质谱裂解规律。结论该质谱裂解规律可应用于rakicidin及其同系物的快速结构解析、定量分析和药动学研究,以及应用于高通量、快速、高效筛选微生物来源的rakicidin类似物。

环缩肽类rakicidins的研究进展

环缩肽类rakicidins于1995年被首次发现具有抗肿瘤活性至今,已被陆续发现在乏氧条件下对肿瘤细胞具有更强的选择抑制活性、抗肿瘤干细胞活性及抗厌氧菌活性等,具有进一步研究的价值。本文对rakicidins的发现、菌源、结构特征、活性、化学合成、生物合成、作用机制、构效关系等报道内容进行综述,分析研究方向,以期为后续研究者提供一些帮助。

环缩酚肽抑制小鼠血管增殖性视网膜病变的研究

【目的】观察两种环缩酚肽的衍生物(Hep-A)和(Hep-B)对氧诱导的血管增殖性视网膜病变的抑制作用。【方法】将鼠龄为7d(P7)的C57BL/6幼鼠置于体积分数75%的氧气箱中连续生活5d,建立氧诱导的血管增殖性视网膜病变模型。在12d(P12)幼鼠回到正常大气环境中,同时开始给小鼠皮下注安慰剂(第1组,n=23)、Hep-A10mg/kg(第2组,n=22)、或者Hep-B10mg/kg(第3组,n=22),每天两次,持续5d。在17d(P17)取鼠眼进行冰冻切片和GSA(griffoniasimplicifolialectinB4)染色,或作荧光素灌注和视网膜平铺片,用图象分析软件定量计算视网膜无灌注区和新生血管的面积。【结果】病理检测视网膜新生血管面积:第一组为(0.51±0.08)mm2/鼠(n=7);第2组为(0.11±0.01)mm2/鼠(n=8);第3组为(0.16±0.02)mm2/鼠(n=8)。视网膜平片检测视网膜新生血管面积:第1组为(1.36土0.02)mm2/眼(n=32),第2组为(0.19±0.01)mm2/眼(n=28),第3组为(0.07±0.01)mm2/眼(n=28);视网膜平片检测视网膜无灌注区面积:第1组为(2.33±0.08)mm2/眼,第2组为(1.08±0.09)mm2/眼,第3组为(1.22±0.11)mm2/眼。经ANOVA分析,第2组和第3组分别与第1组比较,视网膜新生血管的面积和视网膜无灌注区的面积,均明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】两种环缩酚肽衍生物均能强效?

环缩酚肽抑制视网膜表达VEGF及PECAM基因和血管增生

【目的】观察两种环缩酚肽衍生物(Hep-A和Hep-B)对氧诱导的小鼠视网膜表达血管内皮生长因子(VEGF)和细胞黏附分子(PECAM；ICAM-1；VCAM-1)基因的影响及血管增生的变化。【方法】建立氧诱导的血管增殖性视网膜病变模型，12d开始给小鼠皮下注安慰剂(第1组，n=7)、Hep-A 10 mg／kg(第2组，n=6)或者Hep-B 10 mg／kg(第3组，n=6)，每天两次。5d后取出左侧眼，分离视网膜并抽提RNA，用荧光定量PCR测出上述基因含量，并分别求出每个靶基因与标准基因S16含量的比率；右眼经心脏荧光素灌注后取眼球做视网膜平铺片，用图像分析软件定量计算视网膜新生血管的面积。【结果】视网膜中VEGF／S16的mRNA比率为：第1组(0.554±0.050)，第2组(0.355±0.037)，第3组(0.287±0.051)；PECAM／S16为：第1组(2.050±0.249)，第2组(1.228±0.153)，第3组(1.027±0.210)。经ANOVA分析，第2组和第3组分别与第1组比较，视网膜中VEGF基因表达分别减少36％和48.2％(P=0.001)；PECAM基因表达分别减少40.1％(P＜0.05)和49.9％(P＜0.01)；而VCAM-1和ICAM-1表达无明显差异。视网膜平片检测视网膜新生血管面积：第1组为(1.06±0.03)mm^2／眼，第2组为(0.17±0.01)mm^2／眼，第3组为(0.11±0.01)mm^2／眼；经ANOVA分析，第2组和第3组分别与第1组比较，视网膜新生血管的面积明显减少(P＜0.001)。【结论】两种环缩酚肽衍生物均抑制氧诱导的小鼠视网膜表达VEGF和PECAM基因，并抑制其形成视网膜新生血管。

环六缩酚肽化合物体外抑制人肺癌细胞增殖活性及其机制的研究

目的检测3种环六缩酚肽化合物对人肺部肿瘤细胞增殖活性的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法腐败菌素B,pseudodestruxin C和pullularin C在3种浓度100,10和1μmol/L分别作用于人非小细胞肺癌细胞(A549和QC-56)和人小细胞肺癌细胞(PC-6和QG-90),MTT比色法检测细胞存活率,计算IC_(50)。腐败菌素B,pseudodestruxin C和pullularin C在浓度1μmoL/L时作用于A549细胞24h,双荧光素酶报告基因检测系统检测p53报告基因(pG53-Luc)、bax报告基因(pGBax-Luc)、核因子-kB报告基因(Igk-Luc)和激活T细胞核因子报告基因(NFAT-Lue)的表达。结果 pullularin C对4种实验用人肺癌细胞均显示极强的抑制作用,强于阳性对照药物顺铂;而结构相似的化合物腐败菌素B和pseudodestruxin C对实验用人肺部肿瘤细胞的增殖不显示抑制活性。结论环六缩酚肽化合物pullularin C对人肺癌细胞的增殖具有较强的抑制活性,并且1μmol/L.pullularinC可明显诱导A549细胞内p-53和bax基因转录的表达,推测pullularin C对人肺肿瘤细胞增殖的抑制作用可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。

环六缩酚肽抑制人前列腺癌细胞增殖活性及作用机制研究

目的研究从微生物次生代谢产物中纯化的3种环六缩酚肽对人前列腺癌细胞(PC-3)增殖的抑制作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法 MTT比色法检测细胞增殖抑制率;TUNEL技术检测PC-3细胞凋亡;Western印迹技术检测Bax和caspase-3蛋白的表达变化。结果 MTT法实验结果显示10μmol·L-1浓度的Pullularin C对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);TUNEL检测结果显示1μmol·L-1浓度的PullularinC处理组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组(P<0.01);Western blot分析结果显示由Pullularin C处理的PC-3细胞中的Bax和caspase-3的表达与对照组相比有明显的增加(P<0.05)。结论 Pullularin C具有极强的抑制人前列腺癌细胞增殖作用,并可诱导其凋亡。Pullularin C诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bax和caspase-3介导。

环六缩酚肽抑制人前列腺癌细胞增殖活性及作用机制

目的:分析环六缩酚肽对人前列腺癌细胞(PC-3)的增殖活性作用,并对其作用机制进行研究。方法:设置空白对照组(加入0.1%二甲基亚砜)、阳性对照组(加入奥沙利铂)和环六缩酚肽组(加入环六缩酚肽)3组,利用噻唑蓝(MTT)法测定各组人PC-3细胞的增殖率,利用TUNEL法测定各组人PC-3细胞的凋亡率,利用Western blot法测定各组人PC-3细胞Caspase-3、bcl-2及bax蛋白表达的调控情况。结果:培养24h和48h后,阳性对照组和环六缩酚肽组人PC-3细胞增殖率为(35.8±2.78)%、(44.8±3.00)%和(32.3±1.96)%、(38.1±2.12)%,人PC-3细胞凋亡率为(45.2±3.60)%、(48.2±3.71)%和(48.3±3.07)%、(50.1±4.15)%,与空白对照组的(100.0±2.16)%、(100.0±2.61)%和(6.0±0.95)%、(6.3±1.05)%对比具有统计学差异(P<0.05);阳性对照组和环六缩酚肽组前列腺癌细胞中bax和Caspase-3蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达水平降低,与空白对照组对比具有统计学差异(P<0.05)。结论:环六缩酚肽具有抑制人PC-3细胞增殖及凋亡的作用,通过caspase-3和Bax可对PC-3细胞的凋亡进行诱导。

范德堡大学:大环生物分子快速合成有新法

美国范德堡大学官网近日发布公告称,该校生化学院化学系教授杰夫瑞·约翰斯顿与其学生开发出一种全新合成技术,能将生物体内重要的环状分子——环缩肽的合成步骤从之前的14步缩减到6步,而且产量更高,环状分子尺寸更大。新化合过程将开启全新的化学运用,更大环状缩肽具有独特的生物特性,可用来开发更高效抗生素、抗逆转录病毒药物以及杀虫剂。环缩肽在有机生命体内扮演着重要角色,

环六缩酚肽对人前列腺癌细胞的抑制作用及对婆罗双树样基因4的作用机制

目的 探讨环六缩酚肽对人前列腺癌细胞的抑制作用以及对婆罗双树样基因4（SALL4）的作用.方法 采用噻唑蓝（MTT）法检测不同药物组前列腺癌细胞的增殖,采用流式细胞仪检测前列腺癌细胞的凋亡率,应用Western blot法检测前列腺癌细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）蛋白水平,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测前列腺癌细胞中SALL4的表达.结果 环六缩酚肽干预24、48 h后前列腺癌细胞的生存率降低为（32.40±1.98）％和（38.20±2.13）％,凋亡率升高为（48.43 ±3.08）％和（50.08±4.14）％,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;环六缩酚肽干预48 h后前列腺癌细胞中Caspase-3 （0.387 ±0.012）和bax蛋白（0.312±0.028）表达水平升高,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;而环六缩酚肽干预组bcl-2蛋白（0.487 ±0.018）水平降低（P＜0.01）,SALL4表达水平没有明显变化.结论 环六缩酚肽对前列腺癌细胞具有抑制作用且抑制作用可能是通过调控Caspase-3、bax和bcl-2水平的变化而实现的,而没有影响SALL4的水平.

一种不易诱发耐药性的新型抗生素teixobactin的研究进展

细菌耐药问题已经成为21世纪世界上最大的健康问题之一。发现新抗生素的速度越来越慢以及新耐药细菌的产生加速了新抗生素的需求。来源于难培养土壤微生物的缩肽类抗生素teixobactin具有独特新颖的抗菌机制,即和细菌细胞壁上肽聚糖前体脂质Ⅱ及壁磷壁酸前体脂质Ⅲ的保守序列结合,以致细菌细胞壁不能合成,可以杀死多种耐药性致病菌,包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)等。这种特殊的作用方式使病原体对其很难产生耐药性,因此,teixobactin被认为是"明星抗生素"。自teixobactin发现以来,它的生物活性、作用机制、构效关系等逐步被揭示,其化学全合成也得以实现,但是生物合成的研究相对滞后。本文总结了近几年来有关teixobactin的研究进展,讨论了其不易诱发耐药性的机制,并展望了其在生物合成方面的研究。