纯钛表面载环肽c(RGDfk)对类成骨细胞增殖和信号转导通路的影响

目的:通过纯钛表面微弧氧化(MAO),以多巴胺为耦联,引入c(RGDfk)环肽,研究体外类成骨细胞在该涂层上的增殖及细胞活性转导信号通路的影响。方法:通过CCK-8法、ALP法分析MC3T3-E1成骨细胞株在不同涂层上的细胞增殖成骨的影响;应用Western blot法,分析MC3T3-E1在不同涂层培养后的黏着斑激酶信号通路及MAPK信号通路上的相关蛋白量与活性。结果:细胞的增殖和活性在纯钛表面微弧氧化-多巴胺-环肽c(RGDfk)复合涂层影响明显,优于纯钛微弧氧化-多巴胺涂层,更优于纯钛微弧氧化涂层;细胞在该复合涂层培养后上调了黏着斑激酶及MAPK信号通路上的相关蛋白量与活性。结论:MC3T3-E1成骨细胞在纯钛表面微弧氧化-多巴胺-c(RGDfk)环肽复合涂层培养后,增殖明显,黏着斑激酶信号通路与MAPK信号通路相关蛋白表达增加。

钛表面不同硅烷偶联c(RGDfK)环肽的表征及生物相容性分析

目的 探讨用四种不同硅烷将c(RGDfK)[(cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe-Lys)]环肽固定于钛表面的效率及生物相容性。方法 钛表面经碱热处理(OH组),分别用3-氨丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane,APTES)(OHAP组)、3-氯丙基三乙氧基硅烷(3-chloropropyltriethoxysilane,CPTES)(OHCP组)、3-巯基丙基三甲氧基硅烷(3-mercaptopropyltriethoxysilane,MPTS)(OHMPT组)、3-异丁烯酰氧丙基三甲氧基硅烷(γ-methacryloxypropyltrimethoxysilane,γ-MPS)(OHMPS组)四种硅烷固定c(RGDfK)环肽,构建钛-硅烷-c(RGDfK)环肽涂层,钛片表面未处理组为空白对照组(NT组)。利用扫描电镜、接触角计观察各组涂层表面形貌及润湿性变化,通过X射线光电子能谱分析钛表面元素组成,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(4,6-diamino-2-phenylindole,DAPI)与鬼笔环肽荧光染色后使用激光共聚焦显微镜观察材料表面小鼠前成骨细胞MC3T3-E1黏附情况,细胞计数(cell counting kit-8,CCK-8)试验和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定评价材料表面MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化情况。结果 扫描电镜观察可见碱热处理后钛表面形成海绵状三维立体网状结构,硅烷-c(RGDfK)环肽涂层附着其上,各组润湿性较未处理钛片均有较大提高,OHMPS组Si/Ti、酰胺-N/Ti元素比最高;OHAP组细胞黏附形态最佳;OHAP组、OHMPT组、OHMPS组细胞增殖及ALP活性均显著高于对照组(P <0.05);OHCP组细胞增殖活性及ALP活性与对照组无统计学差异。结论 MPTS、CPTES、γ-MPS三种硅烷均能够作为偶联剂将c(RGDfK)环肽结合于钛表面,促进MC3T3-E1细胞黏附、增殖和分化,其中γ-MPS偶联c(RGDfK)环肽的效果最好,而MPTS、CPTES、γ-MPS偶联c(RGDfK)环肽后具有相似的生物学性能。

太子参中新环肽──太子参环肽C

太子参中新环肽───太子参环肽Ｃ谭宁华，周俊（中国科学院昆明植物研究所植物化学开放实验室，昆明６５０２０４）ＨＥＴＥＲＯＰＨＹＬＬＩＮＣ，ＡＮＥＷＣＹＣＬＯＰＥＰＴＩＥＤＦＲＯＭＰＳＥＵＤＯＳＴＥＬＬＡＲＩＡＨＥＴＥＲＯＰＨＹＬＬＡ￥ＴＡＮＮｉｎｇ－...

c(RGDfK)肽影响成骨细胞黏附、增殖的体外实验

目的研究c(RGDfK)肽修饰后的纯钛表面对小鼠成骨细胞黏附、增殖的影响。方法应用超声微弧氧化技术和多巴胺化学偶联的方式分别在纯钛表面构建MAO-PDA-GRGDSP(X组)、MAO-PDA-c(RGDfK)(H组)和MAO(M组)功能涂层,采用扫描电镜进行形貌分析,通过CCK-8实验检测和激光共聚焦观察MC3t3-E1细胞在各组的早期黏附和增殖情况。结果扫描电镜检测涂层呈多孔形貌,多巴胺的修饰孔变小,并有颗粒状的RGD肽在微孔内。CCK-8结果显示,H组的OD值在各个时间点上都高于X组和M组,且各组比较具有统计学意义(P<0.05)。激光共聚焦观察细胞在X组和H组表面的状态均好于M组,但H组表面细胞的数目更多,丝足铺展的面积更大。结论线形肽GRGDSP和环形肽c(RGDfK)对细胞的早期黏附和增殖皆有促进作用,且环形肽c(RGDfK)的作用更强。

四棱草环肽C和D的ESIMS-MS分析

利用低能量碰撞诱导解离(CID)技术对四棱草环肽C和四棱草环肽D的电喷雾电离串联质谱(ESIMS-MS)进行了研究.ESIMS可以确定环肽的分子量,根据多级质谱中逐次失去氨基酸残基的碎片离子可以确定环肽中氨基酸残基的连接顺序.氨基酸残基主要从酰氨键C端断裂失去,有时亦会从N端断裂失去氨基酸残基.

新型^(18)F-RGD二聚体的正常生物分布及U87MG荷瘤裸鼠小动物PET/CT显像研究

背景与目的:整合素αvβ3受体在促进、维持以及调节血管生成的过程中有着至关重要的作用,高表达于多种肿瘤细胞及新生血管内皮细胞。RGD多肽序列可与整合素αvβ3受体特异性结合,有助于评价肿瘤的生长状况和侵袭性。本实验主要研究18F标记的RGD二聚体18F-E[c(RGDfK)2]在正常昆明小鼠体内的生物分布和荷人神经胶质瘤裸鼠模型的小动物PET/CT显像情况。方法:以硝基RGD二聚体4-NO2-3-TFMBz-E[c(RGDfK)2]为前体,使用改进的自动化合成模块Explora GN,一步法直接标记合成18F-E[c(RGDfK)2]。用昆明小鼠分析18F-E[c(RGDfK)2]0.5、1、2、4 h的生物分布,计算每克组织放射性占注入量的百分比(%ID/g)。观察荷人神经胶质瘤裸鼠模型1、2、4 h的小动物PET/CT显像情况。结果:18F-E[c(RGDfK)2]的标记率约为10%,放化纯度>98%,稳定性可达10 h。18F-E[c(RGDfK)2]主要经肾排泄,血液清除迅速,注射后1 h,肾、肝、小肠、肌肉和血的放射性摄取值分别为(1.02±0.16)%ID/g、(0.24±0.06)%ID/g、(0.35±0.03)%ID/g、(0.13±0.03)%ID/g和(0.11±0.03)%ID/g。注射后1 h,肿瘤对18F-E[c(RGDfK)2]的摄取达到高峰(5.2±0.56)%ID/g,T/M为5.36。阻断显像中,可见肿瘤组织放射性摄取明显减低,T/M平均值为1.57。结论:18F-E[c(RGDfK)2]与整合素受体特异性结合,肿瘤摄取较高、显像清晰,可用于整合素表达阳性肿瘤的预后判断、血管靶向治疗适应证的选择及疗效判断。

王不留行环肽B逆转前列腺癌C4-2细胞激素非依赖性生长及作用机制

目的明确王不留行逆转人前列腺癌C4-2细胞激素非依赖性生长的单体成分,探究王不留行抑制去势抵抗性前列腺癌发生发展的作用机制。方法采用CCK-8法检测王不留行单体成分对C4-2细胞增殖的影响;采用CCK-8法联合Annexin V-APC法检测王不留行单体成分对C4-2细胞雄激素非依赖性生长的作用;采用Western blotting检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路和雄激素受体(androgen receptor,AR)蛋白表达;过表达AR后,采用荧光素酶报告基因检测AR的转录活性。结果王不留行环肽B对C4-2细胞增殖的抑制作用最为显著。在有雄激素的条件下,王不留行环肽B对C4-2细胞凋亡的诱导作用和对细胞增殖的抑制作用较弱;王不留行环肽B组p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平降低。过表达AR后,与对照组比较,双氢睾酮组AR蛋白表达水平和相对荧光素酶活力显著升高(P<0.05),王不留行环肽B组AR表达水平和相对荧光素酶活力显著降低(P<0.05);与双氢睾酮组比较,双氢睾酮+王不留行环肽B组AR蛋白表达水平和相对荧光素酶活力显著降低(P<0.05)。结论王不留行环肽B能明显抑制C4-2细胞增殖,具有逆转C4-2细胞激素非依赖性生长的作用,可以通过AR以及PI3K/Akt信号通路发挥抑制去势抵抗性前列腺癌发生发展的作用。

靶向核磁造影剂Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2的制备及性能研究

目的制备Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2靶向造影剂,并对其弛豫性能、细胞毒性以及靶向性进行评价。方法采用F-moc固相法合成靶向双环肽E-[c(RGDfK)]_2,与螯合剂1,4,7,10-四氮环十二烷基-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)共价连接,利用配位键螯合Gd^(3+),制备核磁共振成像(MRI)造影剂Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2。并用质谱仪(ESI-MS)、核磁共振仪(NMR)对其结构进行表征,通过弛豫性能、四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、小鼠MRI造影实验对其性能进行评价。结果ESI-MS、NMR结果表明,Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2合成成功,弛豫效率(k=9.551 mmol^(-1)·L·s^(-1))是商用造影剂钆特酸葡胺注射液(GdDOTA)的1.84倍;MTT实验结果显示,Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2的细胞毒性低于Gd-DOTA;小鼠MRI造影实验结果显示,Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2具有靶向性并成像清晰。结论Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2是一种在生物体内稳定性好,细胞毒性低,并有靶向性能的MRI造影剂,具有研究和应用价值。

人ⅡA型磷脂酶A_2衍生肽P26抗菌作用与结构修饰的研究

目的比较人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)C末端衍生的多肽和经修饰后的环肽对不同细菌在体外的杀菌效应,了解其作用机制。方法根据人ⅡA型PLA2氨基酸顺序C末端26个氨基酸残基,合成直链肽P26,同时将其修饰为环肽P26。采用琼脂铺板计数法,将不同浓度的两种多肽分别与6种细菌在37℃孵育2 h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18～24 h,记录每一琼脂板上的菌落数(CFU),并计算多肽作用后的杀菌率。结果两种多肽对革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和炭疽杆菌有较强的杀菌活性,环肽P26的作用比直链肽P26强4倍左右;对革兰阴性菌大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌的杀菌作用较弱,而环肽P26的作用更弱。结论衍生自人ⅡA型PLA2 C末端26个氨基酸残基的肽P26和修饰得到的环肽P26对G+菌有较强的杀菌活性,经修饰成环肽后作用更强,可能与环肽分子带的正电荷更集中有关。

基于UPLC-Q-Exactive MS技术太子参环肽heterophyllin A、pseudostellaria C在大鼠体内的代谢产物及代谢途径研究

目的分析鉴定大鼠ig太子参环肽提取物后血浆、胆汁、尿液及粪便的代谢产物,并推测其在大鼠体内的代谢途径。方法雄性SD大鼠ig太子参环肽类提取物(400 mg·kg−1),给药后收集血浆、胆汁、尿液及粪便样品。样品处理后,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道离子阱质谱技术(UPLC-Q-Exactive MS)分析环肽的入血原型成分,对其中2种入血环肽heterophyllin(HA)、pseudostellaria C(PC)代谢物进行结构表征。结果共从大鼠血浆中提取到了7种环肽类成分,包括pseudostellarin A、pseudostellarin B、heterophyllin B、PC、pseudostellarin D、HA、pseudostellarin E;在大鼠的生物样本中检测到13个HA代谢产物,其中血浆、胆汁、尿液、粪便分别鉴定出3、7、0、13个;PC代谢产物有15个,其中血浆、胆汁、尿液、粪便分别有3、10、4、14个。2种环肽在大鼠体内存在去羟基化、水解、脱水、甲基化代谢途径。结论通过UPLCQ-Exactive MS技术推测出了HA和PC代谢产物和途径。