毛细管区带电泳激光诱导荧光间接检测环腺苷单磷酸和环鸟苷单磷酸

研究了影响毛细管区带电泳激光诱导荧光间接检测环腺苷单磷酸和环鸟苷单磷酸的实验条件.cAMP和cGMP的线性范围分别为30～500mg/L和15～500mg/L,其最低检测限分别为9.0mg/L和0.5mg/L;当浓度为125mg/L时,cAMP和cGMP峰面积的RSD为4.45%和6.21%(n=4);其迁移时间的日间RSD分别为2.92%和2.04%(n=5)

腺苷酸环化酶在大肠杆菌中的表达及初步应用

腺苷酸环化酶(Adenylate Cyclase,AC)对酶法合成环单磷酸腺苷(Cyclic Adenosine Monophosphate,cAMP)至关重要,它催化三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)生成cAMP和焦磷酸(PPi)。本研究将Thermomonospora echinospora来源的AC(TeAC)在大肠杆菌中进行异源表达,经过亲和层析纯化蛋白后进行酶学性质的分析,并进一步将其用于cAMP的催化合成。在16℃下诱导重组大肠杆菌表达TeAC后,利用Ni柱亲和层析纯化TeAC,经过SDS-PAGE分析表明目的蛋白条带为40 ku,与预期蛋白大小一致。重组TeAC酶的最适温度为50℃,最适pH值为10.5。经酶动力学分析,测得该酶对底物ATP催化的动力学参数米氏常数(Km)=115.1 mmol/L,最大反应速度(V_(max))=64.52μmol/(mg·min),催化常数(Kcat)=8.13 s^(-1)。用TeAC催化底物ATP反应11 h后cAMP产量可达19.1 g/L。该研究成功表达了一种具有高效催化性能的TeAC,并将其应用于cAMP的催化合成时有较高的产量和生产效率,为酶法合成cAMP的应用研究奠定了基础。

强啡肽和苯环利定在高血压大鼠的环腺苷酸生成系统中的作用

采用放射免疫检测方法，观察了强啡肽（Ｄｙｎ）和苯环利定（ＰＣＰ）对高血压大鼠（ＳＨＲ）的环腺苷酸（ｃＡＭＰ）生成系统的影响．结果表明：Ｄｙｎ剂量依赖地降低ＳＨＲ和非高血压大鼠（ＷＫｙ）的外周血管中ｃＡＭＰ的含量，并且对ＳＨＲ的ｃＡＭＰ生成系统的抑制作用大于ＷＫｙ（Ｐ＜０．０５）；相反地，ＰＣＰ剂量依赖地升高ＳＮＲ和ＷＫｙ的外周血管中的ｃＡＭＰ的含量，对ＳＨＲ的ｃＡＭＰ生成系统的激活作用小于ＷＫｙ（Ｐ＜０．０５）。这些观察表明：１．Ｄｙｎ和ＰＣＰ通过抑制或激活环腺苷酸生成系统对ＳＨＲ产生作用。２．ＳＨＲ和ＷＫｙ的外周动脉对Ｄｙｎ和ＰＣＰ的敏感性不同。Ｐ＜０．０１ｖｓＷＫｙ．ＥｆｆａｔＯｆ￣ｏｎｃＡＭＰｃｏｎａｌｓｏｆ￣ｎｅＰ￣Ｏｆ￣￣ｉｎＳＨＲａｎｄＷＫｙＩｎ￣ｎｇｃｏｎｒｍｈａｔｉｏｎｏｆＰＣＰ（１０－－＇－－１０－－＇ｍｏｌ／Ｌ）ｉｎｄｕｃｅａｄｏＳｅｄｒｐｅｎｄｅｎｔｉｎＣｒｅａｓｅｉｎｃＡＭＰｌｅＶｅｌｓｉｎｍｅｍｂｒａｎｅｐａ￣ｏｆｂｏｔｈＳＨＲａｎｄＷＫｙ．ＴｈｅＥＣ．ｖａｌｕｅＳｗｅｒｅ９．３ｘ１０－－７ｍｏｌ／ＬｆｏｒＷＫｙａｎｄ５．０ｘ１０－－６ｍｏｌ／ＬｆｏｒＳＨＲ．

氯吡格雷抵抗的研究现状

氯吡格雷是一种新型的噻吩啶类衍生物,能够抑制血小板的活化和聚集,其与血小板表面二磷酸腺苷（ADP）受体P2Y12不可逆结合,可减少ADP的结合位点,阻断ADP对腺苷环化酶的抑制作用,促进环单磷酸腺苷（cAMP）依赖和前列腺素E1（PGE1）刺激的舒血管物质磷酸蛋白（VASP）的磷酸化，

8Br-cAMP对人牙髓细胞NO表达的影响

目的探讨蛋白激酶A(prote in k inase A,PKA)信号通路激活剂8溴-环单磷酸腺苷(8 B r-cyc lic adenosinemonophosphate,8B r-cAMP)与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓细胞诱导型一氧化氮合酶(induc ib le n itric ox-ide synthase,iNOS)表达的关系。方法采用RT-PCR、蛋白免疫印迹、硝酸还原酶法检测iNOS/NO表达。结果8B r-cAMP能够上调LPS诱导的人牙髓细胞iNOS/NO表达。结论PKA信号通路参与LPS诱导人牙髓细胞iNOS表达的调节。

局灶性脑缺血大鼠CREB1活性调节转导子的相关研究

目的探讨磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)、CREB1活性调节转导子(TORC1)和脑源性神经影响因子(BDNF)在局灶性脑缺血大鼠脑皮质中的表达规律及意义。方法用线栓法分别制作雄性SD大鼠右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72h模型,应用蛋白印迹法分别检测TORC1、BDNF和p-CREB在局灶性脑缺血皮质的蛋白表达水平,用聚合酶链反应技术检测TORC1和BDNF mRNA的相对表达水平。结果与正常组相比,TORC1的核累积和细胞表达的两个高峰为术后3 h和48 h,而p-CREB和BDNF的两个高峰分别为3 h和72 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TORC1可能在大鼠局灶性脑缺血后48 h前参与促进了顶叶皮质神经元细胞CREB/BDNF通路的活化,对皮质神经元具有保护作用。

cAMP促进成年哺乳动物中枢神经系统再生分子机制的研究进展

近年来神经科学工作者对cAMP促进成年哺乳动物中枢神经系统(CNS)神经再生的分子机制进行了大量的研究,结果表明cAMP通过激活其下游分子PKA、Epac、提高IL-6的水平、磷酸化RhoA以及与Ca2+通路相互作用等机制促进CNS再生。本文对cAMP促进CNS再生机制的研究进展进行综述,并探究有效提高神经元内cAMP水平的策略。

选择性磷酸二酯酶抑制剂对人类体外阴道组织的作用

环核苷酸介导的信号传导对控制人类阴道平滑肌系统中的作用知之甚少。最近，出现了关于人阴道中存在磷酸二酯酶同功酶4（环单磷酸腺苷cAMP—PDE）和5（环单磷酸鸟苷cGMP-PDE）的报道。因此，本研究的目的是阐述由内皮素-1（ET-1）引起的某些磷酸二酯酶抑制剂对张力的影响，

青蒿总香豆素解热作用及其机理初步研究

目的:研究青蒿总香豆素解热(降温)作用并探讨其作用机理。方法:从黄花蒿中提取总香豆素,利用内生致热原性家兔发热模型,观察青蒿总香豆素对发热家兔体温的影响并测定脑脊液、血清中前列腺素E2(PGE2)、环单磷酸腺苷(cAMP)水平以及肝脏、腓肠肌钠泵活性。结果:青蒿总香豆素可以显著降低正常及发热家兔体温,抑制肝脏、腓肠肌组织钠泵活性,降低发热家兔血液及脑脊液PGE2水平,对血液及脑脊液cAMP水平变化无明显影响。结论:香豆素成分可能是青蒿解热降温的有效部位,其作用机制与抑制钠泵活性及降低中枢PGE2水平有关。

小剂量左旋多巴上调pCREB及CD39蛋白表达发挥抗氧化应激损伤作用的研究

目的明确左旋多巴对PC12细胞生长及应激状态下存活的影响,探讨其抗氧化应激损伤的机制。方法不同浓度左旋多巴处理PC12细胞,用MTT法检测PC12细胞增长率及加入过氧化氢后细胞存活率;免疫荧光、Western blot方法测定磷酸化环单磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)及CD39蛋白表达。结果低浓度左旋多巴(<20μmol·L-1)促进PC12细胞生长,且可抗氧化应激损伤,而蛋白激酶抑制剂减弱此保护作用。免疫荧光及Western blot结果显示CD39及pCREB表达升高。结论低浓度左旋多巴可通过上调CD39及pCREB表达发挥抗氧化应激神经保护作用。

大黄素调节cGAS/STING信号通路对细菌性脑膜炎大鼠神经炎症的影响

目的研究大黄素通过调节环鸟苷单磷酸腺苷合成酶(cGAS)/干扰素基因刺激蛋白(STING)信号通路对细菌性脑膜炎大鼠神经炎症的影响。方法将60只大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、大黄素组、青霉素组、大黄素+SR-717组,每组12只。除对照组外的4组大鼠采用立体定向仪向大脑中注射B族溶血性链球菌(GBS)菌液的方法构建细菌性脑膜炎大鼠模型,造模成功后,大黄素组ip 20 mg/kg大黄素,青霉素组ip 10 mL/kg青霉素,大黄素+SR-717组大鼠ip20 mg/kg大黄素及30 mg/kg SR-717,对照组和模型组大鼠注射等量生理盐水。给药3 d后,进行神经系统症状评分和脑脊液白细胞(WBC)计数;以苏木精-伊红(HE)染色检测脑组织病理学变化;以酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠脑组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;以TUNEL染色法检测大鼠脑皮层神经细胞凋亡;以Western blotting检测大鼠脑组织cG AS、STING蛋白相对表达量。结果与模型组比较,大黄素组大鼠神经系统症状评分、脑脊液WBC数量、脑组织中IL-6、TNF-α含量、TUNEL染色神经细胞数、cG AS及STING蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05),脑组织损伤明显减轻;与大黄素组比较,大黄素+SR-717组大鼠神经系统症状评分、脑脊液WBC数量、脑组织中IL-6、TNF-α含量、TUNEL染色神经细胞数、cG AS及STING蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),脑组织损伤再次加重。结论大黄素可能通过抑制cG AS/STING信号通路减轻细菌性脑膜炎大鼠的神经炎症。