MicroRNA-134调控环腺苷酸应答元件结合蛋白对老年小鼠术后认知功能障碍的影响

目的探讨microRNA-134(miR-134)及环腺苷酸应答元件结合蛋白(cyclic AMP response element binding protein,CREB)在老年小鼠术后认知功能障碍发病机制中的作用。方法 68只老年C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组(con)、异氟醚组(iso)、手术组(sur)、异氟醚+手术组(iso+sur)。对照组行假手术,异氟醚组1.8%异氟醚吸入1.5 h,手术组行局麻腹部手术,异氟醚+手术组1.8%异氟醚吸入1.5 h+局麻腹部手术。术后行Morris水迷宫实验评估小鼠认知功能,并分别于术后第1、3、7天取小鼠海马行q RT-PCR检测miR-134表达,Western blot检测CREB、Ser133位点磷酸化CREB(pCREB)、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、突触后致密95(postsynaptic density 95,PSD95)的表达。结果与对照组相比,手术组小鼠术后水迷宫登台潜伏期延长(P<0.05),目标象限停留时间缩短(P<0.01),穿台次数减少(P<0.05);与手术组相比,异氟醚+手术组小鼠登台潜伏期缩短(P<0.05),目标象限停留时间延长(P<0.05)。与对照组相比,手术组小鼠海马组织miR-134表达增加(0.219±0.013 vs 0.277±0.017),p-CREB/CREB表达比值降低(0.655±0.025 vs 0.379±0.053),CREB、BDNF、PSD95表达减少(0.359±0.023 vs 0.307±0.027,0.377±0.031 vs 0.246±0.019,1.066±0.081 vs 0.839±0.098)(P均<0.05);与手术组相比,异氟醚+手术组小鼠海马miR-134表达减少(0.277±0.017 vs0.235±0.020),p-CREB/CREB表达比值升高(0.379±0.053 vs 0.605±0.037),CREB、BDNF表达增加(0.307±0.027 vs0.345±0.034,0.246±0.019 vs 0.341±0.017)(P均<0.05)。结论腹部手术致老年小鼠术后早期学习记忆功能受损,异氟醚吸入全麻下行腹部手术可缓解该损伤,可能的机制是手术创伤使海马中miR-134表达增加,抑制CREB活性,造成突触可塑性下降,引起学习记忆功能损伤。

微小RNA-134靶向调控环腺苷酸应答元件结合蛋白/脑源性神经营养因子通路对脑卒中后抑郁海马神经细胞的影响

目的探讨微小RNA-134(miR-134)对脑卒中后抑郁海马神经细胞的影响及相关作用机制。方法建立脑卒中后抑郁大鼠模型,分离海马组织及海马神经细胞,并将体外培养的海马神经细胞分为对照组、miRNA NC组(转染miRNA NC)和miR-134 siRNA组(转染miR-134 siRNA)。实时荧光定量PCR法检测海马组织及海马神经细胞miR-134及环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)1、脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA表达水平,Western blotting法检测海马组织及海马神经细胞p-CREB1/CREB1、BDNF蛋白表达情况,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-134与CREB1的靶向作用关系。结果与正常组相比,造模组大鼠海马组织中miR-134表达水平显著升高,CREB1、BDNF mRNA水平及p-CREB1/CREB1、BDNF蛋白水平显著降低(均P<0.05)。与对照组、miRNA NC组相比,miR-134 siRNA组海马神经细胞中CREB1、BDNF mRNA水平,p-CREB1/CREB1、BDNF蛋白水平及细胞吸光度(OD)值显著升高,细胞凋亡率显著降低(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,在海马神经细胞中,miR-134可靶向CREB1表达。结论miR-134可能通过靶向抑制CREB表达,进而下调BDNF表达,抑制脑卒中后抑郁海马神经细胞增殖并促进其凋亡。

β样淀粉蛋白和早老素增强子-2与环磷酸腺苷应答原件结合蛋白的关系

β淀粉样蛋白(Aβ)沉积是阿尔茨海默病(AD)公认的一个病理学改变也是诊断依据之一。γ分泌酶是产生Aβ的最后剪切蛋白复合体,它剪切生成的Aβ主要为Aβ40和Aβ42。而比较认可的形成Aβ沉积的原因就是Aβ40和Aβ42比例的失调。γ分泌酶中起主要催化作用的部分是早老素(PS)-1,而早老素增强子(Pen)-2主要作用就是使PS-1内分解,对底物的催化作用产生影响。环磷酸腺苷应答原件结合蛋白(CREB)是与长期记忆和基因转录密切相关的一种蛋白,单体Aβ42可以促进其生成,而CREB本身可以调节Pen-2表达。本文就Aβ的形成意义、CREB的前后作用、Pen-2的功能对三者间的关系进行综述。

基于CREB3L1探讨矾冰纳米乳对兔耳增生性瘢痕模型相关蛋白及炎症因子的影响

目的观察矾冰纳米乳对兔耳增生性瘢痕组织环腺苷酸应答元件结合蛋白3样1(CREB3L1)及炎症损伤的影响,探讨其预防增生性瘢痕的作用机制。方法将30只新西兰大耳白兔随机分为空白组、模型组、积雪草苷组及矾冰纳米乳低、中、高剂量组(8.15、16.3、32.6 mg·mL^(-1))。采用热力烫伤法进行造模,深Ⅱ度烧伤造模成功后第14天给予相应药物外用,空白组、模型组外用等量生理盐水,每日2次,连续给药至第35天。苏木素-伊红(HE)染色观察兔耳瘢痕组织病理学改变;马松(Masson)染色观察瘢痕组织胶原沉积情况;免疫荧光双标法检测兔耳瘢痕组织CREB3L1/α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)共表达情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测瘢痕组织白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)等炎性因子表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CREB3L1、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(COL-Ⅲ)、α-SMA mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western Bolt)检测CREB3L1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA的蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组瘢痕增生指数明显升高(P<0.01);病理学改变包括真皮层增厚,形成致密的网状纤维,伴见炎症细胞浸润;Masson染色可见真皮层增厚,蓝染的胶原纤维大量沉积排列紊乱;免疫荧光双标结果显示,瘢痕组织中CREB3L1阳性表达增加,α-SMA阳性表达增加,IL-6含量明显升高(P<0.01),IL-10含量明显降低(P<0.01),兔耳瘢痕组织中的CREB3L1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量明显增加(P<0.01),CREB3L1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA蛋白的表达明显增加(P<0.01)。与模型组比较,矾冰纳米乳中、高剂量组及积雪草苷组治疗后瘢痕增生指数均明显下降(P<0.05,P<0.01),病理改变可见真皮层变薄,炎性细胞均有不同程度减少,蓝染的胶原纤维减少,免疫荧光双染可见瘢痕组织中CREB3L1阳性表达降低,α-SMA阳性表达降低,IL-6含量明显降低(P<0.01),IL-10含量明显升高(P<0.01),矾冰纳米乳中、高剂量组和积雪草苷组均能够明显下调CREB3L1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA mRNA的表达(均P<0.01),降低CREB3L1、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论矾冰纳米乳能够通过调节CREB3L1及相关纤维化蛋白的表达,降低炎症水平,从而预防增生性瘢痕形成,丰富了中医“既病防变”“治未病”思想的科学内涵。

环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)参与人hsp90β基因的热诱导表达

为研究ｃＡＭＰ应答元件（ＣＲＥ）在人热休克蛋白ｈｓｐ９０β基因表达中的作用，构建了数个受ｈｓｐ９０β基因不同长度调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因质粒．分别转染Ｊｕｒｋａｔ细胞并检测４２℃１ｈ热诱导前后 ＣＡＴ活性．结果发现删除ｈｓｐ９０β基因上游含ＣＲＥ片段（－１７３／－９１ｂｐ）后，ＣＡＴ的热诱导表达活性降低了６７％．电泳迁移率变更分析（ＥＭＳＡ）显示热休克后Ｊｕｒｋａｔ细胞的核抽提物中磷酸化的ＣＲＥＢ与该片段呈特异性结合．Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹实验及ＰＫＡ活性检测发现ＣＲＥＢ的磷酸化程度及ＰＫＡ活性均随热诱导时间的延长而增加．以上结果表明：磷酸化的ＣＲＥＢ通过与ｈｓｐ９０β因上游的ＣＲＥ结合参与该基因的热诱导表达，并可能与ＰＫＡ传导途径有关．

原花青素对AD大鼠学习记忆及CREB蛋白表达的影响

目的:观察原花青素(OPC)对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆及相关蛋白环腺苷酸应答原件结合蛋白(CREB)的影响。方法:40只老龄大鼠随机分为空白对照组、模型组、OPC高剂量组和OPC低剂量组。除空白对照组外,其余各组采用D-半乳糖合并鹅膏覃氨酸损毁大脑基底核神经元的方法复制AD模型。Morris水迷宫实验检测大鼠学习和记忆能力,双抗体夹心法测定各组大鼠海马区乙酰胆碱酯酶(Ach E)和乙酰胆碱转移酶(Ch AT)的活性,Western blot法检测CREB蛋白的表达。结果:AD模型组大鼠逃避潜伏期、搜索距离显著高于空白组,探索时间及探索百分比显著低于空白组,Ach E活性显著高于空白组,Ch AT活性及CREB蛋白的表达显著低于空白组。OPC高剂量组和OPC低剂量组逃避潜伏期、搜索距离显著低于模型组,探索时间及探索百分比显著高于模型组,Ach E活性显著低于模型组,Ch AT活性及CREB蛋白的表达显著高于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论:OPC能提高AD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与降低Ach E活性和提高Ch AT活性,并增加CREB蛋白的表达有关。

多次氯胺酮麻醉对未成年大鼠学习记忆能力和磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白的影响

目的探讨多次氯胺酮麻醉对未成年大鼠记忆能力的影响及其可能机制。方法21日龄筛选合格SD大鼠64只，分为氯胺酮组（包括k1和k7两个亚组：氯胺酮75mg／kg腹腔注射，每日1次，连续注射7d，分别于第8天和第14天进行首次训练，一部分训练结束1h取材，一部分3d后再次训练）、生理盐水组（注射等体积的生理盐水）、假训练组（取生理盐水组平均训练时间、次数训练，训练结束1h取材）、正常组（迷宫中适应5min取材）。采用Y型迷宫进行记忆能力测试，应用免疫组化法检测海马磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白（p-CREB）的表达。结果k1组学习次数、时间[分别为（51．88±15．93）次，（53．38±19．03）min]高于生理盐水组[分别为（25．50±6．78）次，（21．88±8．11）min]（P〈0．05），k1组记忆保持率、P—CREB蛋白阳性神经元[分别为（61，25±6．41）％，（28．62±2．92）个]低于生理盐水组[分别为（87．50±13．89）％，（71．13±7．23）个]（P〈0．05）；而k7组[分别为（22．75±7．65）次，（24、13±9．01）min，（87．50±10．35）％，（71．00±6．93）个]，与生理盐水组相比差异无统计学意义。正常组p-CREB蛋白阳性神经元[（7．75±1．28）个]低于生理盐水组和氯胺酮组（P〈0．05），但与fKiJiI练组[（7．75±1．49）个]相比差异无统计学意义。结论多次氯胺酮麻醉可短期影响未成年大鼠记忆能力，其机制可能与抑制海马p-CREB表达有关。

人肝中硒蛋白K相互作用蛋白的筛选与验证

以硒蛋白K(SelK)突变体为"诱饵",采用酵母双杂交系统对人肝cDNA文库进行筛选,得到一个与SelK相互作用的蛋白──环腺苷酸应答元件结合蛋白3(CREB3).将SelK与CREB3共同转染酵母细胞,验证了SelK与CREB3的相互作用;并采用受体漂白、敏化发射和荧光寿命3种荧光共振能量转移方法进一步验证了二者间的相互作用,发现其不受SelK中硒代半胱氨酸(Sec)的影响.推测SelK可能通过其Sec之前的区域与CREB3发生作用,参与CREB3介导的内质网相关降解过程,影响相关癌症的转移和发展.

七氟醚-N2O麻醉对青年小鼠空间学习和记忆功能及pCREB和Egr1表达的影响

目的研究七氟醚-N2O麻醉后青年小鼠的空间学习和记忆能力以及海马磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(phosphorylated cyclic AMP response element-binding protein,pCREB)和早期生长反应因子1(early growth response factor 1,Egr1)的表达,并与老年小鼠进行比较。方法12只3月龄和12只18月龄小鼠随机分为对照组和实验组,每组各6只。48 h后进行为期6天的获得训练。获得训练结束后24 h进行空间探索实验,实验结束后15 min收集两组小鼠的海马组织,通过Western blot和实时定量PCR方法评估pCREB和Egr1的表达水平。结果未见麻醉损害青年小鼠的空间学习和记忆功能以及海马中pCREB和Egr1的表达水平,麻醉组与对照组比较差异均无统计学意义;而老年小鼠Sev+N2O组在麻醉后第4、5、6天逃逸潜伏期显著长于对照组(P<0.05),两组小鼠游泳速度差异无统计学意义;在空间探索实验中,Sev+N2O组目标象限路程百分比和时间百分比显著低于对照组(P<0.01);海马中pCREB和Egr1的表达水平均较对照组显著下降(P<0.05)。结论七氟醚-N2O麻醉对青年小鼠的空间学习记忆能力没有损害,也不影响海马中pCREB和Egr1的表达,但会对老年小鼠造成损害。

鞘内注射吗啡和可乐定对切口痛大鼠脊髓背角pCREB表达的影响

目的观察鞘内注射吗啡和可乐定对切口痛大鼠脊髓背角磷酸化环腺苷酸反应原件结合蛋白(pCREB)表达的影响。方法选择雄性SD大鼠80只,随机均分为五组:切口痛组(A组)、鞘内注射吗啡2.5μg组(B组)、鞘内注射可乐定5μg组(C组)、鞘内注射吗啡2.5μg+可乐定5μg组(D组)和假手术组(E组)。观察大鼠术后2h机械缩足反射阈值(MWT)、热缩足潜伏期(TWL)和脊髓背角pCREB表达的变化。结果与E组比较,A、B、C、D组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角pCREB免疫反应阳性神经元数量和pCREB蛋白表达增加(P<0.01)。与A组比较,D组MWT升高,TWL延长,脊髓背角pCREB免疫反应阳性神经元数量和pCREB蛋白表达减少(P<0.01)。结论鞘内注射吗啡加可乐定可抑制大鼠切口痛,这可能与其引起的脊髓背角pCREB的表达增加有关。

鞘内注射右美托咪定对手术后切口痛大鼠的镇痛效果

目的探讨右美托咪定(Dex)鞘内注射对手术后切口痛大鼠的镇痛效果及其可能的镇痛机制。方法将40只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为4组,每组10只:假手术组(Ⅰ组)不作任何处理,切口痛组(Ⅱ组)行左足底切开手术,生理盐水组(Ⅲ组)先鞘内注射生理盐水后行左足底切开手术,右美托咪定组(Ⅳ组)先鞘内注射Dex 0.75μg·kg-1后行左足底切开手术。观察大鼠术后2h机械缩足反射阈值(MWT)、热缩足潜伏期(TWL)和脊髓背角磷酸化环腺苷酸反应原件结合蛋白(pCREB)表达的变化。结果与Ⅰ组比较,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组MWT均降低,TWL均缩短,脊髓背角pCREB表达均增加(P<0.05);与Ⅱ、Ⅲ组比较,Ⅳ组MWT升高,TWL延长,脊髓背角pCREB表达减少(P<0.05)。结论鞘内注射右美托咪定可抑制大鼠切口痛,镇痛机制可能与其引起的脊髓背角pCREB的表达增加有关。

七氟醚麻醉对老年小鼠空间认知能力以及海马组织pCreb和Egr1表达的影响

目的探讨七氟醚麻醉对老年小鼠空间认知能力以及海马组织中磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(pCreb)和早期生长反应因子1(Egr1)表达的影响。方法将12只18月龄老年小鼠随机分为麻醉组和对照组,每组各6只。麻醉组小鼠吸入3%七氟醚4 h,而对照组小鼠吸入100%氧气4 h。水迷宫空间学习记忆能力测量在麻醉后48 h进行,获得训练结束后24 h进行空间探索试验。空间探索试验结束后15 min分离海马组织,通过Western blotting和实时定量PCR方法检测海马组织Egr1、Creb和pCreb的表达。结果麻醉组小鼠第4、5、6日逃逸潜伏期显著长于对照组(P<0.05);在空间探索试验中,对照组平台象限时间、路程百分比显著高于麻醉组(P<0.01)。与对照组比较,麻醉组小鼠海马组织Egr1的表达量显著下降(P<0.05);而两组Creb的表达量无显著差异(P>0.05),但麻醉组磷酸化水平下降(P<0.05)。结论七氟醚麻醉下调海马组织Egr1表达和Creb磷酸化水平,影响老年小鼠空间认知能力。

Roux-en-Y胃旁路术对肥胖大鼠脂肪肝的影响及机制研究

目的探讨Roux-en-Y胃旁路术(Roux-en-Y gastric bypass surgery,RYGB)对肥胖大鼠脂肪肝的影响及可能的机制。方法将30只8周龄雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食组(ND组)、高脂饮食组(HFD组)及高脂饮食且接受RYGB组(HFD+RYGB组),每组10只,分别给予正常饮食、高脂饮食。饲养16周后,对HFD+RYGB组大鼠行RYGB,对ND组及HFD组行假手术。术后,ND组大鼠继续给予正常饮食,HFD组与HFD+RY G B组大鼠接受高脂饮食。术后第4周,处死大鼠,收集血样,采用EL IS A法测定大鼠血清TG、TC、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)浓度。观察大鼠肝脏外形,取肝脏组织,行H-E染色及油红O染色,显微镜下观察肝脏组织的病理学变化。采用real-time PCR检测肝组织糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)、固醇调节原件结合蛋白-1c(SREBP-1c)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA表达水平。结果HFD组大鼠体质量、肝脏湿重及内脏脂肪总量高于N D组(P<0.05),HFD+RY G B组大鼠体质量、肝脏湿重及内脏脂肪总量低于HFD组(P<0.05);HFD大鼠血清TG、TC、FFA水平高于ND组(P<0.05),HFD+RY G B组大鼠血清T G、T C、FFA水平低于HFD组(P<0.05);HFD组肝脏T G、T C含量高于N D组(P<0.05),HFD+RY G B组大鼠肝脏T G、T C低于HD F组(P<0.05);H-E及油红O染色结果显示,HFD+RY G B组干细胞脂质沉积、脂滴空泡减少;术后第4周,HFD+RY G B组大鼠肝脏中的C hREB P和S REB P-1 c的mRNA的表达量较HFD组均显著降低(P<0.05)。结论 RYGB能显著缓解肝脏脂肪沉积及血脂,其机制可能与抑制脂肪酸合成途径的关键分子ChREBP和SREBP-1c有关。

miR-134/CREB/BDNF通路在低频重复经颅磁刺激影响癫痫大鼠抑郁、焦虑样行为中的作用

目的基于微小RNA(miR)-134/环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)通路探究低频重复经颅磁刺激(rTMS)影响癫痫大鼠抑郁、焦虑样行为的作用机制。方法36只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、假刺激组(s-rTMS组)及rTMS刺激组(rTMS组),采用强迫游泳和旷场实验检测抑郁样行为;采用高架十字迷宫实验及新颖环境抑制摄食测试检测焦虑样行为,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测海马miR-134、CREB及BDNF mRNA相对表达量,Western印迹检测海马CREB、p-CREB、BDNF蛋白表达。结果与NC组比较,s-rTMS组不动时间、摄食潜伏期、海马CREB、BDNF相对表达量显著增加,水平站立次数及垂直站立次数、总穿臂次数(TE)、进入开放臂次数的比例(OE%)、开放臂停留时间比例(OT%)、海马miR-134相对表达量显著减少(P<0.05);与s-rTMS组比较,rTMS组不动时间、摄食潜伏期、海马CREB、BDNF相对表达量显著减少,水平站立次数及垂直站立次数、TE、OE%、OT%、海马miR-134相对表达量显著增加(P<0.05)。结论低频rTMS可减轻癫痫大鼠抑郁、焦虑样行为,可能与调控miR-134/CREB/BDNF通路有关。

CaMKⅡδ基因沉默对破骨细胞分化功能及c-fos/c-jun/CREB基因的影响

目的探索编码钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱδ的基因沉默对破骨细胞分化功能的影响以及c-fos、c-jun、CREB基因在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用,以揭示破骨细胞分化调控的分子机制。方法构建CaMKⅡδ RNA干扰载体,转染至小鼠RAW264.7细胞,确定干扰效率。病毒转染细胞后,用50 ng·mL^-1核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导,5 d后收获,通过耐酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测、牛骨吸收陷窝检测沉默CaMKⅡδ基因对破骨细胞分化、骨吸收功能的影响;48 h后收获,利用实时聚合酶链式反应(PCR)、Westernblot等方法检测c-fos、c-jun、CREB的表达情况。结果 CaMKⅡδ RNA干扰在mRNA和蛋白质水平的干扰效率分别为70.6%和72.2%。 CaMKⅡδ RNA干扰可显著降低 c-fos、c-jun和CREB的mRNA水平,下调幅度分别为74%、49%和24%,CaMKⅡδ RNA干扰可显著降低c-Fos、c-Jun和CREB的水平,下调幅度分别为74.3%、61.3%和59.2%。结论 CaMKⅡδ RNA干扰可在mRNA和蛋白质水平显著抑制c-fos、c-jun、CREB的表达,其共同参与CaMKⅡδ对破骨细胞分化的调控。

咖啡因对小鼠空间学习记忆能力及有关脑区记忆相关蛋白CREB表达的影响

目的:研究咖啡因对小鼠空间学习记忆能力以及有关脑区记忆相关蛋白──环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)表达的影响。方法:C57BL/6J小鼠45只随机分成3组:咖啡因小剂量组(10mg·kg-1)、咖啡因大剂量组(50mg·kg-1)及生理盐水对照组,均腹腔给药。采用Morris水迷宫评价空间记忆能力及Western blot检测CREB的表达量。结果:与大剂量组及生理盐水对照组相比,咖啡因小剂量组定位航行实验逃避潜伏期显著缩短;空间搜索实验穿越原平台位置的次数显著增多;海马组织CREB表达显著增加。结论:小剂量咖啡因能够提高小鼠空间学习记忆能力,且增加海马区CREB的表达。

黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠海马CREB1蛋白及其磷酸化表达的影响

目的探讨黑逍遥散治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法 30只APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散组,每组10只。同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠10只设为空白组。黑逍遥散组给予黑逍遥散6 g/(kg·d)灌胃,盐酸多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐片3. 25 mg/(kg·d)灌胃,模型组、空白组给予双蒸水0. 2 ml/10 g灌胃,各组均每日灌胃1次,连续3个月。采用Morris水迷宫于实验结束第1~5天进行定位航行实验观察逃避潜伏期,第6天开展空间搜索实验记录跨原平台次数。采用免疫组化法检测小鼠海马CA1、CA3及DG区环腺苷酸应答元件结合蛋白1 (CREB1)及磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白1 (p-CREB1)表达。结果与空白组比较,模型组小鼠第1~5天逃避潜伏期明显延长,第6天跨原平台次数明显减少,小鼠海马CA1、CA3及DG区CREB1及p-CREB1蛋白表达显著降低(P <0. 05或P <0. 01)。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和黑逍遥散组各时间点逃避潜伏期均缩短,第6天跨原平台次数明显增加,小鼠海马CA1、CA3及DG区CREB1、p-CREB1蛋白表达显著升高(P <0. 05或P <0. 01)。黑逍遥散组和盐酸多奈哌齐组各指标组间比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论黑逍遥散可能通过调节海马CREB1及其磷酸化表达发挥防治阿尔茨海默病的作用。

右美托咪定对七氟烷麻醉后老年小鼠认知功能障碍的影响

目的观察右美托咪定对七氟烷麻醉后老年小鼠认知功能障碍及海马组织磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(pCreb)、早期生长反应因子1(Egr1)表达的影响。方法昆明老年小鼠60只,随机分为对照组(n=20)、模型组(n=20)及实验组(n=20)。模型组与实验组小鼠均吸入3%七氟烷4 h,对照组吸入100%氧气4 h;其中实验组小鼠在吸入3%七氟烷前腹腔注射盐酸右美托咪定10μL;对照组与模型组腹腔注射0.9%氯化钠溶液10μL。用Morris水迷宫测试仪与旷场实验测定小鼠的认知功能;用免疫组化法与蛋白质印迹(Wb)法检测海马组织pCreb、Egr1蛋白表达。结果对照组、模型组及实验组小鼠第4天的逃逸潜伏期分别为(17.28±3.24),(27.73±5.92),(22.96±3.75)s;穿越原平台次数分别为(5.64±1.21),(2.97±0.72),(4.83±1.16)次;跨格次数分别为(90.21±18.02),(41.52±9.03),(73.64±17.11)次;直立次数分别为(11.63±3.37),(4.23±1.12),(8.56±1.54)次;中央格停留时间分别为(9.37±1.69),(32.83±7.65),(14.24±2.51)s。定位航行实验的第1~4天,3组小鼠的逃逸潜伏期均逐渐缩短,但模型组与实验组均明显长于对照组,实验组短于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,模型组小鼠穿越原平台的次数、跨格次数与直立次数均明显减少,实验组多于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而中央格停留时间延长,实验组短于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组海马组织pCreb、Egr1蛋白阳性细胞百分比与相对表达量均明显低于对照组,而实验组高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论右美托咪定可改善七氟烷麻醉后老年小鼠的认知功能,其作用机制可能与上调海马组织pCreb与Egr1蛋白表达相关。

左归丸治疗骨质疏松症相关机制

左归丸是中医经典方剂之一，为“阳中求阴”的代表方，具有滋肾补阴的功效和纯补无泻的特点。骨质疏松症是一种以骨量低，骨组织结构破坏，导致骨脆性增加，骨强度下降及骨折风险增加，易发生骨折为特征的全身性骨病，它已成为威胁人类健康的常见疾病之一。中医学有“肾藏精，主骨生髓”的理论，左归丸在治疗骨质疏松症方面有着较好的临床疗效，同时也具有较少的副作用。近年来，针对左归丸治疗骨质疏松症的实验研究数量与日俱增，相关分子以及信号通路的机制研究亦取得一定拓展，特别是左归丸治疗骨质疏松症的相关机制研究陆续涌现。本研究通过整理左归丸治疗骨质疏松症的文献，对其作用机制及信号通路，包括环腺苷酸（cAMP）／蛋白激酶（PKA）／cAMP应答元件结合蛋白（CREB）通路，Notch信号通路，转化生长因子巾，（TGF-卢，）／Smad信号通路，Wnt／卢一链蛋白（卢一catenin）信号通路和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等方面做一综述。这些研究表明左归丸治疗骨质疏松症具有多靶点、多途径的干预特点。虽然左归丸治疗骨质疏松症的疗效明确，且对于一些基本的机制研究亦取得一定进展，但仍存在一定的局限性，尚需结合现代最新研究方法和技术对其机制进行更全面更深入的探索。