环磷酸鸟苷-腺苷合成酶和干扰素基因刺激因子信号通路与缺血性脑卒中相关性的研究进展

缺血性脑卒中(IS)是一种常见的神经系统损伤疾病,其特征是局部脑血流暂时或永久减少,其高发病率、高致残率和不良预后给社会带来了沉重负担[1]。迄今为止,治疗急性IS的方法主要是静脉注射重组组织型纤溶酶原激活剂,然而由于重组组织型纤溶酶原激活剂的治疗窗口狭窄,只有少数患者接受溶栓治疗.

基于环磷酸鸟苷-腺苷合成酶/膜蛋白干扰素基因刺激因子通路探讨奥拉西坦对脑出血大鼠神经功能的影响

目的从环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)/膜蛋白干扰素基因刺激因子(STING)通路方面,探讨奥拉西坦(ORC)对脑出血大鼠认知功能的影响。方法将SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ORC组(50 mg/kg)、RU.521组(cGAS抑制剂,50 mg/kg)、DMXAA组(STING激活剂,25 mg/kg)、ORC+DMXAA组,每组15只。用Longa法测大鼠神经功能变化;干湿比重法测脑含水量;电镜测血肿周围病理变化;铁染色法测血肿周围组织铁沉积,以评估血肿程度;TUNEL法测血肿周围组织神经元凋亡状况;免疫组化法测血肿周围组织cGAS阳性表达。Western blotting法测STING、TNF-α、IL-12、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、转铁蛋白(Tf)、转铁蛋白受体(Tf R)、水通道蛋白4(APQ4)蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠死亡、偏瘫及侧旋转等神经功能缺损行为评分明显升高,血肿周围组织神经元水肿及凋亡明显增加,脑水肿、铁沉积严重,cGAS/STING通路蛋白及其介导的炎症反应和促凋亡途径激活(均P<0.05)。ORC组及RU.521组大鼠神经功能缺损评分明显降低、血肿周围组织神经元损伤、凋亡、脑水肿及铁沉积均明显缓解,cGAS/STING通路蛋白及其介导的炎症反应和促凋亡相关蛋白表达明显降低(均P<0.05)。DMXAA可逆转ORC的上述作用(P<0.05)。结论ORC可能通过抑制cGAS/STING通路活化,缓解脑出血大鼠血肿周围神经元炎症损伤及凋亡,减轻神经功能缺损。

8-溴-环磷酸腺苷和TGF-α在PCOS患者颗粒细胞中的作用

目的探讨8-溴-环磷酸腺苷(8-Bromo-cyclic adenosine monophosphate 8-Br-cAMP)和转化生长因子-浕(TGF-浕)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者离体卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇(E2)生成的影响。方法收集体外授精-胚胎移植(IVF-ET)时PCOS组和正常组的黄素化颗粒细胞进行体外原代培养,在其培养的不同时间(0、48、120h)以睾酮(10-7mol/L)作为底物,分别添加8-Br-cAMP(2mmol/L)和/或TGF-浕(10ng/ml)于无血清培养液(TCM199)中,共培养3h后收集培养上清、细胞。用放射免疫法(RIA)测定颗粒细胞分泌E2量;用考马斯亮蓝G250/BSA测颗粒细胞蛋白含量,以校正E2含量。结果TGF-浕在0h显著刺激PCOS组颗粒细胞分泌E2的量(P<0.05),而48h、120h均显著抑制PCOS组颗粒细胞分泌E2的量(P<0.05);8-Br-cAMP在0h、48h、120h均显著增强PCOS组颗粒细胞雌激素的产生;8-Br-cAMP显著增强TGF-浕的作用(P<0.05)。结论①8-Br-cAMP加速PCOS患者卵巢颗粒细胞内雄激素向雌激素的转化;②TGF-浕抑制PCOS患者卵巢颗粒细胞内雄激素向雌激素的转化;③TGF-浕的作用是在8-Br-cAMP之后。

环-磷酸腺苷在疾病中的信使作用研究

环-磷酸腺苷(cAMP)作为细胞内第二信使,参与人体多种病理生理活动,调控组织细胞内一系列生理生化过程,从cAMP参与肿瘤细胞增殖分化与细胞凋亡,发热作用,凝血作用,气道反应,应激,心理衰竭等方面来阐述cAMP在人体内的第二信使作用,说明cAMP与疾病的发生发展过程密切相关。

磷酸腺苷活性激酶/环氧化酶-2在槲皮素抑制K562白血病细胞增殖中的作用

目的观察对槲皮素人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的影响。方法不同浓度槲皮素孵育K562细胞48小时后用CCK-8法检测细胞存活率;Western-blot法检测槲皮素孵育K562 p-AMPK(磷酸腺苷活性激酶)和Cox-2(环氧化酶-2)蛋白表达水平。结果槲皮素抑制K562细胞的增殖,呈时间和浓度依赖性。槲皮素孵育48h后K562细胞的IC50值是83.11μm;随着槲皮素浓度的增加,K562细胞Cox-2蛋白水平表达下降,而p-AMPK蛋白表达水平上升。结论槲皮素呈浓度依赖性抑制HL-60细胞的增殖,可能通过激活AMPK抑制Cox-2进而抑制K562细胞增殖。

8溴-环磷酸腺苷对脑缺血再灌注大鼠PKA及GAP-43蛋白表达的影响

目的:观察脑室注射8-溴-环磷酸腺苷(8-B-cAMP)对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质蛋白激酶A(PKA)及生长相关蛋白43(GAP-43)表达的影响。方法:采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,将45只大鼠分为假手术对照组,缺血组(单纯脑缺血再灌注组)和8-B-cAMP组(脑缺血再灌注并脑室注射8-B-AMP)。用放免法测缺血周边区脑组织cAMP的含量,Westernblot(免疫印迹法)检测蛋白激酶A(PKA)及生长相关蛋白43(GAP-43)的表达。结果:脑缺血组6h、24h cAMP的含量下降,GAP-43及PKA蛋白表达减少;8-B-cAMP治疗组脑组织GAP-43蛋白表达较缺血组增加,且这种变化与cAMP的含量及PKA蛋白表达增加相一致。结论:8-B-AMP能够增加PKA及GAP-43的表达从而促进脑缺血再灌注后的轴突再生。

8-溴-环磷酸腺苷和雄激素在PCOS患者颗粒细胞中的作用

目的:探讨8-溴-环磷酸腺苷(8-Bromo-cycnc adenosine monophosphate,8-Br-cAMP)和雄激素对多囊卵巢综合征(PCOS)患者离体卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇(E2)生成的影响。方法:收集体外授精-胚胎移植(IVF-ET)时PCOS组和正常组的黄素化颗粒细胞进行体外原代培养,在其培养的不同时间(0 h、48 h、120 h)分别添加8-Br-cAMP(2 mmol/L)和/或睾酮(10-7mol/L)于无血清培养液(TCM199)中,共培养3 h后收集培养上清及细胞。用放射免疫法(RIA)测定颗粒细胞分泌E2量;用考马斯亮蓝G 250/BSA测定颗粒细胞蛋白含量,以校正E2含量。结果:睾酮在0 h、48 h、120 h显著刺激PCOS组颗粒细胞分泌E2的量(P<0.05);8-Br-cAMP在0 h、48 h、120 h均不影响PCOS组颗粒细胞分泌E2的量(P>0.05);8-Br-cAMP和睾酮联合作用在0 h、48 h、120 h显著刺激PCOS组颗粒细胞分泌E2的量(P<0.05)。结论:①睾酮促进PCOS患者卵巢颗粒细胞内芳香化酶的作用;②8-Br-cAMP加速PCOS患者卵巢颗粒细胞内雄激素向雌激素的转化;③8-Br-cAMP和睾酮协同调节颗粒细胞芳香化酶活性作用。

桂枝汤对体温双向调节作用机理探讨—对下丘脑中腺苷酸环化酶活性及环一磷酸腺苷含量的影响

:桂枝汤在对两种不同体温状态模型大鼠呈现解热或升温作用的同时 ,对酵母诱导的发热大鼠 ,可显著抑制其下丘脑中AC活性 ,降低异常升高的cAMP含量 ;而对安痛定诱导的低体温大鼠 ,又可显著增强其下丘脑中AC活性 ,增加异常降低的cAMP含量。实验结果提示 :桂枝汤对体温的双向调节作用可能部分是通过影响AC活性 。

腺苷-3’,5’-环磷酸-氧蒽酮希夫碱的合成及其与LC3B的绑定结合

目的:设计合成具有LC3B绑定功能的腺苷-3’,5’-环磷酸-氧蒽酮希夫碱(S1),研究其对LC3B的作用机制。方法:以紫外-可见光谱表征S1和LC3B的分子结合动力学,运用一级反应动力学进行数据拟合,采用荧光光谱测定二者的结合常数和热力学常数,推导出分子结合机制。结果:S1在160 s快速结合LC3B,结合过程满足一级反应动力学方程和药物的定比转运规律,热力学研究发现S1与LC3B结合的吉布斯自由能变化小于零,为自发结合过程,焓变小于0进一步表明S1和LC3B通过静电吸引结合,导致S1的荧光猝灭,S1通过希夫碱的C=N官能团与LC3B发生相互作用。结论:S1可以自发地通过静电作用绑定细胞自噬标志物LC3B。

β_3受体激动剂对培养的大鼠心肌细胞搏动频率和细胞内环一磷酸腺苷水平的影响

目的 :观察 β3 受体激动剂 (BRL 37344 )对培养的大鼠心肌细胞搏动频率和细胞内环 -磷酸腺苷 (cAMP)水平的影响 ,以探讨 β3 受体在心肌细胞中的作用。方法 :分离培养乳鼠心肌细胞 ,随机分为八组 :对照组、ISO组、Nadolol+ISO组、BRL组、PTX +BRL组、L NAME +BRL、Nadolol+BRL组和Bupranolol+BRL组 ,观察心肌细胞搏动频率 ,并应用酶联免疫方法测定cAMP含量 ,逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)方法测 β3 受体mRNA表达。结果 :ISO(非选择性 β受体激动剂 )可显著增加心肌细胞搏动频率和升高cAMP水平 ,这种作用可被Nadolol(为 β1,β2 受体抑制剂 )阻断。BRL 37344可显著降低心肌细胞搏动频率和cAMP含量 ,这种作用可被PTX(Gi 蛋白抑制剂 )和Bupranolol(非选择性 β受体阻滞剂 )完全阻断 ,同时可被L NAME(一氧化氮合酶抑制剂 )部分阻断 ,不受Nadolol影响。RT PCR方法测出心肌细胞中有 β3 受体mRNA表达。结论 :心肌细胞中存在 β3 受体 ,它在心肌表现为负性变力作用 ,β3 受体的效应不受 β1,β2 受体抑制剂影响。心脏 β3 受体信号途径中可能有Gi 蛋白的参与 ,并且经过一氧化氮合酶途径发挥其作用。

热应激时家兔脑脊液和血桨环—磷酸腺苷含量

本实验用白色家兔,在常温(20±1℃)和高温环境(40±1℃)时,分别记录动物的直肠温度,并分别从动物的小脑延髓池抽取脑脊液(C. S. F. ),从耳缘静脉采血,用蛋白结合法测脑脊液(C. S. F. )和血浆中(cAMP)含量。动物在常温(对照组)和高温环境(热应激组)的平均直肠温度相比较,两者有显著性差异。而动物在常温及热应激时C. S. F. 和血浆中cAMP含量其差异均不显著。表明热应激时体温虽有显著升高而不能引起C. S. F. 和血浆中cAMP含量的增加。说明既往实验发热时体温升高很可能是由于C. S. F. 中cAMP含量增加所致。

环磷腺苷葡甲胺与氨力农治疗充血性心力衰竭的疗效比较

目的：比较环磷腺苷葡甲胺（ＭＣＡ）与氨力农治疗充血性心力衰竭的疗效。方法：充血性心力衰竭病人８０例分为ＭＣＡ组与氨力农组。ＭＣＡ组５０例，以ＭＣＡ１８０ｍｇ加于５％葡萄糖注射液２５０ｍＬ中静脉滴注（静滴）２ｈ，ｑｄ，共１４ｄ。氨力农组３０例，以氨力农注射液５０ｍｇ加于０．９％氯化钠注射液２０ｍＬ中静脉推注，再以１５０ｍｇ加于０．９％氯化钠注射液２５０ｍＬ中静滴２ｈ，ｑｄ，共１４ｄ。结果：ＭＣＡ组与氨力农组的临床总有效率分别为８８％和８７％，２组对左室收缩功能均有明显改善，未见不良反应。

环磷腺苷注射液治疗扩张型心肌病重度心力衰竭28例临床观察

目的：观察环磷腺苷注射液治疗扩张型心肌病重度心力衰竭的疗效。方法：扩张型心肌病重度心力衰竭例58例,随机分为治疗组（28例）,对照组（30例）。扩张型心肌病病例系按1995年世界卫生组织及国际心脏病学会（WHO/ISFC）定义选择入围。NYHA心功能达Ⅲ-Ⅳ级者入选,共58例,其中治疗组Ⅳ级18例,Ⅲ级10例,对照组Ⅳ级16例,Ⅲ级有14例。两组均予地高辛、速尿、安体舒通、卡托普利治疗,其中治疗组加用环磷腺苷注射液40 mg加入生理盐水或5%葡萄糖注射液250 ml静脉滴注,1次/d,10-15 d为一疗程。结果：治疗组总有效率78.6%,显著优于对照组的总有效率46.7%（P〈0.05）,且治疗组心脏左室射血分数改善（31.71%-43.29%）明显好于对照组（32.30%-37.43%）,P〈0.05。结论：在传统治疗基础上,加用环磷腺苷注射液能进一步改善扩张型心肌病重度心力衰竭的心功能,提高临床疗效。

胡黄连苷Ⅱ调节cAMP/PKA信号轴对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响

目的探讨胡黄连苷Ⅱ(PicrosideⅡ,PⅡ)对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠神经功能恢复的影响及对环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)信号通路的调节作用。方法建立SCI大鼠模型,大鼠分为正常组(CT组)、SCI模型组(SCI组)、PⅡ低剂量组(PⅡL组,5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、PⅡ高剂量组(PⅡH组,20 mg·kg^(-1)·d^(-1))和PⅡ高剂量+PKA抑制剂组(PⅡH+H-89组,20 mg·kg^(-1)·d^(-1) PⅡ+5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组18只。Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评价SCI大鼠运动功能,HE染色评价脊髓组织病理学特征,劳克坚牢蓝(LFB)染色观察脱髓鞘情况,免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙结合适配器分子-1(IBA-1)表达,ELISA检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、环腺苷酸(cAMP)的含量,Western blot检测磷酸化(p)-PKA、PKA、p-环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(CREB)、CREB蛋白表达。结果与CT组比较,SCI组大鼠脊髓组织缺损、空腔,大量炎性细胞浸润,脱髓鞘以及GFAP、IBA-1、MDA表达增加,BBB评分以及SOD、cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达减少(P<0.05);与SCI组比较,PⅡL组、PⅡH组组织损伤改善,空腔及炎性细胞减少,脱髓鞘以及GFAP、IBA-1、MDA表达降低,BBB评分以及SOD、cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达增加(P<0.05);与PⅡH组比较,PⅡH+H-89组组织损伤严重,脱髓鞘以及GFAP、IBA-1、MDA表达增加,BBB评分以及SOD、cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达减少(P<0.05)。结论PⅡ可能通过激活cAMP/PKA信号轴促进SCI大鼠神经功能恢复。

柴胡对腺苷酸环化酶的影响

本文以中国名药柴胡对腺苷酸环化酶活性的影响进行研究,同时以腺苷酸环化酶激活剂多巴胺作对照。结果表明,柴胡对小鼠肝细胞匀浆和艾氏腹水癌细胞的腺苷酸环化酶活性有较明显激活作用,其激活强度随柴胡浓度的增加而加强。在一定剂量范围内,药物浓度与酶反应速度呈现良好的线性关系。

右美托咪定通过cGAS-STING通路介导的免疫调控机制对胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究右美托咪定(DEX)通过环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)通路介导的免疫调控机制对胃癌(GC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:将GC细胞株MGC-803随机分为对照组(Control组,空白培养基处理)、DEX低浓度组(DEX-L组,1 ng/ml)、DEX中浓度组(DEX-M组,10 ng/ml)、DEX高浓度组(DEX-H组,100 ng/ml)和DEX高浓度+cGAS抑制剂RU.521组(DEX-H+RU.521组,100 ng/ml DEX+1.0μmol/L RU.521)。CCK-8法检测细胞增殖情况。细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力。Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡率。ELISA检测细胞中IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞cGAS、STING、Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)mRNA的表达水平。Western blot检测细胞cGAS、STING、Bax、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、Caspase3、Caspase8及其剪切型蛋白表达和TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)磷酸化水平。结果:与Control组相比,DEX-M组、DEX-H组MGC-803细胞迁移率、细胞侵袭数目、TNF-α水平、CyclinD1、MMP9、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著下降(P<0.05),生长抑制率(48 h、72 h)、细胞凋亡率、IL-2、IFN-γ、Bax、E-cadherin、Cleaved Caspase3、Cleaved Caspase8蛋白表达水平、cGAS、STING、IFN-ⅠmRNA水平和蛋白表达水平、TBK1和IRF3磷酸化水平显著上升(P<0.05)。RU.521减弱了DEX对GC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用和诱导细胞凋亡的能力,减轻了对免疫功能的改善作用。结论:DEX可能通过激活cGAS-STING通路介导的免疫调控,抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭,诱导GC细胞凋亡。

蛋白质翻译后修饰对环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶功能的调控

环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子信号通路是细胞感知细胞质中异常存在的双链DNA的主要效应器,对于该信号通路的调节,可以通过调控细胞质内DNA识别受体环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶的功能来完成。近年来研究发现,蛋白质翻译后修饰,包括磷酸化、乙酰化、泛素化、甲基化、类泛素修饰等在固有免疫信号通路的调节中具有重要功能。本文就蛋白质翻译后修饰如何通过不同的机制对环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶的功能及其下游的信号通路产生多种多样的影响进行阐述。

DARPP-32磷酸化与止颤汤改善大鼠帕金森病运动并发症的研究

目的观察纹状体多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)(Thr34)磷酸化与止颤汤对大鼠帕金森病运动并发症的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射于大鼠脑部黑质造成帕金森病(PD)模型,进一步予以左旋多巴/苄丝肼腹腔注射制作异动症(LID)模型。实验设立正常组,LID模型组,LID西药组及小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组,并采用免疫组化法观察各组大鼠DARPP-32(Thr34)磷酸化的表达情况。结果免疫组化显示,假手术组DARPP-32(Thr34)磷酸化表达明显低于模型组(P<0.01)。中药小剂量组、中剂量组、大剂量组DARPP-32磷酸化表达与西药组表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组磷酸化与小剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论止颤汤可有效降低纹状体DARPP-32(Thr34)磷酸化的表达,可能是止颤汤治疗异动症的机制。

恩他卡朋对异动症大鼠行为学及其纹状体区DARPP-32磷酸化表达的影响

目的:研究左旋多巴/卡比多巴与左旋多巴/卡比多巴/恩他卡朋诱发异动症模型大鼠的行为学特点,以及纹状体区多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)磷酸化状态的改变。方法:成功建立的帕金森病模型大鼠29只随机分为4组:生理盐水组(NS)5只,左旋多巴/卡比多巴组(LC)8只,恩他卡朋等效剂量组(LCE)8只,恩他卡朋额外添加组(LCE+)8只。分别予以相应药物灌胃,共给药28 d。开始灌胃后的第1、4、8、12、16、20、24、27 d进行行为学观察。通过western blot检测纹状体区DARPP-32磷酸化水平。结果:LCE组AIM评分为(21.7±10.2)分,LC组AIM评分为(22.2±11.1)分,差异无统计学意义(P>0.05);且2组各时间点AIM评分差异无统计学意义(P>0.05)。LCE+组AIM评分为(28.6±14.9)分,高于LCE组和LC组(均P<0.05);自第8天起,LCE+组AIM评分开始高于LC组和LCE组(均P<0.05)。LCE组、LCE+组与LC组毁损侧DARPP-32磷酸化水平均高于各组健侧水平(均P<0.05);LCE+组毁损侧DARPP-32磷酸化水平高于NS组、LCE组和LC组毁损侧(均P<0.05),LCE组和LC组毁损侧DARPP-32磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在等效剂量水平下添加恩他卡朋作为左旋多巴添加治疗不会增加或减少异动症发生。