亲环蛋白B在脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨亲环蛋白B(cyclophilin B,PPIB)在脑胶质瘤中的表达与临床病理特征、患者生存期的关系,以及与肿瘤相关巨噬细胞浸润的相关性。方法基于癌症基因组数据集(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库资料,比对正常、低级别和高级别脑胶质瘤中PPIB的表达情况,采用免疫组织化学染色方法检测脑胶质瘤病理组织中PPIB的表达;基于TCGA数据库临床病例资料,分析脑胶质瘤PPIB表达与临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法评估PPIB表达差异对脑胶质瘤患者生存期的影响;免疫荧光法分析脑胶质瘤病理组织中PPIB表达及其与肿瘤相关巨噬细胞浸润的相关性。结果高级别脑胶质瘤中PPIB的表达明显高于正常组织及低级别脑胶质瘤;PPIB与胶质瘤级别、IDH野生型、1p/19q非共缺失等显著相关(P<0.001);PPIB高表达患者的总生存期、无进展间隔期均低于PPIB低表达患者;除高级别脑胶质瘤病理组织中PPIB表达升高外,PPIB高表达区域伴随大量肿瘤相关巨噬细胞浸润。结论相较于低级别胶质瘤,高级别胶质瘤PPIB表达水平更高,且PPIB表达区域存在明显肿瘤相关巨噬细胞浸润。提示PPIB可能作为脑胶质瘤患者独立预后因素,为患者预后判断提供参考。

Exendin-4抑制亲环蛋白A减轻动脉粥样硬化模型小鼠病理表型

目的探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂exendin-4影响亲环蛋白A(CyPA)分泌抑制小鼠动脉粥样硬化(AS)及血管钙化过程的作用。方法将20只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组和exendin-4组,每组10只,高脂饲料喂养建立AS模型,另取10只野生型C57BL/6J小鼠作为对照组,exendin-4组腹腔注射GLP-1R激动剂exendin-4,1次/d,持续8周。8周后,ELISA法测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、CyPA表达水平,甲基麝香草酚蓝比色法检测血清钙水平,油红O染色检测主动脉粥样硬化斑块,HE染色观察主动脉病理学变化,Von Kossa染色观察主动脉钙盐沉积,免疫组织化学、Real-time PCR及Western blotting检测主动脉Runt相关转录因子2(RUNX2)与骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达水平,免疫荧光染色检测主动脉CyPA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C、Ca、CyPA水平升高(P<0.05),主动脉粥样硬化斑块面积均增加(P<0.05),主动脉壁明显增厚且出现大量炎性细胞浸润及钙盐沉积,主动脉组织RUNX2与BMP-2的mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05),主动脉组织内CyPA表达增强。与模型组比较,exendin-4组小鼠血清中TG、TC、LDL-C、Ca、CyPA水平降低(P<0.05),主动脉粥样硬化斑块面积均减少(P<0.05),主动脉壁增厚与炎性细胞浸润现象明显改善,钙盐沉积减少,主动脉组织RUNX2与BMP-2的mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05),同时,主动脉组织内CyPA表达减弱。结论GLP-1受体激动剂exendin-4能够抑制小鼠动脉粥样硬化及血管钙化,其机制可能与减少CyPA的分泌相关。

液相色谱-串联质谱法测定SD大鼠全血中新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001浓度

建立了液相色谱-串联质谱法测定新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001在SD大鼠全血中的浓度。样品前处理采用简单的蛋白沉淀法,色谱分离在Gemini C18110,色谱柱(50 mm×2 mm,5μm)上进行,以含10 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液作为流动相A,含0.1%甲酸的甲醇溶液作为流动相B,在0.8 mL/min流速下梯度洗脱。待测物RN-0001和内标环孢菌素A的检测采用正离子电喷雾多反应监测模式,其检测离子对分别为m/z 645.4/156.2和m/z 601.8/156.1。RN-0001在30.0 ng/mL~30.0μg/mL浓度范围内线性关系良好(r 2>0.9961),定量下限为30.0 ng/mL,批内和批间的精密度小于5.2%,批内和批间准确度在-3.6%~6.7%之间。RN-0001基质样品在室温放置18 h,-80℃冰箱放置40天以及经过5次冻融循环后均稳定。SD大鼠尾静脉注射3 mg/kg的RN-0001注射液进行药代动力学研究,RN-0001的半衰期t 1/2为3.53 h,峰浓度C 0为9370 ng/mL,血药浓度-时间曲线下面积AUC 0-24 h为5300 h·ng/mL。结果表明,所建方法适用于RN-0001在SD大鼠体内的药代动力学研究。

植物环蛋白的结构

简要介绍了植物环蛋白的定义、结构特点、研究历史、分布、提取分离方法、化学合成与生物合成、生物活性与生物功能。并主要以从紫花蔓地丁(Viola labridorica)中分离得到的六个环蛋白之一,cy-cloviolacinO2为例介绍通过还原酶解-质谱与二维核磁共振谱结合鉴定环蛋白结构的研究方法。

鳜亲环蛋白A在传染性脾肾坏死病毒增殖中的作用

为研究鳜亲环蛋白(CypA)在传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)感染中的作用,通过RT-PCR克隆了CypA全长开放读码框(SC-CypA)。结果表明SC-CypA基因全长495 bp,编码164个氨基酸,分子量为17.59 ku。通过Blast比对和同源性进化分析,发现其与人、鼠、原鸡和斑点鲖等物种的CypA具有高度相似性,表明SC-CypA属于CypA家族的成员。环孢素A(CsA)具有免疫抑制作用,是CypA的抑制剂。结果发现,CsA浓度与ISKNV增殖具有一定的剂量依赖关系;CsA作用不同时间对ISKNV均有抑制效果;CsA对ISKNV感染诱导的细胞因子的表达具有调节作用,能抑制IL-1β、IL-8、IL-18和ISG15的表达。研究表明,宿主的CypA对ISKNV的增殖起着重要的作用,通过添加其抑制剂CsA能有效抑制病毒的增殖。

硫氧环蛋白相互作用蛋白与糖尿病关系的研究

目的研究高糖环境下INS-1细胞中硫氧环蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)的表达对胰岛素分泌的影响以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)、艾塞那肽(Exenatide,Ex-4)的保护作用。方法以含11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI 1640培养液培养INS-1细胞,当细胞生长至80%融合时,分别转入含有4.0 mmol/L葡萄糖(NG组)、16.7 mmol/L葡萄糖(HG组)及16.7 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L NAC(HG+N组)、16.7 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L Ex-4(HG+E组)的RPMI 1640培养液中继续培养48 h;采用real-time PCR法检测TXNIP、胰岛素基因及胰岛素转录因子MafA的mRNA水平。结果HG组与NG组比较,TXNIP mRNA的表达明显上升,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01)。HG+N组、HG+E组与HG组比较,TXNIP mRNA的表达均明显下降,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显提高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论高浓度葡萄糖可通过介导TXNIP的过度表达而导致胰岛素基因及MafA表达下降;特异性地抑制高糖下TXNIP的过度表达可以恢复胰岛素基因及MafA的表达。

家蚕亲环蛋白A基因(BmCyPA)的克隆与表达分析

亲环蛋白(CyP)能与免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)结合而作为CsA的胞内受体。在已构建的家蚕蛹cDNA文库中获得了家蚕亲环蛋白A(BmCyPA)基因的cDNA序列。利用生物信息学方法对此序列的开放阅读框(ORF)和序列同源性等进行分析,并以家蚕蛹总RNA反转录的cDNA为材料克隆了BmCyPA,通过原核表达目的蛋白后,将纯化的BmCyPA融合蛋白免疫新西兰兔得到抗血清,Western blotting检测目的蛋白在蚕体中得到表达。利用荧光定量PCR方法检测家蚕5龄幼虫各组织中BmCyPA mRNA的转录水平,由高到低依次为脂肪体、丝腺、中肠、马氏管、表皮、头部、气门、卵巢;Western blotting检测BmCyPA在5龄幼虫各组织中的表达水平,由高到低依次为脂肪体、气门、表皮、马氏管、中肠、丝腺、头部和卵巢。亚细胞定位显示Bm-CyPA在细胞质与细胞核中均有分布。推测BmCyPA与家蚕的生长发育以及促进蛋白质折叠和介导免疫应答等有密切联系。

银杏内酯对过氧化氢损伤的皮层神经元和SH-SY5Y细胞亲环蛋白A(CypA)表达的影响

目的:研究银杏内酯(ginkgolides,Gin)对过氧化氢(H2O2)诱导的皮层神经元及SH-SY5Y细胞(神经母细胞瘤细胞)损伤的保护作用及其机制。方法:在培养1周的小鼠皮层神经元培养基中加入H2O2,建立神经元氧化损伤模型,用同样方法建立SH-SY5Y细胞氧化损伤模型。采用MTT比色法检测细胞活力,Western Blot技术分析亲环蛋白A的表达变化。结果:H2O2可诱导神经元和SH-SY5Y细胞损伤,使细胞活力降低,可下调亲环蛋白A的表达;Gin预处理12 h可提高细胞活力,可使亲环蛋白A表达增加。结论:Gin可抑制H2O2引起的神经元及SH-SY5Y细胞损伤,该保护作用与其上调亲环蛋白A的表达有关。

亲环蛋白D和线粒体相关的细胞坏死

线粒体是细胞内一种重要的细胞器,与许多细胞生理过程密切相关,最新研究表明,线粒体通透性转变孔的一个成员亲环蛋白D与细胞坏死有着紧密联系,线粒体通过亲环蛋白D调节的通透性转换而决定着细胞的命运,从而使我们对线粒体和亲环蛋白D的功能有了更为全面的认识。

大豆亲环蛋白基因的克隆与分析(英文)

亲环蛋白 (cyclophilin)基因广泛地存在于动植物中。在植物中 ,该基因受许多非生物 (abiotic)因子和化合物的调节。利用RT_PCR的方法克隆了一个大豆 (GlycinemaxL .)亲环蛋白基因 (GmCyp1)。该基因的氨基酸与一个菜豆亲环蛋白蛋白质序列的同源性达 91%。Southern杂交结果表明GmCyp1以一小家族存在。用来源于酵母细胞壁成分的激发子处理大豆悬浮细胞 ,发现GmCyp1的表达在所观察的时间范围内没有明显的变化 。

硫氧环蛋白过氧化物酶3对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的影响

目的观察硫氧环蛋白过氧化物酶3(Prdx-3)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养心肌细胞(H9C2)随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+转染对照组和AngⅡ+Prdx-3转染组。脂质体转染法将Prdx-3表达质粒转染心肌细胞,Western blot法检测Prdx-3蛋白表达,Real-time PCR法检测脑钠素(BNP)m RNA表达,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prdx-3表达质粒转染心肌细胞后,Prdx-3蛋白表达值为(0.88±0.12),高于转染对照组(0.38±0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,AngⅡ组BNP m RNA[(1.00±0.00)比(1.72±0.29)]、ROS[(3473±81)比(4439±111)]及Prdx-3蛋白表达水平[(0.33±0.05)比(0.72±0.14)]均明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。AngⅡ+转染对照组和AngⅡ组的BNP m RNA[(1.72±0.29)比(1.94±0.34)]、ROS[(4439±111)比(4285±167)]及Prdx-3蛋白水平[(0.72±0.14)比(0.75±0.11)]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+Prdx-3转染组BNP m RNA[(1.72±0.29)比(1.29±0.15)]和ROS水平[(4439±111)比(3648±254)]明显下降,但Prdx-3蛋白水平[(0.72±0.14)比(1.89±0.37)]显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 AngⅡ可通过ROS诱导心肌细胞肥大,而Prdx-3通过降低ROS抑制AngⅡ的作用。

嗜水气单胞菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库的构建和亲环蛋白基因序列的初步分析

实验利用灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)诱导处于四龄池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)14h,将诱导后的池蝶蚌血细胞的总RNA进行逆转录,用LD-PCR法合成双链cDNA,从而首次成功构建池蝶蚌血细胞的全长cDNA文库。原始文库的滴度为4×106 cfu/cm3,重组率为90%,扩增后文库的滴度为3.55×109 pfu/mL。目前文库已随机测序672个样品,将所得双向序列进行拼接,去除载体,并多序列比对去除重复序列后,发现436条为已知功能序列,其余为未知功能序列。序列中最小长度270 bp,最大长度为2153 bp,平均大小608.6 bp,表明插入片段大小理想。从文库中筛选获得免疫相关基因池蝶蚌亲环蛋白A(HsCyp A)全长基因并进行序列分析。结果显示,HsCyp A全长1229 bp,序列包括52 bp的5′非编码区、495 bp的开放阅读框、682 bp的3′非编码区和29 bp的poly(A)尾,没有明显的加尾信号。对Cyp A氨基酸序列二级结构进行了较详细的分析并进行了三维建模,同时构建了其系统进化树,分析表明亲环蛋白家族是一个在进化上非常保守的蛋白家族。综合分析,Cyp A在水生动物中不仅仅只是一种组成型蛋白,而是可能在病原感染防御中发挥重要作用。

亲环蛋白A对动物病毒感染的调控及其分子机制

传统的抗病毒策略多以病毒自身为靶点,随着天然免疫研究的不断深入,宿主的一系列抗病毒靶点相继被鉴定。亲环蛋白A(Cyclophilin A, CypA)是亲环蛋白(Cyclophilins, Cyps)家族中含量最丰富、被研究最多的一个成员。CypA不仅具有多种生理功能,也广泛参与到多种病毒的感染过程中,其作为抗病毒制剂的靶点近来也不断被关注。本文综述了CypA对不同动物病毒感染的调控作用及其分子机制,对于新型抗病毒策略的探索具有重要意义。

细胞亲环蛋白A对猪瘟病毒增殖的影响

细胞亲环蛋白A(CyPA)在多种病毒感染中起重要的调控作用。本实验室前期蛋白质组学研究表明,猪瘟病毒(CSFV)感染PK-15后细胞的CyPA明显上调表达。为研究CyPA在CSFV增殖中的作用,本研究首先采用环孢素A(CsA)处理PK-15细胞,特异性地抑制CyPA顺反异构酶活性,观察对CSFV的影响,在CsA处理后24 h、48 h、72 h收集细胞和细胞冻融上清,进行病毒基因组拷贝数和病毒滴度测定。结果表明CsA处理能够抑制CSFV在PK-15细胞中的增殖。同时,采用RNA干扰方法,下调PK-15细胞中CyPA的表达,结果也能够抑制CSFV在细胞中的增殖。本研究结果证明CyPA对CSFV在PK-15细胞中的增殖具有调控作用,对进一步阐明CSFV与宿主细胞蛋白的相互作用具有重要意义。

亲环蛋白的结构、细胞定位和生物学功能

亲环蛋白(cyclophilin,CyP)家族是一类广泛存在于原核和真核生物体内,并在结构上高度保守的多功能蛋白质。该家族属于具有催化含脯氨酸的寡肽底物顺反异构作用的肽脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerases,PPIase)。CyP通过催化含肽脯氨酰的顺反异构而帮助蛋白质折叠和组装。此外,CyP还起着分子伴侣的作用,在应激反应中参与调节信号转导途径,并影响RNA的剪接过程。自最初CyP作为免疫抑制剂环孢素A(cyclosporin A,CsA)的细胞受体被发现以来,目前大约有130种CyP同源异构体被发现和克隆。CyP家族各成员间不仅分子量不同,而且在细胞分布及功能上也存在着差异。现从CyP的结构、细胞定位及其功能等3个方面对其作一阐述。

小球藻亲环蛋白A(CyPA)基因克隆及表达特性分析

亲环蛋白广泛存在于生物体中,并发挥着重要的作用。本研究从小球藻cDNA文库中筛选获得亲环蛋白A(CyPA Gene);通过提取转化35S::CyPA::GFP融合质粒拟南芥的原生质体研究表明,CyPA定位于叶绿体中;过表达CyPA基因的酵母能够增强InV酵母对NaCl、NaHCO3胁迫的生长能力;通过实时定量PCR研究表明,在非生物胁迫的条件下,CyPA基因的表达量升高,推测CyPA基因与非生物胁迫抗性相关,亲环蛋白A参与生物体的抗逆生存能力。

重组亲环蛋白A的可溶性表达

为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入EscherichiacoliBL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g?L-1,酵母提取物10 g?L-1,NaCl 5 g?L-1,甘露醇10 g?L-1,Amp50 mg?L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol?L-1IPTG诱导,然后在30℃、180 r?min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg?L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%.

家蚕亲环蛋白基因家族(BmCyPs)

家蚕亲环蛋白基因家族(CyPs)在全基因组水平由18条相似序列组成,与人CyPA在氨基酸序列上具有较高的同源性。结构域分析显示家蚕CyP基因家族可分为单一结构域(SD)和多结构域(MD)两类,无根进化树将18个家族基因分为两枝。本论文根据功能元件相似性预测了家蚕CyP单一结构域(SD)和多结构域(MD)基因的功能,并通过序列氨基酸位点的置换、缺失和插入分析推测位于胞质Cyclophilin基因的功能差异,这些功能差异使蛋白质在三维结构上发生或小或大的变化导致与底物结合的特异性。

亲环蛋白A与口腔恶性肿瘤间的关系

亲环蛋白A是一类在生物界广泛存在、高度保守的蛋白质,有多种生物学功能并参与多种生理病理过程。下面就其在肿瘤尤其是在口腔鳞状细胞癌的发生、侵袭、增殖、血管生长等过程中的作用作一综述。

小鼠抗人亲环蛋白A(CypA)单克隆抗体的制备和应用

目的原核表达人亲环蛋白A (CypA)、制备抗人亲环蛋白A (CypA)单克隆抗体(mAb)并初步探索其在结肠癌发生发展中的作用。方法根据CypA基因序列,以原核表达系统表达CypA重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,免疫小鼠,杂交瘤法制备mAb;采用免疫组织化学染色法检测CypA在结直肠癌与癌旁组织中的差异表达,并分析与临床病理参数的相关性。结果成功构建了CypA原核表达载体,获得纯化的目的蛋白;获得1株稳定分泌抗人CypA mAb的杂交瘤细胞株;研究表明,结直肠癌组织CypA阳性染色率显著增高并与肿瘤分化程度及淋巴结转移相关。结论成功制备了小鼠抗人CypA mAb,并发现CypA在结直肠癌组织中高表达,与低分化和淋巴结转移呈正相关。