环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)翻译后修饰在固有免疫中的研究进展

环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)作为一种核酸转移酶,主要通过感受核酸、激活下游通路并调控Ⅰ型干扰素的合成参与固有免疫反应。cGAS蛋白功能的调节与细菌病毒感染、自身免疫系统疾病及肿瘤等多种疾病相关,而翻译后修饰是目前研究最深入和广泛的cGAS蛋白功能调节方式之一。cGAS蛋白翻译后修饰主要有磷酸化、乙酰化、泛素化、小泛素相关修饰(SUMO)化、肽链剪切及谷氨酰化。本文不但系统总结了不同生理和病理条件下cGAS的翻译后修饰如何调控cGAS功能,而且深入挖掘了以cGAS翻译后修饰作为疾病治疗靶点的潜力。

肿瘤免疫微环境中cGAS-STING信号通路的细胞间信号传递

环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路是肿瘤免疫治疗中备受关注的靶点。模式识别受体cGAS识别胞质双链DNA(dsDNA),生成第二信使2´3´-环鸟苷酸-腺苷酸(cGAMP),活化接头蛋白STING,介导干扰素和促炎性细胞因子的产生,从而促进肿瘤免疫。肿瘤免疫微环境中cGAS-STING通路的细胞间信号传递维持并增强天然免疫应答,推动适应性免疫的发展。基于膜系统的细胞外囊泡运输、吞噬作用和细胞膜融合传递dsDNA、cGAMP以及活化的STING蛋白,加强免疫监视和炎症应答。基于膜蛋白的缝隙连接、膜转运蛋白传递cGAMP和dsDNA对免疫调节至关重要。此外,配体-受体反应传递干扰素进一步放大抗肿瘤免疫反应。本文描述了肿瘤免疫微环境中cGAS-STING通路的细胞间信号传递及其调控,讨论这些机制如何影响和调节肿瘤免疫过程,以及针对这些信号传递机制的潜在干预和免疫治疗策略。

微核激活cGAS-STING信号通路的机制及其肿瘤免疫功能

环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路可监测微生物入侵和组织损伤等生理病理异常状态,是天然免疫系统的重要组成之一。作为DNA感受器,cGAS主要识别异常定位于细胞质的双链DNA(dsDNA),通过催化合成二级信使环鸟苷酸-腺苷酸启动由STING介导的Ⅰ型干扰素和炎症信号通路。微核是有丝分裂后期染色体错误分离的产物,也是细胞质dsDNA的重要来源之一。作为一类不稳定的亚细胞器结构,微核核膜倾向于不可逆的破裂,导致微核基因组DNA暴露在细胞质中。暴露的微核基因组DNA招募并激活cGAS-STING信号通路,诱导STING下游信号通路活化,包括Ⅰ型干扰素信号通路和经典核因子κB(NF-κB)信号通路,导致细胞衰老、细胞凋亡和细胞自噬的发生,从而介导免疫系统的活化以清除肿瘤细胞,或者直接诱导肿瘤细胞死亡。另外,STING持续激活诱导的内质网应激,以及慢性Ⅰ型干扰素信号通路和非经典NF-κB信号通路的活化,营造了免疫抑制的肿瘤微环境,导致肿瘤细胞免疫逃逸,促进肿瘤转移和肿瘤细胞存活。因此,在肿瘤的发生发展和治疗过程中,活化的cGAS-STING免疫通路扮演着抑制或促进肿瘤的双重作用。本文阐述了肿瘤微环境中微核诱导cGAS-STING免疫通路活化的机制研究进展,探讨了其在肿瘤发生发展和治疗中的潜在重要作用。

cGAS-STING信号通路在结直肠癌治疗中的应用进展

环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)是一种DNA传感器,其在外源性DNA的刺激下能激活干扰素基因刺激因子(STING),诱导Ⅰ型干扰素和其他促炎性细胞因子的产生;且cGAS-STIGN信号通路的激活还能通过Ⅰ型干扰素促进瘤内CD8+T细胞募集,启动抗肿瘤免疫。目前认为STING激动剂能够作为抗肿瘤治疗的重要辅助药物,有望改善结直肠癌患者的预后,尤其是免疫治疗耐药患者。cGAS-STING信号通路可以通过启动固有免疫、肿瘤免疫以及与自噬相互作用发挥抗肿瘤效应,有望成为一个有效的潜在治疗靶点。

连翘苷调节环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激蛋白信号通路对慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠气道炎症的影响

目的初步探讨连翘苷(Phil)调节环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激蛋白(STING)信号通路对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)大鼠气道炎症的影响,为临床治疗AECOPD提供依据。方法选用8~10周龄雄性SD大鼠84只,按照随机数字表法分为6组,分别为对照组,模型组,Phil低、中、高剂量组,激活剂组,每组14只。除对照组外,其他组均采用气道滴注脂多糖联合烟雾暴露构建AECOPD大鼠模型,建模成功后,Phil低、中、高剂量组大鼠灌胃35、70、140 mg/kg的Phil,激活剂组灌胃140 mg/kg的Phil+尾静脉注射25 mg/kg cGAS-STING信号通路激活剂2.5-己酮可可碱(DMXAA),对照组与模型组灌胃并尾静脉注射等量的生理盐水,每日1次,连续4周;观察大鼠的一般形态,检测各组大鼠肺功能;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用苏木精和伊红(HE)染色法观察大鼠肺组织病理损伤情况;采用原位末端标记法(TUNEL)染色观察大鼠肺上皮细胞凋亡情况;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-1(cleaved Caspase-1)及cGAS-STING通路蛋白表达。采用Graphpad Prism 9.0软件进行t检验、方差分析,两两比较采用SNK-q检验。结果与对照组比较,模型组大鼠气道阻力(RI)、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、肺上皮细胞凋亡率及cleaved Caspase-1、cGAS、STING、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平显著升高,呼气峰值流速(PEF)、吸气峰流速(PIF)、第1秒用力呼气容积/肺活量(FEV_(1)/FVC)比值显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,Phil低、中、高剂量组大鼠RI、IL-6、IL-1β、TNF-α、肺上皮细胞凋亡率及cleaved Caspase-1、cGAS、STING、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平显著降低,PEF、PIF、FEV_(1)/FVC比值显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与Phil高剂量组比较,激活剂组大鼠上述指标变化均显著逆转,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Phil可能通过抑制cGAS-STING通路,改善气道炎症,进而改善AECOPD大鼠肺功能。

cGAS-STING通路异常激活及其抑制剂在免疫和炎症疾病中的研究进展

cGAS-STING通路是针对多种类型病原体进行免疫防御的主要途径之一,环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)通过识别细胞质的DNA分子,催化生成第二信使cGAMP(cyclic GMP-AMP)与干扰素基因刺激因子(STING)结合,诱导产生I型干扰素(IFN-I),激活机体先天免疫系统。cGAS-STING通路的适当激活有助于机体实现自我保护,因此,近年来STING激动剂在肿瘤免疫治疗的研究中引起了广泛关注,一些候选药物已进入临床研究,用于多种肿瘤治疗。与此同时,cGAS-STING通路异常激活会导致自身免疫性疾病的发生,获得了药物研究者的广泛关注并积极开发其抑制剂。该文总结了cGAS-STING通路的机制和调控位点,概述了cGAS-STING通路相关的免疫和炎症疾病及其抑制剂的研究进展。

灯盏花乙素调节cGAS/STING信号通路对创伤性脑损伤大鼠神经炎症的影响

目的 探讨灯盏花乙素(Scu)改善创伤性脑损伤(TBI)大鼠神经炎症的作用及机制。方法 采用改良Feeney法构建TBI大鼠模型。将成模大鼠随机分为TBI组、Scu低剂量组(40 mg/kg)、Scu高剂量组(80 mg/kg)和环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(c GAS)抑制剂组(cGAS抑制剂RU.521,450μg/kg),每组24只;另取24只大鼠作为假手术组。采用改良神经功能缺损评分(mNSS)法评估大鼠神经功能;以干/湿比重法测定大鼠脑含水量;以苏木素-伊红、原位末端标记染色法观察大鼠脑组织病理学变化和细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附检测法测定大鼠脑组织中β干扰素(IFN-β)、CXC趋化因子配体10(CXCL10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量;以Western blot法检测大鼠脑组织中cGAS/干扰素基因刺激蛋白(STING)信号通路相关蛋白的表达情况。结果 与假手术组比较,TBI组大鼠的m NSS,脑含水量,脑组织细胞凋亡率,IFN-β、CXCL10、TNF-α、IL-6含量和cGAS、STING蛋白相对表达水平均显著升高(P<0.05);脑组织存在水肿、出血、神经元病理学损伤。与TBI组比较,各给药组大鼠的上述指标及病理变化均显著改善(P<0.05),且Scu的作用具有剂量依赖性(P<0.05),而Scu高剂量组和c GAS抑制剂组大鼠上述指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Scu可能通过抑制cGAS/STING信号通路激活来减轻TBI大鼠神经炎症,减少其脑组织损伤及细胞凋亡,促进其神经功能恢复。

抗DNA病毒信号通路cGAS-STING的研究进展

病毒感染后,宿主的固有免疫系统快速地识别病毒并作出应答反应,但免疫系统识别和清除病毒的机制尚未完全阐明。研究表明,细胞识别和检测病毒主要通过受体完成,而环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMPAMP synthase,cGAS)是一种新发现的DNA识别受体,它将信号传递给下游的干扰素刺激基因(stimulator of interferon genes,STING)蛋白,诱导产生I型干扰素(type I interferon,IFN-I),从而启动细胞抗病毒免疫反应。本文综述了cGAS-STING信号通路的作用机制及抗病毒相关研究,以期为抗病毒药物的研发提供理论依据。

cGAS-STING通路在抗感染免疫的研究进展

cGAS-STING通路是近年来受到广泛关注的一种天然免疫机制。环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMPsynthase,cGAS)识别胞质DNA后催化ATP、GTP合成环鸟苷酸-腺苷酸(cyclic GMP-AMP,cGAMP),cGAMP进而结合并激活干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING),诱发Ⅰ型干扰素产生等先天免疫反应。越来越多的研究表明,cGAS-STING通路在感染性疾病、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫等发挥重要作用。本文就cGAS-STING通路的激活及其在抗病毒、细菌和寄生虫等病原微生物感染中的免疫反应和作用机制展开综述,以期为感染性疾病治疗靶点的发掘提供新的线索。

cGAS-cGAMP-STING通路在抗病毒中的作用

先天性免疫是宿主防御病原体入侵机体的第一道防线。胞质中异常核酸的检测表明一些保守的病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns)引发了Ⅰ型干扰素(IFN)介导的先天性免疫反应。DNA传感器环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)识别并结合宿主或病原体胞质DNA,促使第二信使环鸟苷酸-腺苷酸(cGAMP)的合成并触发干扰素基因刺激蛋白(STING)依赖性下游信号传导。该文简述了cGAS-cGAMP-STING通路及其在抗病毒研究中的最新进展,为开展病毒防治研究提供新思路,为抗病毒药物的研发提供新的方向。

环鸟苷酸-腺苷酸合成酶及其下游干扰素基因刺激因子信号通路在抗肿瘤免疫中的作用

对于细胞质内DNA片段的识别是固有免疫系统监测病原体人侵的重要机制。环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)及其下游干扰素基因刺激因子(STING)通过促进I型干扰素和其他炎性细胞因子的释放,参与介导基本的抗微生物免疫反应以及适应性免疫的启动。越来越多的证据表明,cGAS-STING信号通路的激活对于抗肿瘤免疫也至关重要。肿瘤细胞由于基因组的不稳定性可能发生细胞核DNA的泄漏,通过细胞内的DNA感应机制激活免疫系统清除肿瘤细胞。文章将讨论cGAS-STING信号通路在肿瘤研究中的最新进展。

利多卡因调节cGAS-STING信号通路对LPS诱导的小胶质细胞炎性损伤的影响

目的探讨利多卡因(Lidocaine,Lido)通过调节环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(Cyclic guanosine monophosphate synthase,cGAS)-干扰素基因刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞炎性损伤的影响及其作用机制。方法0~200μg/mL的利多卡因处理LPS诱导的BV2小胶质细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyl-tetrazolium,MTT)测定细胞活性,选择最佳药物水平;将BV2细胞分为对照组(Control组)、LPS诱导组(LPS组,1μg/mL LPS)、利多卡因低水平组(Lido-L组,2μg/mL Lido+1μg/mL LPS)、利多卡因中水平组(Lido-M组,20μg/mL Lido+1μg/mL LPS)、利多卡因高水平组(Lido-H组,200μg/mL Lido+1μg/mL LPS)和利多卡因高水平+STING激活剂DMXAA组(Lido-H+DMXAA组,200μg/mL Lido+1μg/mL LPS+100μg/mL DMXAA);Griess法检测NO水平;酶联免疫吸附法((Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte ehemoattractant protein-1,MCP-1)、前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)、环氧化酶2(Cyclooxyge-nase 2,COX-2)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(Interleukin,IL)-10和IL-1β水平;Hoechst染色检测细胞凋亡;免疫荧光检测钙离子结合调节因子(Ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba-1)和精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)表达水平;Western blot检测环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(Cyclic guanosine monophosphate synthase,cGAS)、干扰素基因刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)蛋白水平。结果0~200μg/mL的利多卡因能增加LPS诱导的BV2细胞活力,选择2、20和200μg/mL的利多卡因进行后续实验。与Control组比较,LPS组BV2细胞出现大量细胞发生凋亡现象,TNF-α,IL-1β、一氧化氮(Nitric oxide,NO)、PGE2,MCP-1和COX-2水平、Iba-1阳性表达率及Cgas,STING和NLRP3蛋白表达水平显著增高,IL-10水平和Arg-1阳性表达率显著降低(P<0.05);与LPS组比较,Lido-L组、Lido-M组和Lido-H组BV2细胞凋亡逐渐减少,TNF-α,IL-1β,NO,PGE2,MCP-1和COX-2水平、Iba-1阳性表达率及cGAS,STING和NLRP3蛋白表达水平显著降低,IL-10水平和Arg-1阳性表达率显著增高,且呈水平依赖性(P<0.05);与Lido-H组比较,Lido-H+DMXAA组BV2细胞凋亡增加,TNF-α,IL-1β,NO,PGE2,MCP-1和COX-2水平、Iba-1阳性表达率及cGAS,STING和NLRP3蛋白表达水平显著增高,IL-10水平和Arg-1阳性表达率显著降低(P<0.05)。结论利多卡因对LPS诱导的小胶质细胞炎性损伤的保护作用机制可能与抑制cGAS-STING信号通路的激活有关。

人cGAS基因启动子的克隆鉴定及功能初探

目的:构建人环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)基因启动子,确认其活性,进而对转录调控机制进行初步探究。方法:采用PCR方法扩增人cGAS基因5′上游1 254 bp(-1 178^+76 bp)的片段,酶切后连接到pGL3-basic质粒,以该质粒为模板合成不同长度的启动子质粒。通过双荧光素酶报告基因实验验证不同质粒在Hela细胞中的活性,利用生物信息学方法预测启动子区存在的转录因子结合位点。通过点突变实验验证潜在的转录因子结合位点。结果:人cGAS启动子质粒初步构建成功。转染后,cGAS启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加(P<0.05)。人cGAS近端启动子区域(-414^+76 bp)经生物信息学软件分析可能含有Sp1、CREB、USF1、RAP1、C-JUN、OCT-1等转录因子的结合位点。点突变实验证实Sp1、CREB正向调控该启动子区域。结论:人cGAS近端启动子区域(-414^+76bp)存在较强的启动子活性,该区域含有多个潜在的转录因子结合位点。转录因子Sp1、CREB调控人cGAS启动子区。

8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶在顺铂诱导的急性肾损伤中的作用和机制

目的:探讨在顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)中8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)的作用及机制。方法:48只8~10周龄C57BL/6雄性小鼠构建动物模型。24只分为4组,每组6只,分别经腹注射顺铂干预0 h、24 h、48 h和72 h。剩余小鼠也随机分为4组,即生理盐水对照组、顺铂组、OGG1抑制剂组(Th5487组)和顺铂+Th5487组。分别在腹腔注射生理盐水或顺铂和Th5487。留取血液测定肌酐、尿素氮,取肾组织进行病理分析,检测肾组织8-氧代鸟嘌呤含量和超氧化物歧化酶活力,RT-qPCR测定mRNA水平,Western Blot验证OGG1和炎症蛋白表达情况。利用顺铂诱导小鼠肾小管上皮细胞建立体外模型,检测线粒体膜电位改变、活性氧生成情况和蛋白表达变化。结果:在顺铂诱导的AKI模型中,OGG1表达上调,环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)信号轴及炎症反应激活;Th5487可抑制顺铂诱导的组织损伤、cGAS-STING信号轴的激活及炎性反应;在体外,Th5487可减少顺铂诱导的细胞中ROS含量升高及线粒体膜去极化。结论:在顺铂诱导的AKI过程中,OGG1可通过cGAS-STING信号促进肾脏损伤及炎症反应。

cGAS-STING通路在肾脏疾病中的研究进展

环鸟苷酸腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase-stimulator of interferon genes,cGAS-STING)信号通路作为先天免疫系统的重要组成部分,通过激活干扰素调节因子3或核因子-κB,促进Ⅰ型干扰素和炎性因子分泌介导免疫反应,在炎症、感染、细胞稳态、肥胖及器官纤维化发生发展中发挥着重要作用。同时,临床和基础医学研究者日益重视起cGAS-STING通路在肾脏常见疾病中的作用。研究表明,在急性肾损伤中,cGAS-STING通路的激活可以加剧炎症反应;而在慢性肾脏病中,其异常激活与肾脏纤维化的发生和发展密切相关。此外,cGAS-STING通路在肾癌中也发挥着重要的作用。因此,cGAS-STING通路可能成为治疗相关肾脏疾病的新靶点。然而,目前对于cGAS-STING通路在肾脏疾病中的具体作用机制和治疗潜力还需要进一步的研究。为了给临床医生和研究者提供新的思路,本文回顾了近年来cGAS-STING通路在常见肾脏疾病如急性肾损伤、慢性肾脏病、肾癌等方面的研究进展,并强调了该通路作为针对急性肾损伤有效治疗靶点的意义,为肾脏疾病的治疗提供新的视角和方法。

核酸免疫识别的机制和功能及酪氨酸磷酸化修饰调控

核酸天然免疫识别是一种普遍存在且高度保守的免疫应答机制,负责监测和响应病原体入侵或组织损伤,进而在宿主防御、自身免疫反应、细胞命运决定以及肿瘤发生发展中发挥关键作用。酪氨酸磷酸化作为一类主要的蛋白质翻译后修饰机制,在核酸识别通路中发挥重要调控功能。其中,介导核酸免疫识别通路的核心成员环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素基因刺激因子(STING)以及TANK结合激酶1(TBK1)等蛋白均受到酪氨酸磷酸化修饰引发的活性调控,进而影响生理或病理条件下宿主的抗病毒防御和抗肿瘤免疫能力。本文综述了酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸化修饰在核酸免疫识别中的调控作用及研究现状,讨论了靶向酪氨酸磷酸化在抗肿瘤免疫中的功能和潜在应用,以期为理解并拓展全新的抗肿瘤手段提供思路。

基于液质联用技术的环二核苷酸cGAMP定量检测方法的建立与评估

目的:建立基于液质联用技术的定量检测环鸟苷酸-腺苷酸(cGAMP)的方法体系,用于评价细胞内DNA感受器环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)的活性。方法:在人白血病单核细胞系U937中,以脂质体转染鲱鱼精DNA(HT-DNA)的方式诱导cGAMP合成,采用甲醇-乙腈萃取法提取细胞中的cGAMP分子,真空干燥后利用液相色谱-质谱多反应监测技术(LC-MS/MRM)对cGAMP进行定量检测。同时利用蛋白质免疫印迹法和实时荧光定量PCR体系对细胞中cGAMP产生后的常规生物学效应指标进行检测,以评价该方法的可靠性。结果与结论:建立的基于液质联用技术检测方法实现了对细胞中cGAMP分子的定量分析。该方法具有特异性好、灵敏度高的特点,为深入研究cGAS的活性调控机制提供了技术支撑。

cGAS-STING信号通路在自身免疫性疾病中的研究进展

存在于细胞质中的游离DNA可被机体固有免疫系统识别清除,但其具体机制尚不明确。近年来越来越多的研究发现,环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)-干扰素基因刺激蛋白(stimulator of interferon gene,STING)通路参与固有免疫并发挥重要的免疫调控作用。cGAS-STING信号通路参与胞内微生物和自身胞质中异常核酸的识别。该综述阐述cGAS-STING信号通路介导自身免疫性疾病发生发展的相关研究,旨在为自身免疫性疾病的防治寻找有效的靶点。

cGAS通过调控固有免疫应答抑制HTLV-1在HeLa细胞中复制

目的 探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染HeLa细胞过程中的功能及其作用机制.方法 将HeLa细胞与MT2细胞（HTLV-1阳性T细胞）共培养,采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化;构建带有血凝素（HA）标签的cGAS表达质粒,转染入HeLa细胞24 h后与MT2细胞共培养24 h,免疫印迹试验检测HeLa细胞中HTLV-1病毒蛋白Tax和p19的表达量,real-time PCR检测HeLa细胞中HTLV-1病毒基因Tax、p19、Env、HBZ以及px转录本的量,同时免疫印迹试验检测干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平,real-time PCR检测干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达量.结果 与MT2细胞共培养后,HeLa细胞中cGAS的表达升高;转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比,在与MT2细胞共培养后,Tax和p19在蛋白水平上的表达量减少,Tax、p19、EnV、HBZ以及px转录本的量减少,IRF3和p65的磷酸化水平升高,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加.结论 cGAS在HTLV-1感染的HeLa细胞中可能具有促进固有免疫应答并抑制HTLV-1病毒复制的功能.

cGAS识别HTLV-1反转中间体并诱导STING依赖性的固有免疫应答

目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染过程中对病毒反转中间体的识别以及诱导的下游信号通路。方法将生物素标记的HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫共沉淀试验检测cGAS与ssDNA90的相互作用;将HeLa细胞与HTLV-1阳性细胞系MT2共培养,采用免疫共沉淀的方法检测cGAS与干扰素基因刺激蛋白(STING)的相互作用;采用siRNA的方法在HeLa细胞中敲减STING,24 h后再转染入cGAS表达质粒,24 h后与MT2细胞共培养24 h,real-time PCR实验检测HeLa细胞中干扰素(IFN)-β、调节活化正常T细胞表达和趋化因子(RANTES)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、HTLV-1病毒蛋白Tax、p19以及HBZ的表达,免疫印迹检测HeLa细胞中干扰素调节因子3(IRF3)和p65的磷酸化水平。结果cGAS与ssDNA90存在相互作用;cGAS与STING存在相互作用,且作用部位在胞质中;在敲减STING的HeLa细胞中,cGAS过表达对IFN-β、RANTES和TNF-α的表达量无明显影响,对HTLV-1病毒蛋白Tax、p19和HBZ的表达量无明显影响,对IRF3和p65的磷酸化水平无明显影响。结论cGAS可结合HTLV-1的反转中间体ssDNA90并通过STING激活固有免疫应答。