β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷的研究

目的采用β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷,并对其酶水解动力学进行初步研究。方法以HPLC-ELSD法检测水解液中黄芪甲苷及水解产物环黄芪醇-6-O-β-D-葡萄糖苷(CMG)的量,以黄芪甲苷的水解转化率为指标,考察各反应因素对转化率的影响,并对该反应进行动力学研究。结果最佳反应条件为反应温度50℃,溶液pH值5.0,酶浓度460 U/mL,底物初始浓度0.1 mmol/L,反应时间48 h;在此条件下,水解转化率达到90%以上。在最佳反应条件下,该水解反应过程符合单底物Michaelis Menten方程,其中最大反应速率(Vm)值为0.037 mmol/(L.min),米氏常数(Km)值为5.8 mmol/L。结论采用β-葡萄糖苷酶水解黄芪甲苷制备CMG可行;商品化的β-葡萄糖苷酶并非黄芪甲苷的特异性水解酶。

黄芪双向性固体发酵过程中黄芪甲苷的转化研究

目的:研究黄芪双向性固体发酵前后黄芪甲苷的转化。方法:采用HPLC测定法、柱色谱分离法、波谱鉴定技术进行发酵前后的成分变化研究;观察转化产物对血管内皮细胞的抗氧化效应。结果:在黄芪发酵过程中,黄芪甲苷转化形成6-O-β-D-葡萄糖基-环黄芪醇,该转化物具有显著的抗氧化效应。结论:黄芪中有效成分黄芪甲苷经药用真菌(灵芝)双向性固体发酵后发生了生物转化,这一转化具有增效的作用。

大孔吸附树脂分离纯化异黄芪甲苷的工艺

以异黄芪皂苷含量为指标,高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)为检测方法,系统研究了D101大孔吸附树脂分离纯化异黄芪甲苷的吸附性能和洗脱参数.当上样液浓度为1 g.mL-1,上样体积(mL)∶树脂量(g)为3∶1时,D101大孔吸附树脂可100%吸附异黄芪甲苷;流速为5.0BV/h,4BV体积的蒸馏水、30%乙醇、50%乙醇和70%乙醇梯度洗脱时,70%乙醇洗脱液中异黄芪皂苷洗脱率达93.14%.实验结果表明D101大孔吸附树脂对异黄芪甲苷有较好的吸附和解吸性能,适合于异黄芪皂苷的分离纯化,可为大规模制备异黄芪甲苷提供参考.

异黄芪甲苷体外对淋巴细胞和树突状细胞免疫功能的影响

目的研究异黄芪甲苷(6-O-β-D-葡萄糖基-环黄芪醇)对体外淋巴细胞和树突状细胞功能的影响。方法培养巨噬细胞,观察异黄芪甲苷对细胞吞噬中性红能力和白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、IL-2、IL-6分泌功能的影响。MTT法检测异黄芪甲苷对原代培养脾淋巴细胞增殖的影响,并用流式细胞术通过检测CD3、CD19水平,明确异黄芪甲苷分别对T、B淋巴细胞增殖的影响。进一步观察异黄芪甲苷对树突细胞增殖和分泌IL-6、IL-12 p70能力的影响。结果异黄芪甲苷低、中、高3个剂量组可升高巨噬细胞的吞噬功能和分泌IL-6的能力,降低CD3^(+)的比例,升高CD19^(+)的比例,纠正T、B淋巴细胞的紊乱。中、高剂量组可显著升高IL-2水平,增加淋巴细胞的增殖,提高增殖指数(SI),促进树突状细胞(dendritic cells,DC)分泌IL-6和IL-12p70。高剂量组还可升高巨噬细胞分泌IL-1的能力。结论异黄芪甲苷的免疫促进作用机制与促进非特异性免疫吞噬,促进抗原递呈、淋巴细胞增殖和树突细胞分泌能力增强有关。

艾迪注射液的化学成分研究

目的研究艾迪注射液的化学成分。方法利用反相半制备液相色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法分离纯化,并通过光谱数据鉴定化合物结构。结果分离得到22个化合物,分别鉴定为3-O-(3′,4′-二乙酰氧基)-β-D-吡喃木糖基-6-O-β-D-吡喃葡萄糖基-环黄芪醇(1)、黄芪甲苷(2)、黄芪皂苷II(3)、黄芪皂苷I(4)、异黄芪皂苷I(5)、乙酰黄芪皂苷I(6)、人参皂苷Re(7)、人参皂苷Rf(8)、人参皂苷Rg1(9)、人参皂苷Rb3(10)、三七皂苷R4(11)、人参皂苷Rb1(12)、人参皂苷Rc(13)、人参皂苷Rb2(14)、人参皂苷Rd(15)、丝瓜苷H(16)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(17)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷(18)、紫丁香苷(19)、刺五加皂苷E(20)、4-(1,2,3-三羟基丙基)-2,6-二甲氧基苯-1-O-β-D-葡萄糖苷(21)、松柏苷(22)。结论经LC-MS分析检测,化合物1～6为黄芪中的化学成分,化合物7～18为人参中的化学成分,化合物19～22为刺五加中的化学成分,其中化合物1为新化合物,命名为新黄芪皂苷I。