羧甲基壳聚糖对体外培养许旺细胞环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路的影响

背景:已有研究证实羧甲基壳聚糖对许旺细胞增殖、分泌具有促进作用,但其对许旺细胞内环磷腺苷介导蛋白激酶A信号通路的影响仍需要进一步研究。目的:观察羧甲基壳聚糖对大鼠许旺细胞内环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路的影响。方法:取第2代新生大鼠许旺细胞,以1×109 L-1的细胞浓度接种于6孔板,分4组培养,空白对照组加入PBS,实验组分别加入50,100,200 mg/L的羧甲基壳聚糖溶液培养。培养24 h后,检测许旺细胞内环磷腺苷浓度、蛋白激酶A活性及环磷腺苷反应元件结合蛋白m RNA的表达。结果与结论:与空白对照组比较,羧甲基壳聚糖呈剂量依赖性提高许旺细胞内环磷腺苷浓度(P<0.05),呈剂量依赖性增强许旺细胞内蛋白激酶A活性(P<0.05),呈剂量依赖性提高许旺细胞内环磷腺苷反应元件结合蛋白m RNA的表达(P<0.05)。表明羧甲基壳聚糖可增加许旺细胞内环磷腺苷浓度、促进蛋白激酶A活性,从而激活环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路。

钙调神经磷酸酶对血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G表达的影响

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中蛋白激酶G(PKG Iα)表达的影响。方法对大鼠VSMCs培养并行细胞鉴定,分为对照组、低浓度环孢菌素A(CsA,0.5mg/L)干预组、高浓度CsA(5mg/L)干预组以及苯肾上腺素(PE)刺激组(5mg/L CsA+10μmol/L PE)。其中CsA为CaN特异性抑制剂,PE为已知的CaN激活剂,能够刺激细胞增殖。应用RT-PCR、免疫细胞化学及Western blot法定性及定量测定VSMCs增殖中PKG IαmRNA以及蛋白的表达水平。结果0.5mg/L CsA组PKG IαmRNA以及蛋白的表达水平与对照组相比差异无统计学意义,而5mg/L CsA组PKG IαmRNA及蛋白的表达明显高于对照组,5mg/L CsA+10μmol/L PE组中PKG IαmRNA的表达比5mg/L CsA组减少了32.2%,蛋白的表达减少了36.7%,但仍明显高于对照组。结论CaN能够调节培养VSMCs中PKG Iα的表达,增殖细胞用CaN特异性抑制剂CsA灭活CaN后,PKG Iα的表达明显增加,给予PE再次激活CaN后,PKG Iα的表达明显减少。

以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用

目的建立以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选具有特异性酶活抑制活性的微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增目的基因片段pkn A,构建表达载体p ET43.1a-pkn A,在大肠杆菌中克隆表达了重组MTB Pkn A蛋白;采用三步级联的反应方法 ,利用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸到氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸这一反应最大吸光值波长的变化,建立和优化蛋白激酶A抑制剂高通量药物筛选模型。结果成功构建了表达载体p ET43.1a-pkn A;建立了稳定灵敏,可用于靶向结核分枝杆菌蛋白激酶A的抗结核药物高通量筛选模型;利用该模型对4000个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,最终得到21个抑制蛋白激酶A活性的阳性样品,阳性率0.53%;以耻垢分枝杆菌和海分枝杆菌为检定菌,平板纸片法检测阳性样品的抗分枝杆菌活性,然后对阳性样品的细胞毒性和酶活抑制特异性进行评价后,最终得到8个阳性样品,其中I10AA-02916、I09AA-02717、I09AB-02729、I08AB-00801这4个阳性样品酶活抑制特异性、抗菌活性均较好,且细胞毒性较低。结论建立了高稳定性的以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型所得到的发酵液阳性样品值得进一步研究。

环腺苷酸结合蛋白在心脏功能及相关心脏疾病中的作用研究进展

3,5-环磷酸腺苷（cAMP）是心血管系统中细胞对于外界刺激反应的关键信号分子。它控制很多生物效应,如细胞增殖、变异和凋亡等。cAMP是ATP通过跨膜腺苷酸环化酶激活的G蛋白偶联受体^（[1]）。细胞内cAMP不仅由腺苷酸环化酶产生,而且由cAMP的磷酸二酯酶调控其降解,催化cAMP水解成5-AMP。

NO/cGMP信号通路在鞘内吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的探讨NO/cGMP信号通路在鞘内吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用。方法大鼠建立鞘内置管的模型。随机分为9组,每组6只:SHAM组(假手术组)、CON组(对照组,生理盐水)、ITMP组(鞘内吗啡预处理,3μg·kg-1)、L-NAME+ITMP组(一氧化氮合酶阻断剂+鞘内吗啡预处理)、ODQ+ITMP组(鸟苷酸环化酶阻断剂+鞘内吗啡预处理)、KT5823+ITMP组(蛋白激酶G阻断剂+鞘内吗啡预处理)、L-NAME组、ODQ组、KT5823组。ITMP组于心脏缺血前,鞘内注射吗啡10μl 5 min,间断5 min,重复3次;CON组以相同的方式注射生理盐水;L-NAME+ITMP组、ODQ+ITMP组、KT5823+ITMP组分别于吗啡预处理前10 min鞘内注射L-NAME(30 nmol,10μl)、ODQ(11nmol,10μl)、KT5823(20 pmol,10μl);L-NAME组、ODQ组、KT5823组为阻断剂自身对照组。除SHAM组行假手术操作不做其他处理,其余各组大鼠均行左冠状动脉缺血30 min,再灌注120 min诱导心肌缺血/再灌注损伤。观察指标包括:血流动力学指标;心肌缺血危险区(AAR)、梗死区(IS)的体积、心肌梗死面积以IS/AAR表示。结果与CON组相比,ITMP组的IS和IS/AAR均明显下降(P<0.01);与ITMP组比较,L-NAME+ITMP组、ODQ+ITMP组、KT5823+ITMP组的IS和IS/AAR均升高(P<0.01)。与SHAM组比较各组MAP和RPP在缺血30 min降低(P<0.05),与基础值比较,除SHAM组外,其余各组MAP和RPP在缺血30 min降低(P<0.05)。结论 NO/cGMP的信号通路可能参与介导鞘内吗啡预处理,对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。

类风湿关节炎相关的HLA-DRβ_1亚型对蛋白激酶A信号的影响

目的 研究类风湿关节炎 (RA)相关的HLA DRβ1基因亚型对细胞内蛋白激酶A(PKA)信号通路的影响。方法 测定HLA DRβ1 0 40 1、 0 40 2、 0 40 3、 0 40 4亚型转基因细胞内PKA、cAMP及腺苷环化酶 (AC)的浓度及活性。结果 RA相关的HLA DRβ1 0 40 1和 0 40 4转基因细胞的PKA活力、cAMP水平及AC活力明显低于HLA DRβ1 0 40 2和 0 40 3转基因细胞 (P值均 <0 .0 1)。结论 RA共同表位QK/RRAA的表达可抑制PKA、cAMP和AC的活性 。

过氧化氢对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2表达的影响及CaMKⅡ的作用

目的:探讨过氧化氢(H2O2)对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响及钙-钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在其中的作用。方法:采用活细胞计数法(CCK-8法)检测H2O2处理肺动脉内皮细胞后的细胞活性,采用RT-PCR检测COX-2 mRNA的表达水平,采用Western blotting检测COX-2蛋白质的表达水平。结果:H2O2增强COX-2表达,呈浓度和时间依赖性。100μmol/L H2O2处理肺动脉内皮细胞4 h,COX-2 mRNA和蛋白质表达水平明显高于正常对照组,COX-2 mRNA水平为正常对照组的256.01%±22.36%(P<0.05),蛋白质水平为正常对照组的216.65%±21.52%(P<0.05)。CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93能抑制H2O2的这一效应。结论:H2O2可增强肺动脉内皮细胞COX-2基因的表达,CaMKⅡ是H2O2增强肺动脉内皮细胞COX-2基因表达的途径之一。

急性阿片类药物耐受对大鼠脊髓背角PKA和p-CREB表达的影响

目的探讨瑞芬太尼致急性阿片类药物耐受时大鼠脊髓背角PKA和pCREB水平的变化。方法成年健康雄性SD大鼠,体重280～320g,随机分为4组,生理盐水对照组(C组,n=6)、吗啡组(M组,n=6)、低剂量瑞芬太尼组(R1组,n=6)、高剂量瑞芬太尼组(R2组,n=6)、M组腹腔注射吗啡0.6μg/(kg.min),R1组和R2组分别腹腔注射瑞芬太尼0.8、1.6μg/(kg.min),C组给予等量生理盐水,给药时间均为120min。分别在给药前(基础状态)、给药30、60、90、120min时和停药后15、30、45、60min时测定热刺激甩尾潜伏期,并予停药60min后处死,取L4-5脊髓,测定PKA和p-CREB的表达水平。结果与基础值比较,给药期间M组、R1组和R2组热刺激甩尾潜伏期延长,M组停药后15min时热刺激甩尾潜伏期延长,R1组停药后45min时热刺激甩尾潜伏期缩短,R2组停药后30、45min时热刺激甩尾潜伏期缩短(P<0.05,P<0.01)。与C组相比,M组、R1组和R2组停药60min时PKA水平升高,p-CREB水平升高。(P<0.05,P<0.01)。结论腹腔注射瑞芬太尼可诱发大鼠痛觉过敏,导致急性阿片类药物耐受,其机制可能与p-CREB表达上调有关。

环磷酸腺苷／蛋白激酶A信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的探讨环磷酸腺苷／蛋白激酶A（cAMP／PKA）信号转导通路在重症急性胰腺炎肺损伤的作用机制。方法健康雄性SD大鼠72只，按完全随机法分为假手术（SO）组、重症急性胰腺炎组（SAP组）、SAP＋H89（cAMP抑制剂）组，后两组按取材时间不同又分为3、6、12及24h四个亚组，共9组，每组8只。采用酶联免疫吸附法检测血清TNF-α、IL-1β，同时观察胰腺和肺组织的病理变化，免疫组织化学蛋白方法检测cAMP依赖PKA催化亚基C（PKAC）和磷酸化的血管扩张刺激磷蛋白（P—VASP），荧光定量聚合酶链反应检测肺组织VSAP mRNA表达水平。结果与SO组比较，SAP组各时间点血清TNF-α、IL-1β明显上升（P〈0．05），胰腺、肺病理学改变明显，肺组织PKAC蛋白、VASP磷酸化水平及VASP mRNA表达水平明显增强（P〈0．05），12h达高峰[TNF-α（266．07±17．14）pg／mL、IL-1β（169．17±25．92）pg／mL、PKAC（210．69±6．32）×103、P—VASP（56．62±0．57）×103、VASP mRNA（2．06±0．21）]，且与TNF-α、IL-1β之间存在明显的正相关性。与SAP组比较，SAP＋H89组各时间点胰腺、肺病理学改变明显减轻，肺组织PKAC蛋白、VASP磷酸化水平及VSAP mRNA表达水平明显下降（P〈0．05）。结论cAMP／PKA信号转导通路的活化参与了重症急性胰腺炎肺损伤的病理过程，可能与TNF-α及IL-1β水平上调及VASP磷酸化而发挥作用有关。

二甲双胍调节糖尿病大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型蛋白表达的信号通路

目的探讨蛋白激酶A(PKA)/钙调蛋白Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在二甲双胍(Met)调节2型糖尿病(T2DM)大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型KCa2.2和KCa2.3蛋白表达中的作用。方法健康雄性Wistar大鼠40只,随机选8只喂普通饲料为对照组(Con组),另32只喂高脂高糖饲料联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素构建T2DM大鼠模型后,再随机分为DM组、Met组、H-89组(腹腔注射PKA抑制剂H-89)和KN-93组(腹腔注射CaMKⅡ抑制剂KN-93),每组8只。用ELISA检测大鼠心房组织PKA活性,qRT-PCR检测CaMKⅡmRNA表达,Western blot和免疫组织化学检测KCa2.2、KCa2.3和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)蛋白表达。结果 Con组、DM组、Met组和H-89组PKA活性分别为0.74±0.04、0.50±0.05、0.69±0.03和0.48±0.03。与DM组比较,Met组PKA活性明显提升(P<0.01);与Met组比较,H-89组显著抑制PKA活性(P<0.01)。Con组、DM组及Met组CaMKⅡmRNA分别为1.00±0.07、0.61±0.03和0.92±0.09。与Con组比较,DM组CaMKⅡmRNA表达明显降低(P<0.01);与DM组比较,Met组CaMKⅡmRNA表达明显增加(P<0.01)。与Con组比较,DM组心房组织p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达均明显降低,KCa2.3蛋白表达明显升高(P<0.01)。与DM组比较,Met组明显提升p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达,明显抑制KCa2.3蛋白表达(P<0.01)。与Met组比较,KN-93组和H-89组分别显著抑制p-CaMKⅡ蛋白表达和PKA活性,均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P<0.01)。免疫组织化学染色显示,与Met组比较,KN-93组和H-89组均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P<0.05,P<0.01),与Western blot检测结果一致。结论 Met通过激活PKA/CaMKⅡ信号通路部分修复T2DM大鼠心房KCa2.2蛋白下调和KCa2.3蛋白上调。

环腺苷酸-蛋白激酶A在大鼠内毒素性急性肺损伤时血红素加氧酶-1表达上调中的作用

目的探讨环腺苷酸一蛋白激酶A（cAMP—PKA）在大鼠内毒素性急性肺损伤时血红素加氧酶-1（H0—1）表达上调中的作用。方法健康清洁级雄性sD大鼠48只，体重180～220g，2．5～3．0月龄，采用随机数字表法，将大鼠随机分为4组（n=12）：正常对照组（C组）股静脉注射生理盐水（LPS溶媒）0．5ml，2h后皮下注射生理盐水（H89溶媒）0．5ml；内毒素性急性肺损伤组（Au组）股静脉注射10mg／kgLPS0．5ml，2h后皮下注射生理盐水0．5ml；H89＋内毒素性急性肺损伤组（H＋ALI组），股静脉注射10mg／kgLPS0．5ml，2h后皮下注射5mg／kgH890．5ml；H89组（H组）股静脉注射生理盐水0．5ml，2h后皮下注射5mg／kgH890．5ml。静脉注射LPS后6h时处死大鼠，取肺组织，行病理学评分，测定肺组织含水量；采用Westernblot法测定HO．1和PKA表达；采用荧光定量PCR法测定HO-1mRNA表达。结果与c组比较，ALI组和H＋ALI组肺组织含水量和病理学评分升高，肺组织PKA、HO·l和HO-1mRNA表达上调（P〈0．05），H组上述各指标差异无统计学意义（P〉0．05）；与Au组比较，H＋Au组肺组织含水量和病理学评分升高，肺组织PKA、HO-1和HO．1mRNA表达下调（P〈0．05）。结论大鼠内毒素性急性肺损伤时HO-1表达上调的机制与cAMP-PKA信号通路活化有一定关系。

缬沙坦对心力衰竭家兔肌浆网钙ATP酶、蛋白激酶A及磷酸酶1α的影响

目的探讨家兔慢性心力衰竭（心衰）时心肌肌浆网钙ATP酶（SERCA2）、心肌蛋白激酶A（PKA）和磷酸酶1α（PP1α）表达的改变及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦长期干预的意义。方法21只家兔随机分为三组，假手术组、心衰组和缬沙坦组各7只，通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型，于术后7周观察左心室结构、血流动力学的变化及SERCA2、PKA、PP1α的表达。结果与假手术组比较，心衰组左心室重量指数（LVMI）、心率、左心室舒张末压（LVEDP）显著升高（P〈0．05），左心室缩短率（LVFS）及射血分数（EF）明显降低（P〈0．05）；与心衰组比较，缬沙坦组LVMI、心率、LVEDP显著降低（P〈0．05），LVFS及EF明显升高（P〈0．05）；心衰组SERCA2、PKA显著低于假手术组（P〈0．05），PP1α显著高于假手术组（P〈0．05）；缬沙坦组SERCA2、PKA显著高于心衰组（P〈0．05），PP1α显著低于心衰组（P〈0．05）。结论缬沙坦长期干预心衰，能够改善心脏舒缩功能，可能与其上调SERCA2、PKA表达，降低PP1α表达有关。

慢性应激抑郁模型大鼠海马蛋白激酶A的变化及抗抑郁药物的干预作用

目的研究氟西汀与噻萘普汀对慢性应激抑郁模型大鼠海马蛋白激酶A(PKA)表达的影响。方法将大鼠随机分为抑郁模型组、氟西汀组、噻萘普汀组和对照组。模型组、氟西汀组和噻萘普汀组给予21 d的应激刺激,此期间对照组正常饲养,刺激期间氟西汀组每天灌胃氟西汀(10 mg/kg),噻萘普汀组每天灌胃噻萘普汀(50 mg/kg),模型组和对照组每天灌胃等体积的生理盐水。行为学检测应用开场法和液体消耗实验。采用Western blotting法检测各组大鼠海马PKA的表达情况。结果应激后,模型组水平穿越格数、竖立次数、修饰次数、糖水消耗百分比均显著低于对照组(P<0.01)。应激后氟西汀组水平穿越格数、竖立次数、修饰次数和糖水消耗百分比均高于模型组(P<0.05)。应激后噻萘普汀组糖水消耗百分比高于模型组(P<0.05),水平穿越格数、竖立次数和修饰次数也高于模型组,但无统计学差异。在Western blotting法检测中,模型组大鼠海马PKA的表达水平显著低于对照组(P<0.01);氟西汀组大鼠海马PKA的表达水平高于模型组(P<0.01),与对照组无统计学差异(P>0.05);噻萘普汀组大鼠海马PKA的表达水平显著高于模型组(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01)。结论氟西汀和噻萘普汀均能逆转慢性应激抑郁模型大鼠海马PKA表达的降低。

二甲双胍通过激活腺苷酸活化蛋白激酶抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成

目的探讨降糖药物二甲双胍(metformin)对心脏成纤维细胞(CF)增殖及胶原合成的影响及可能的机制。方法培养新生SD大鼠CF,以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激CF增殖,同时分别单独或联合应用二甲双胍及一磷酸腺苷活化蛋白激酶(P-AMPK)抑制剂Compound C,用MTT法测CF增殖,3H-脯氨酸掺入率法测定CF胶原合成,Western blot测定腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及P-AMPK水平。结果 CF经AngⅡ刺激24h后,显著增殖,同时胶原率提高;二甲双胍显著抑制了AngⅡ诱导的CF增殖及胶原合成增加;Compound C完全抑制了二甲双胍的这一效应,而单独应用Com-pound C并未进一步加重AngⅡ诱导的CF增殖及胶原合成。二甲双胍显著提高AngⅡ刺激的CF的P-AMPK水平,同时Compound C抑制了二甲双胍对AMPK的磷酸化激活。结论二甲双胍显著抑制了AngⅡ诱导的CF增殖及胶原合成增加,这一效应可能由二甲双胍激活AMPK介导。

异氟醚对大鼠海马蛋白激酶A和蛋白激酶C水平的影响

目的评价异氟醚对大鼠海马蛋白激酶A（PKA）和蛋白激酶C（PKC）水平的影响。方法健康雄性sD大鼠36只，月龄3月，体重180～220g，随机分为3组（n=12），I组不给予任何处理，直接进行认知功能测试；Ⅱ组吸入1．2％异氟醚4h，2d后进行认知功能测试；III组吸入1．2％异氟醚4h，2周后进行认知功能测试。采用Morris水迷宫进行大鼠认知功能测试，记录逃避潜伏期。认知功能测试完毕后，处死大鼠，取海马，测定PKA和PKC的表达和活性。结果与I组比较，Ⅱ组逃避潜伏期差异无统计学意义（P〉0．05），Ⅲ组逃避潜伏期延长，Ⅱ组和Ⅲ组海马PKA和PKC的表达下调，活性降低（P〈0．05）；与Ⅱ组比较，Ⅲ组逃避潜伏期延长（P〈0．05），海马PKA和PKC的表达和活性差异无统计学意义（P〉0．05）。结论吸入1．2％异氟醚4h可抑制海马PKA和PKC的水平，从而导致大鼠认知功能障碍。

应激对大鼠空间学习记忆的影响及与蛋白激酶活力的关系

目的探讨不同时段的应激对大鼠海马依赖性空间学习记忆的影响及与海马蛋白激酶 A(PKA)、蛋白激酶 C(PKC)和钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活力的关系。方法将60只雄性 SD 大鼠随机分为对照组、应激1次组、应激1周组、应激2周组和应激4周组,每组动物12只,其中应激模型为强迫大鼠游泳。应用 Morris 水迷宫(MWM)测试大鼠的空间学习记忆情况,采用同位素法检测蛋白激酶的活力。结果 (1)MWM 实验,应激1周组在第7和第8个实验中逃避潜伏期(EL)分别为(9.8±2.8)s 和(9.8±4.6)s,少于其他4组(P<0.01);其他10个实验各组的 EL 相互比较,差异无统计学意义(P>0.05);记忆保留实验中,应激4周组的 EL 长于对照组(P<0.05);应激1周组大鼠60s 内穿越原平台位置的次数[(3.2±1.2)次]多于对照组[(1.8±0.5)次;P<0.05]。(2)应激1周组大鼠 PKA 和 PKC 活力[分别为(6.42±0.27)×10^(-2)和(4.71±0.37)×10^(-2)]高于对照组[分别为(5.53±0.49)×10^(-2)和(1.48±0.27)×10^(-2);P<0.01];应激2周组和应激4周组 PKA[分别为(4.88±0.23)×10^(-2)和(3.92±0.22)×10^(-2)]和 PKC[分别为(0.57±0.03)×10^(-2)和(0.69±0.02)×10^(-2)]活力则低于对照组(P<0.01)。各应激组海马 CaMKⅡ的活力均明显低于对照组(P<0.01)。结论慢性应激损害大鼠海马依赖性空间长时记忆,抑制大鼠海马 PKA、PKC 和CaMKⅡ的活力;短时间的重复应激选择性提高大鼠海马依赖性空间短时记忆,提高 PKA 和 PKC 活力。应激导致记忆改变可能与蛋白激酶活力变化有关。

PKA参与脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

目的 :探讨环一磷酸腺苷依赖的蛋白激酶 (PKA)在脊髓背角C -纤维诱发电位长时程增强 (LTP)的诱导和维持中的作用。方法 :细胞外记录技术在脊髓腰膨大部记录背角浅层神经元C -纤维诱发电位。结果 :(1) 8-Br-cAMP诱发脊髓背角C -纤维诱发电位LTP ,且 8-Br-cAMP -诱导的LTP遮蔽强直刺激诱导的LTP。 (2 )PKA的选择性抑制剂Rp -CPT -cAMPS阻断C -纤维诱发电位LTP的诱导和时间依赖性翻转C -纤维诱发电位LTP。(3)蛋白质合成抑制剂茴香霉素彻底阻断 8-Br -cAMP诱发的LTP。 (4)MAPK选择性抑制剂PD980 5 9阻断 8-Br-cAMP诱发的LTP。结论 :脊髓背角神经元存在PKA信号途径 ,并参与脊髓背角C -纤维诱发LTP的诱导和早期维持。

CCK-8抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活性的cAMP-PKA通路研究

目的:用cAMP激动剂forskolin和PKA抑制剂H-89,探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞(PIM s)核因子-κB(NF-κB)活性的cAMP-PKA信号通路机制。方法:分离纯化大鼠PIM s。用电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测大鼠PIM s中NF-κB活性,用W estern b lotting分析IκB-α蛋白水平。结果:正常对照组大鼠PIM s核内未检测到与特异性寡核苷酸探针相结合的NF-κB,LPS组细胞内NF-κB活性明显高于正常对照组(P<0.01),胞浆中IκB-α水平显著低于正常对照组(P<0.01)。CCK组和Fsk组细胞内NF-κB活性和胞浆中IκB-α含量均无明显差异(P>0.05)。CCK+LPS组和Fsk+LPS组,细胞内NF-κB活性均低于LPS组(P<0.05),IκB-α含量均高于LPS组(P<0.01)。LPS+CCK+H-89组NF-κB活性高于CCK+LPS组(P<0.01),而IκB-α蛋白水平低于CCK+LPS组(P<0.01)。结论:cAMP-PKA信号通路的活化可抑制LPS诱导的大鼠PIM s细胞内NF-κB活性升高和IκB-α蛋白水平的降低,CCK-8的抗炎作用是通过激活cAMP-PKA信号通路进而抑制NF-κB活性来实现的。

高脂饮食对大鼠肝脏组织AMPK表达及其活性的影响

目的研究不同饮食模式对大鼠肝脏组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达及其活性的影响。方法28只雄性SD大鼠适应性喂养1周后随机分为2组:普通对照组(NC组,n=15),高脂饮食组(HF组,n=13)。NC组给予普通饲料,HF组给予高脂饲料。16周后分别测定体重(BW)、血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)等指标。采用Western blot方法检测两组大鼠肝脏组织中AMPKα和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α亚基(p-AMPKα)蛋白的水平。结果与NC组相比,HF组大鼠的体重、FFA、TG、FPG、FINS增高(均P<0.05)。两组肝脏组织中AMPKα的蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但HF组肝脏组织中p-AMPKα的蛋白表达水平及AMPK活性降低(均P<0.05)。结论长期高脂饮食减少肝脏组织AMPKα蛋白的磷酸化和AMPK的活性。