玳玳果降脂提取物急性毒性试验研究

目的观察玳玳果降脂提取物小鼠急性毒性,初步评价其用药安全性。方法取40只体质量24~29 g昆明种小鼠,随机分成给药组与空白组各20只,雌雄各半,选用最大耐受量(MTD)法试验。给药组按玳玳果降脂提取物可以灌胃的最大浓度(0.8 018 g/m L)及小鼠可承受的最大体积(0.4 m L/10 g)一次性口服灌胃,空白组蒸馏水(0.4 m L/10 g)灌胃。灌胃给药1次,连续观察14 d,记录小鼠的毒性反应、死亡情况。结果无法得出玳玳果降脂提取物LD50;给药后连续观察14 d,小鼠未见中毒反应,无动物死亡;给药14 d后解剖小鼠,肉眼未见脏器异常;脏器指数评价,2组比较无显著性差异(P>0.05)。结论小鼠灌胃给药最大耐受剂量为32.07 g/kg,相当于临床成人日用量的285.07倍,提示玳玳果降脂提取物口服毒性小,临床剂量下用药安全。

HPLC一测多评法同步测定玳玳果黄酮降脂提取物4个效应组分含量

目的建立HPLC一测多评法(QAMS)同步测定玳玳果黄酮降脂提取物4个效应组分柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷含量。方法采用高效液相色谱法,选择主成分柚皮苷为内参物,建立HPLC一测多评法,并与HPLC外标法同时测定的4个组分含量结果比较。色谱柱Lichrocart C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.2%冰醋酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;流速1.0 m L/min,检测波长284 nm;柱温30℃;进样量10μL。结果玳玳果黄酮降脂提取物柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的质量浓度分别在31.377~159.188μg/mL(r=0.999 5)、63.632~208.123μg/m L(r=0.999 8)、3.899~12.241μg/m L(r=0.999 6)、2.696~17.366μg/mL(r=0.999 4)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为97.99%、101.50%、98.21%、95.56%,RSD分别为2.07%、2.80%、2.92%、2.32%。结论以柚皮苷为内参物,HPLC一测多评法同步测定玳玳果黄酮降脂提取物4个效应组分含量结果准确,可用于玳玳果黄酮降脂提取物多指标质量监控。

玳玳果黄酮降脂提取物效应组分血浆蛋白结合特性研究

该文研究玳玳果黄酮降脂提取物效应组分与血浆蛋白的结合能力,并探讨通过改进传统超滤法计算血浆蛋白结合率的公式,提高试验结果的稳定性及可靠性。研究采用UPLC-MS/MS建立同时测定超滤液中提取物效应组分新橙皮苷和柚皮苷含量的定量分析方法;在优化的离心条件及孵育条件下,以超滤法传统公式计算血浆蛋白结合率,另引入校正因子(F)计算,比较经校正因子计算所得的血浆蛋白结合率结果的异同,评价提取物与大鼠血浆蛋白的结合能力。所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法具备良好的专属性,标准曲线与线性范围、方法准确度与精密度、定量下限均符合有关规定,该方法能够满足大鼠血浆在经超滤管滤过后超滤液中的效应组分的定量检测需要。实验发现,效应组分新橙皮苷及柚皮苷与大鼠血浆蛋白结合率均在90%以上,且二者血浆蛋白结合表征出浓度依赖性,同时二者与大鼠血浆蛋白的结合能力无显著性差异。此外,在传统超滤法计算蛋白结合率时引入校正因子,可以较为有效地反映中药提取物多组分群影响误差,这一校正方式可为超滤法测定中药血浆蛋白结合能力方法学改进提供一个可参考的思路与实践方法。

玳玳果黄酮降脂提取物在体肠吸收过程和转运机制研究

目的探究玳玳果黄酮降脂提取物肠吸收部位、过程及转运机制。方法采用大鼠在体单向肠灌流模型,以提取物效应组分新橙皮苷及柚皮苷为指标,芦丁为内标,运用UPLC-MS/MS技术,建立玳玳果黄酮降脂提取物肠灌流液定量分析法;考察提取物在各肠段的吸收过程及特性;加入外排转运蛋白P-gp抑制剂维拉帕米(verapamil,VP),评价P-gp对提取物吸收的影响及肠道吸收参数(表观吸收系数Papp、吸收速率常数Ka和药物累计吸收百分比P%值)的变化;并以不同质量浓度提取物探究效应组分的吸收转运过程。结果玳玳果黄酮降脂提取物在不同肠段吸收量顺序为十二指肠>结肠>空肠≈回肠;与十二指肠比较,其他肠段的新橙皮苷及柚皮苷的肠道吸收参数Papp、Ka及P%均有显著性差异(P<0.05),十二指肠的新橙皮苷和柚皮苷的P%约是其余肠段的5~7倍;加入VP后,效应组分新橙皮苷及柚皮苷的Papp、Ka、P%均有显著提高,且在十二指肠的吸收量明显增加,P%约是VP空白组的4倍;提取物高、中、低浓度组柚皮苷的Papp、Ka无显著变化;中、低浓度组的新橙皮苷Papp、Ka随浓度增加略有上升;中浓度组的新橙皮苷Papp、Ka比高浓度组增大,Papp差异有统计学意义(P<0.05)。结论玳玳果黄酮降脂提取物的主要吸收部位是十二指肠;其效应组分在肠道的吸收受P-gp影响显著,各组分吸收参数变化趋势相同,不存在竞争性或非竞争性抑制作用;低浓度下表观吸收均属一级动力学过程;柚皮苷的吸收机制可能为被动转运,新橙皮苷的吸收机制可能为载体介导的促进扩散。

玳玳果黄酮降脂提取物体内效应组分排泄动力学研究

目的建立同时测定大鼠尿液及粪便中提取物效应组分新橙皮苷和柚皮苷含量方法,研究大鼠口服玳玳果黄酮降脂提取物后的尿药排泄动力学及排泄特征。方法采用UPLC-MS/MS建立效应组分新橙皮苷及柚皮苷在大鼠尿液及粪便的定量分析方法,计算口服玳玳果黄酮降脂提取物后不同时间点新橙皮苷及柚皮苷在尿液及粪便中的排泄率,并以亏量法计算尿液中的消除半衰期及消除速率常数,评价大鼠口服玳玳果黄酮降脂提取物后尿药排泄动力学及排泄特征。结果所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法专属性良好、标准曲线及线性范围良好,方法准确度与精密度、定量下限均符合有关规定,该方法能够满足大鼠尿液及粪便中效应组分的定量检测需要;口服72 h后,大鼠尿液中新橙皮苷、柚皮苷的平均累计排泄率分别为(1.76±0.76)‰和(1.39±0.57)‰;大鼠粪便中新橙皮苷、柚皮苷的平均累计排泄率分别为(52.45±6.30)%和(51.57±4.80)%;口服后效应组分新橙皮苷及柚皮苷在尿液及粪便中的排泄量分别在24~36 h和4~8 h达到峰值;72 h后仍有药物经尿液排泄,给药后24 h粪便累计排泄率便达坪值;亏量法计算得新橙皮苷消除速率常数为(0.080±0.021)·h-1,消除半衰期为(9.41±3.22)h,柚皮苷消除速率常数为(0.077±0.017)·h-1,消除半衰期为(9.51±2.97)h,新橙皮苷及柚皮苷的动力学参数间差异无统计学意义。结论口服给药后效应组分原形即通过粪便较快地排出体外,粪便排泄是效应组分排出体外的主要途径,新橙皮苷及柚皮苷经尿液排泄的特征无明显差异。

玳玳果黄酮降脂提取物效应组分大鼠肝肠微粒体代谢特性研究

该文比较玳玳果黄酮降脂提取物效应组分新橙皮苷、柚皮苷在大鼠肝脏及肠道微粒体中的代谢差异,探讨效应组分在肝脏及肠道的Ⅰ相代谢特性。采用UPLC-MS/MS技术建立效应组分在肝肠微粒体Ⅰ相代谢孵育体系中的定量分析方法,并以差速离心法制备大鼠肝、肠微粒体,构建Ⅰ相代谢孵育体系,通过将各时间点药物剩余百分率的自然对数ln(X)对时间t作图计算代谢消除半衰期,比较效应组分的代谢特征。结果表明,所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法专属性、标准曲线及线性范围良好,方法准确度与精密度、定量下限均符合规定,该方法能够满足大鼠肝肠微粒体Ⅰ相代谢孵育体系下效应组分的定量检测需要;大鼠肝微粒体Ⅰ相孵育体系中新橙皮苷代谢消除半衰期为(2. 20±0. 28) h,大于柚皮苷的底物消除半衰期(1. 97±0. 28) h,但差异无统计学意义;大鼠肠微粒体Ⅰ相孵育体系中新橙皮苷的代谢消除半衰期为(3. 68±0. 54) h,大于柚皮苷的底物消除半衰期(2. 26±0. 13) h,且差异有统计学意义(P<0. 05);提取物效应组分在肝微粒体中的消除半衰期均小于肠微粒体。该研究发现,玳玳果黄酮降脂提取物效应组分在大鼠肝、肠微粒体Ⅰ相代谢孵育体系中具有不同的消除半衰期,提示二者在大鼠肝脏及肠道中具有不同的代谢特征,肝脏可能为玳玳果黄酮降脂提取物效应组分的主要代谢部位,且提取物效应组分柚皮苷的Ⅰ相代谢强度大于新橙皮苷的代谢强度,推测导致该代谢特征差异的原因可能与黄酮苷B环羟基结合位点及甲氧基数量有关。为进一步指导玳玳果黄酮降脂提取物制剂的深度开发及临床开发应用等提供重要的实验依据。

玳玳果黄酮降脂提取物体内组织分布规律及特征研究

目的:建立UPLC-MS/MS分析方法同时测定玳玳果黄酮降脂提取物效应组分新橙皮苷和柚皮苷在大鼠10种脏器组织中含量,分布规律及特征。方法:采用UPLC-MS/MS技术建立提取物效应组分新橙皮苷及柚皮苷在大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠、脂质、肌肉组织中的定量分析方法;大鼠给药后分别于0.33,0.67,1,4,8 h的5个时间点,分别摘取以上10种脏器组织,测定脏器组织及血液中效应组分的质量浓度,采用DAS(V 2.0)药动学软件对各样本的药物浓度-时间数据进行房室拟合,并计算不同组织效应组分的药-时曲线下面积(AUC)及平均滞留时间(MRT)。结果:所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法具备良好的专属性、标准曲线及线性范围良好、方法准确度与精密度、定量下限均符合有关规定;玳玳果黄酮降脂提取物效应组分在血液中的分布符合一室模型,除肾脏及脑组织外,其余脏器中提取物效应组分的房室特征多为静脉注射的二室模型,柚皮苷在肾脏中的拟合结果为非静脉注射的二室模型,新橙皮苷在脑组织拟合结果为静脉注射的三室模型,给药后8 h各组织中效应组分新橙皮苷及柚皮苷AUC值大小顺序均为小肠>胃>肾>脂质≈脾脏>肺>肌肉>肝>心>脑,效应组分在各脏器中均无明显蓄积;效应组分在血液、肾脏、肝脏中的滞留时间较长,MRT均大于2 h,脂质最短,MRT不足1 h;各脏器中新橙皮苷的药-时曲线下面积约是柚皮苷的3倍,而心、肝、肾中则是3.5,2.1和3.4倍。结论:玳玳果黄酮降脂提取物效应组分在大鼠组织中分布迅速,达峰时间早于血液;效应组分在肠道内消除缓慢,给药8 h后在各脏器中的含量均显著下降且无特异的蓄积部位。研究结果揭示玳玳果黄酮降脂提取物效应组分在大鼠体内的分布特征及规律,为进一步理解玳玳果黄酮降脂提取物在体内的作用靶点及机制奠定了基础。