3种玻璃化冷冻液对水牛MII期卵母细胞冷冻-解冻后体外发育的影响

本试验主要探索了3种玻璃化冷冻液对水牛MII期卵母细胞冷冻-解冻后体外发育的影响。水牛MII期卵母细胞经3组玻璃化冷冻液(Ⅰ:20%乙二醇(EG)+20%二甲基亚砜(DMSO);Ⅱ:20%EG+20%丙二醇(PROH);Ⅲ:20%EG+20%PROH+10%DMSO)毒性试验后,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组体外受精的分裂率、8-细胞率和囊胚率之间差异不显著(P>0.05),分裂率均显著低于对照组(P<0.05),但Ⅱ组8-细胞以后的发育潜力跟对照组无显著差异(P>0.05)。进一步比较了3组玻璃化冷冻液对卵母细胞的玻璃化冷冻效果。卵子解冻后进行体外受精后,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的发育潜力均显著低于对照组(P<0.05),各组的8-细胞率和囊胚率之间无显著差异(P>0.05),但Ⅱ组卵裂率明显高于Ⅰ组(24.8±4.6%vs12.7±1.5%,P<0.05)。结果表明,3种冷冻玻璃化保护液均可用于冷冻水牛MII期卵母细胞,其中Ⅱ组处理的卵母细胞体外受精效果相对较好。

猪卵母细胞在玻璃化冷冻液中的培养效果

本试验的目的是要选择较好的用于猪卵母细胞玻璃化冷冻的玻璃化冷冻液，玻璃化液由ＴＣＭ－１９９、ｍＰＢＳ、Ｋｉｅｖ液分别加２０％的犊牛血清与３种抗冷冻剂（丙三醇、１，２──丙二醇和乙二醇）组成。猪卵母细胞采自屠宰厂的卵巢并培养在ＴＣＭ－１９９＋２０％犊牛血清、ｍＰＢＳ＋２０％犊牛血清和Ｋｉｅｖ＋２０％犊牛血清中，在３７℃、湿度１００％条件下培养至少５个小时。５小时后逐渐加入抗冷冻剂，使其终浓度达５０％。培养５分钟后，将猪卵母细胞依次移至抗冷冻剂浓度为２５％，１２．５％和０％的培养液中，培养５分钟，而后进行台盼蓝死活染色。结果表明猪卵母细胞在各组培养后的存活率没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），但乙二醇结果优于其它抗冷冻剂，而ＴＣＭ－１９９好于其它两类培养液。

不同浓度玻璃化冷冻液对牛未成熟卵母细胞发育能力的影响

旨在研究含不同浓度乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)的玻璃化冷冻液对牛未成熟卵母细胞冷冻后发育能力的影响。将卵丘卵母细胞复合体(COCs)置于不同配方的玻璃化冷冻液(VS1:10%EG+10%DMSO;VS2:20%EG+20%DMSO;VS3:25%EG+25%DMSO)中暴露30s或60s,体外成熟培养22h,以未在玻璃化冷冻液中暴露而直接体外成熟22h的COCs为对照组。结果表明,在VS3中暴露60s时,成熟率比对照组明显下降(P<0.01),其他组与对照组差异均不显著(P>0.05);在不同玻璃化冷冻液(VS1、VS2、VS3)中,采用开放式拉长细管(OPS)法冷冻COCs,解冻后再进行体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)和早期胚胎的体外培养(IVC)。结果表明,VS2组囊胚率(5.4%)最高,与VS3组(3.6%)差异不显著(P>0.05),VS1组没有获得囊胚。研究表明,含20%EG、20%DMSO的玻璃化冷冻液可以用于牛未成熟卵母细胞的冷冻,COCs在冷冻液中处理的时间应控制在30s内。

玻璃化冷冻保存小鼠受精卵的研究

在20°C室温下,用玻璃化冷冻液(含体积分数为0.3的乙二醇、0.21kg/L的葡聚糖和0.35mol/L的海藻糖)对昆明纯种小白鼠受精卵进行一步法和二步法玻璃化冷冻保存.一步法的2min平衡组(39%)和二步法的1min平衡组(41%)的胚胎解冻后存活率较好,与对照组(83%)相比有极显著差异(p<0.01).在玻璃化冷冻效果较好组胚胎的子宫移植中,妊娠受体率、妊娠受体产仔率和移植受体产仔率均与对照组无显著差异(p>0.05).

玻璃化冷冻对猪MⅡ卵母细胞皮质颗粒分布及其激活后胚胎发育能力的影响

本实验旨在探讨玻璃化冷冻保存对猪MⅡ期卵母细胞皮质颗粒分布和孤雌激活后早期胚胎发育能力的影响。实验将卵母细胞随机分为对照组、毒性实验组和冷冻组。采用EFS40和EDFS40两种玻璃化冷冻液处理,卵母细胞经恢复后对其进行染色,观察皮质颗粒的分布;并对另一部分卵母细胞实施孤雌激活,观察早期胚胎的发育。结果表明:毒性实验组和冷冻组卵母细胞皮质颗粒部分释放、完全释放的比例无显著差异,但均显著高于对照组(P<0.05)。不同毒性处理组和不同冷冻组间对皮质颗粒的分布无显著差异。与毒性实验组相比,冷冻处理组显著降低皮质颗粒在皮质区分布的比例(P<0.05)。EFS40毒性实验组孤雌激活后的存活率、卵裂率、囊胚发育率均显著高于EDFS40毒性实验组(86.6%vs.75.0%)、(61.8%vs.40.7%)、(30.2%vs.23.5%)(P<0.05)。EFS40冷冻组存活率显著高于EDFS40冷冻组,但均显著低于对照组。结果显示,抗冻保护剂处理和玻璃化冷冻均导致猪卵母细胞皮质颗粒释放,与EDFS40相比采用EFS40较适合猪MⅡ期卵母细胞冷冻保存。

三种方法制备组织工程气管支架的比较

背景:气管支架制备是组织工程学方法修复长段气管缺损的关键步骤。目的:通过比较分析3种制备异体脱细胞气管支架的方法,为组织工程气管支架制备寻找更适宜的途径。方法:手术获得兔新鲜气管,分为对照组、玻璃化液冷冻法组、酶洗法组、改良玻璃化液冷冻法组。处理后对各组标本行苏木精-伊红染色,电镜扫描观察,并测量气管最大拉伸力、破裂力和组织拉伸率等生物力学性能。结果与结论:组织学观察显示对照组、玻璃化液冷冻法组可见部分完整黏膜上皮细胞,酶洗法组、改良玻璃化液冷冻法组未见黏膜上皮细胞。电镜观察示对照组、玻璃化液冷冻法组、改良玻璃化液冷冻法组有丰富的细胞外基质和胶原纤维,而酶洗法组无细胞外基质,只有胶原纤维。组间两两比较,气管支架的最大拉伸力、最大破裂力和组织拉伸率比较,差异均无显著性意义。说明应用改良玻璃化液冷冻法制备气管支架能够有效地去除抗原性、保留细胞外基质,并维持生物力学性能,是一种较为理想的组织工程气管支架制备方法。