玻璃化冻存组织工程骨修复兔骨缺损的实验研究

目的研究探讨日本大耳白兔脂肪干细胞与脱钙骨基质构筑的组织工程骨在长期玻璃化冻存后的活性和成骨能力,以及它们复苏后在兔桡骨骨缺损修复中的作用。方法分离脂肪干细胞,将其扩增至第3代后接种于猪松质骨来源的脱钙骨基质,经过1周的成骨诱导,将建立的组织工程骨置于装有玻璃化冻存液的2 ml冻存管内,置液氮环境中冻存。在冻存1周和12周时,取出组织工程骨,分别在复苏后的第1、4、7和11天,使用Hochest33258法检测细胞数量。复苏后的第1、4、7天,使用碱性磷酸酶(ALP)检验试剂盒评估ALP的活性,并使用RT-PCR反应来确认骨钙素(OCN)基因的表达量。建立16只日本大耳白兔的2 cm的桡骨中段缺损模型,随机分成4组:未经冰冻的组织工程骨组、空白对照组、经过12周冻存组织工程骨组和单独材料组。12周后进行X线观察、Micro-CT评价和HE染色组织学观察。结果经过Hochest33258测试,在冻存1周和12周之后,复苏后第1天的细胞数量分别达到了冻存前的74.4%和72.3%,第4~7天细胞数量达到最高峰,而第7~11天则进入了平台期。冻存1周或12周后,ALP表达量出现了轻微的下降,但随后又开始回升。冻存1周、12周复苏后第1天OCN表达量稍微降低,随后OCN表达量逐渐升高,第4~7天升高速率快。X线结果显示,冻存12周组与新鲜组织工程骨组都有连续性骨组织形成。Micro-CT结果显示,冻存组与新鲜组织工程骨组可见明显的骨质形成,连续性完整。冻存组与新鲜组织工程骨组在骨体积、骨小梁数量、骨密度上均无明显差异(P>0.05),但均明显高于对照组和单纯支架材料组(P<0.05)。HE染色结果显示,新鲜组织工程骨组和冻存12周组织工程骨组可见明显的连续的新生骨形成。结论长期冻存后的组织工程骨仍能保持足够的细胞数量,仍具备成骨能力和修复兔桡骨骨缺损的能力。

玻璃化冻存对鲫鱼卵细胞活性的影响

以鲫鱼Carassius cuvieri未成熟的卵细胞为材料,研究了玻璃化冻存对鲫鱼卵细胞的存活率及琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的影响.结果表明：鲫鱼卵细胞存活率在1～6 d下降明显,6～8 d下降趋势减弱,保持相对稳定;琥珀酸脱氢酶活性呈显著下降（P＜0.05）.玻璃化冻存液VSd组的冻存效果最好,其组分为180.0 g·L-1 1,2-丙二醇,110.0 g·L-1甲醇,0.1 mol· L-1海藻糖和40.0 g·L-1聚乙二醇.该玻璃化冻存液配方及方法在一定时间内保存鲫鱼未成熟卵细胞具有一定的应用价值.

魔芋茎尖玻璃化冻存研究

研究了魔芋茎尖玻璃化冻存的主要技术环节，建立了较适宜的魔芋种质资源超低温保存体 系：在实体显微镜下，从继代培养 ２周的不定芽上切取 １～１． ３３ ｍｍ大小的茎尖，经０． ７ ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的 ＭＳ－ＮＨ４＋培养液室内预培养 ２ｄ，玻璃化溶液ＰＶＳ２室温下处理 １０～２０ ｍｉｎ，直接投入液氮中保存。保 存后，茎尖经 ４０～７７℃水浴快速化冻， １． ２ ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的培养液洗 ２次，各 １０ ｍｉｎ，暗中培养 ２周后转 入光下。冻存的茎尖直接生长发育或经愈伤组织再分化形成完整植株，存活率为５０％～７０％。从基因 组ＤＮＡ检测结果表明，魔芋茎尖经超低温保存后，其遗传特性未发生改变。

玻璃化冻存对羊软骨细胞的影响

对玻璃化冻存后羊Ovis aries软骨细胞的存活率和琥珀酸脱氢酶（SDH）活性进行了初步研究。结果表明：细胞存活率随着冻存时间的延长而逐渐下降,但下降速度不明显;SDH活性在玻璃化冻存1~20 d变化幅度较大,20~30 d下降趋势减弱,保持相对稳定。从各项指标来看,认为玻璃化溶液VSb组的冻存效果最好,在经过5,10,15,20和30 d的冻存后,其存活率分别为85.47%±1.78%,80.73%±1.81%,78.62%±2.06%,76.35%±2.58%和73.83%±1.49%,细胞SDH活性吸光度值分别为0.49±0.064,0.444±0.073,0.394±0.039,0.354±0.082和0.339±0.053。该玻璃化冻存方法对长期冻存羊软骨细胞具有一定的实际应用意义。

促卵泡刺激素对小鼠卵巢玻璃化冻存的抗凋亡作用

目的:观察小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)在小鼠卵巢组织玻璃化冻存过程中的抗凋亡作用。方法:将4周龄C57BL/6J雌性小鼠卵巢组织,分为新鲜对照组(CG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0. 3 IU/ml FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH),玻璃化冻存条件为小鼠卵巢入培养液在37℃二氧化碳培养箱培养60 min,接着入1.5 mol/L乙二醇中预渗透平衡8 min,再移入EG5.5-30玻璃化液渗透平衡3.5 min,之后投入-196℃的液氮罐中保存1 d,全过程在22～24℃下进行。每组20枚卵巢,10枚进行HE染色后的正常卵泡百分比计数,10枚进行免疫组织化学法观察。结果:与对照组(CG)比较,玻璃化冻存对照组(VCG)正常卵泡百分比显著降低,active caspase-3的表达量显著升高(P<0.05);与玻璃化冻存对照组(VCG)比较,0.3 IU/ml FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH)组的正常卵泡百分比明显升高,active caspase-3的表达量显著降低(P<0.05)。结论:小鼠卵巢玻璃化冻存全程添加FSH干预可有效抵抗凋亡执行蛋白active caspase-3的表达,有利于卵巢组织形态结构的保护。

小鼠卵巢玻璃化冻存过程中FSH干预对VEGF及VEGFR-2表达的影响

目的通过在玻璃化冻存不同时段给予小鼠卵巢组织重组人促卵泡刺激素(rFSH)干预,观察rFSH对VEGF以及VEGFR-2表达的影响,探索卵巢玻璃化冻存过程中最佳的FSH保护途径。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0.3IU.mL-1FSH干预玻璃化冻存组,包括全程添加FSH组(OG-FSH)、冻存前添加FSH组(BG-FSH)以及冻存后添加FSH组(AG-FSH)。通过形态学技术观察正常卵泡百分比;采用免疫组织化学技术观察卵巢不同细胞VEGF以及VEGFR-2的表达;通过Western-blot方法观察并分析不同玻璃化冻存时段的FSH干预对卵巢VEGF以及VEGFR-2蛋白表达量的影响。结果正常卵泡百分比、VEGF及VEGFR免疫组织化学和Western-blot检测结果组间比较差异均有统计学意义。其中,OG-FSH组各项检测指标均高于其他各组(P<0.05),且BG-FSH、AG-FSH组与FCG相似,高于VCG组(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH干预有利于提高正常卵泡数,以及VEGF、VEGFR-2蛋白的表达。

新型玻璃化冻存技术在活肿瘤组织样本库建设中的应用

背景:玻璃化冻存是一种新型的低温保存技术,在临床活肿瘤组织样本库的建设中具有潜在的应用价值。目的:探讨新型玻璃化冻存技术的有效性以及在活肿瘤穿刺组织样本库建设中的可行性。方法:将新鲜直肠癌肝转移活检组织样本随机分为2组,实验组作玻璃化冻存处理,对照组不作处理。取部分复苏后活检组织和部分新鲜活检组织分别接种于小鼠背部皮下,建立人源化移植瘤模型。对比观察活检肿瘤组织冻存前后生物学活性和组织学特征的变化。Calcein-AM活细胞染色和Hoechst33342染色反映细胞活性变化,Ki67标记免疫组织化学及苏木精-伊红染色反映组织的增殖能力和形态学特征变化。初步收集105例直肠癌肝转移活检组织并作玻璃化冻存,建立活性肿瘤穿刺组织生物样本库。结果与结论:直肠癌肝转移活检组织在玻璃化冻存前后未发生显著的生物学活性和形态学特征改变(P>0.05),说明新型玻璃化冻存技术可有效冻存活性穿刺肿瘤组织,并对生物样本库的建设具有实际应用价值。

小鼠卵巢玻璃化冻存后异体移植对卵巢衰竭模型鼠卵巢功能的影响

目的研究新鲜与玻璃化冻存幼鼠卵巢异体异位移植对卵巢早衰(POF)小鼠卵巢储备功能的影响。方法以正常小鼠为对照组,使用一次性环磷酰胺150 mg/kg腹腔注射,白消安20 mg/kg皮下注射,建立小鼠卵巢早衰模型,于造模30 d后进行幼鼠新鲜或玻璃化冻存卵巢的肾被膜下移植。通过对移植后30 d各组卵巢组织常规HE染色、血清促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、抑制素B(INHB)、抗苗勒管激素(AMH)变化,观察卵巢玻璃化冻存后异体移植对化学性卵巢功能损伤卵泡储备功能有无挽救作用。结果无论是损伤模型组还是损伤后卵巢移植组,血清FSH、LH浓度明显高于正常对照组(P<0.05),AMH、INHB浓度明显低于正常对照组(P<0.05)。但卵巢移植组与模型对照组比较,各血清激素指标均有所改善,尤其是玻璃化冻存卵巢移植组,血清FSH、LH浓度明显降低(P<0.05),AMH、INHB上升。结论新鲜与玻璃化冻存幼鼠卵巢异体异位移植可以有效改善POF小鼠卵巢功能。

玻璃化冻存对斑马鱼卵母细胞的影响

采用比色法测定了在不同玻璃化冻存液中冻存1、2、4、8d时斑马鱼卵母细胞中谷胱甘肽含量和三磷酸腺苷酶的活性,以研究玻璃化冻存对卵母细胞谷胱甘肽含量和线粒体三磷酸腺苷酶活性的影响。试验结果显示,V4组斑马鱼(玻璃化液组分是:1.5mol/L甲醇、6.0mol/L乙二醇、0.25mol/L蔗糖)卵母细胞冻存1、2、4、8d后存活率最高[分别为(48.89±2.58)%、(39.35±1.34)%、(24.18±2.32)%和(14.56±1.64)%],显著高于其他组。经玻璃化冻存后,斑马鱼卵母细胞谷胱甘肽含量和线粒体三磷酸腺苷酶活性均随冻存天数的增加而显著下降(P<0.05)。V4组的谷胱甘肽含量[(13.37±0.59)mg/g]和线粒体三磷酸腺苷酶活性较高,线粒体Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶[(3.823±0.144)U/mg]、Mg^(2+)-三磷酸腺苷酶[(4.503±0.144)U/mg]和Na^+/K^+-三磷酸腺苷酶[(7.520±0.198)U/mg]活性最高。各组细胞的活性随着冻存天数的增加而逐渐下降。试验结果表明,玻璃化冻存不能完全避免低温和冷冻保护剂的毒性和对卵母细胞的损伤。

玻璃化冻存对胚胎神经细胞活性及脊髓移植的影响

采用玻璃化冻存技术对大鼠胚胎神经细胞进行深低温保存，在冻存１ｄ、１０ｄ、２０ｄ和４０ｄ后，３８℃水浴快速复温，离心洗脱冷冻保护剂，检测胚胎神经细胞的活性与功能，并移植于脊髓损伤大鼠．实验结果表明：玻璃化冻存４０ｄ的胚胎神经细胞，存活率为７６．４±８．３％，膜完整性为冻存前的６９．４±７．８％．细胞活力虽有下降，但仍可维持较高水平．培养１周的部分神经元建立突触联系。

小鼠卵巢玻璃化冻存不同时段FSH干预对Cx43表达的影响

目的通过在玻璃化冻存不同阶段给予小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)干预,观察FSH对缝隙连接蛋白Connexin-43(Cx43)表达的影响,从而寻找最佳的FSH干预途径。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组(CG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0.3 IU/mL FSH干预玻璃化冻存组,包括全程添加FSH组(OG-FSH)、冻存前添加FSH组(FG-FSH)以及冻存后添加FSH组(LG-FSH)。通过形态学、免疫组织化学技术及Western-blot技术观察并分析各组卵巢组织Cx43蛋白表达情况。结果正常卵泡百分比为玻璃化冻存数量最低,全称FSH干预玻璃化冻存组最高(P<0.05),全程添加FSH组(OG-FSH)最高,而其他组间正常卵泡百分比间的比较差异无统计学意义。各组间Cx43蛋白表达量从高到低,依次为全程添加FSH组(OG-FSH)、冻存前添加FSH组(FG-FSH)、冻存后添加FSH组(LG-FSH)、新鲜对照组(CG)、玻璃化冻存对照组(VCG),且差异有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH更有利于卵巢组织形态结构的保持以及Cx43蛋白的表达。

玻璃化冻存骨髓基质干细胞的实验研究

目的:骨髓基质干细胞(BMSCs)是构建组织工程化骨主要的种子细胞,实现BMSCs的深低温保存对骨组织工程具有重要意义。目前,玻璃化冻存是最有发展前景的冻存方法,因此希望通过改进玻璃化液和预处理条件来提高BMSCs的玻璃化冻存效果。方法:采用不同组成及浓度的玻璃化液在不同的预处理条件下对第2(P2)代成骨诱导的犬骨髓基质干细胞(cBMSCs)进行玻璃化冻存实验,通过复苏后的细胞存活率来选择一种理想的玻璃化液及适合的预处理条件,并在此基础上再与常规冻存的实验结果进行比较,同时考虑冻存过程对细胞成骨活性的影响。结果:将VS226作为玻璃化液,在0℃/5min的预处理条件下玻璃化冻存P2代成骨诱导的cBMSCs,与常规冻存后的细胞存活率相比无统计学差异,且冻存过程对此细胞的成骨能力没有影响。结论:采用VS226来玻璃化冻存BMSCs,可实现为骨组织工程提供大量种子细胞的目的。

胎儿卵巢组织玻璃化冻存效果的研究

目的探讨玻璃化冻存法对胎儿卵巢组织形态和功能的保存效果。方法采用改良EG5.5/30玻璃化液冻存胎儿卵巢皮质片,解冻后观察卵巢组织学变化,卵巢皮质片异种异位移植后,观察受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况。结果实验组与新鲜培养后移植组、添加抗氧化剂培养后移植组相比动情周期恢复率差异无统计学意义(P>0.05),但高于新鲜移植组(P<0.005);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于两种培养组(P<0.05);在卵泡计数上,实验组每高倍视野的卵泡计数明显高于新鲜移植组(P<0.005),与培养后移植组间的差异无统计学意义(P>0.05)。移植后18周,组织学观察见大量窦卵泡,而培养组仅偶见窦卵泡。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织,且不影响卵泡继续发育的潜能。

小鼠卵巢玻璃化冻存全程添加FSH、FSH+LH对Cx43表达的影响

目的通过在玻璃化冻存全程给予小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)、FSH和促黄体生成素(LH)共同干预,观察FSH及FSH+LH干预对冻存卵巢卵泡缝隙连接蛋白(connexin-43,Cx43)表达的影响,从而判断最佳的激素保护方法。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组(CG),玻璃化冻存对照组(VCG),0.3IU·m L^(-1)FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH),以及0.15IU·m L^(-1)FSH+0.15IU·m L^(-1)LH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH+LH)。通过免疫组织化学法、Western blot技术及荧光定量PCR检测,观察并分析各组卵巢组织Cx43蛋白表达量。结果免疫组织化学及Western blot检测结果表明Cx43蛋白表达量在OG-FSH+LH组最高,其次为OG-FSH组、CG组及VCG组(P<0.05),各组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05);荧光定量PCR检测结果显示Cx43mRNA表达量从高到低依次为OG-FSH+LH组、OG-FSH组、CG组及VCG组(P<0.05),且各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH+LH的干预方式更有利于冻融卵巢组织缝隙连接蛋白Cx43蛋白的表达。

超低温慢速冻存与玻璃化冻存对大鼠骨髓细胞DNA合成功能的影响

目的 :研究超低温慢速冻存和玻璃化冻存对大鼠骨髓细胞的DNA合成功能的影响。方法 :采用3H TdR掺入的方法对慢速和玻璃化冻存后的大鼠骨髓细胞DAN合成功能进行比较。结果 :慢速冻存 1d、5d、10d、2 0d与新鲜对照相比 ,在DAN合成功能上差异无显著性 ;而玻璃化冻存组与慢速冻存组相比 ,短期差异无显著性 ,10d后 ,每分钟脉冲数 (cpm)值显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :常规慢速冻存后的骨髓细胞损伤较小 ,DNA合成水平较高 ;

不同冷冻载体对小鼠卵巢组织玻璃化冻存的影响

目的研究不同冷冻载体对小鼠卵巢组织玻璃化冻存的影响.方法将9～12周龄小鼠的卵巢组织取出,在冷冻液中平衡后,分别以闭合麦管、开放麦管与冷冻环为冷冻载体快速深低温冻存,解冻后行自体双肾被膜下移植,观察动情周期、移植21 d后取存活移植物固定,观察单位高倍视野下卵泡数、测定小鼠血清雌激素水平,对比冻存效果.结果移植后各组均有移植物存活,移植物内可见各级处于不同发育阶段的卵泡.闭合麦管、开放麦管与冷冻环组的移植物存活率分别为78.5%、78.5%、84.6%;单位高倍镜下的卵泡数分别为4.0±0.8、4.5±0.7、4.6±0.9;小鼠血清雌激素水平分别为(10.4±0.8)pg/mL、(11.0±1.6)pg/mL、(12.5±1.1)pg/mL.其中,冷冻环组在移植物存活率及小鼠血清雌激素水平与闭合麦管组相比存在显著性差异.结论采用冷冻环做载体能明显提高冻融移植后卵巢组织的存活率与雌激素分泌功能,明显提高对小鼠卵巢组织的保存效果.

小鼠卵巢玻璃化冻存过程中FSH干预对卵泡形态及整合素αvβ5表达的影响

目的观察促卵泡刺激素(FSH)对整合素αvβ5(αvβ5 Integrin)表达的影响,以便提供FSH干预可提高卵巢玻璃化冻存效率的有关依据。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为:新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻融对照组(VCG)、0.3 IU·mL-1FSH干预玻璃化冻融组(FSH-VG),通过形态学、免疫组织化学技术观察并分析各组正常卵泡百分比及卵巢组织整合素αvβ5蛋白表达情况。结果正常卵泡百分比、αvβ5蛋白表达为FSH-VG最高,与VCG比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠卵巢玻璃化冻存中的FSH干预有助于卵泡结构的维持及整合素αvβ5蛋白的表达。

促卵泡刺激素干预改善绵羊卵巢组织玻璃化冻存后异种移植的效果研究

背景:卵巢皮质片移植是无血管吻合移植,因此,提高卵巢组织对冻存-解冻和移植后缺血的耐受力是提高冻存后移植物卵泡存活和延长功能寿命的关键环节。目的:观察促卵泡刺激素在玻璃化冻存过程中对绵羊卵巢组织形态和功能的保存效果,为成人卵巢组织的冻存提供技术方法。方法:BALB/c品系雌性裸鼠随机分为3组。均行羊卵巢皮质片裸鼠异位移植:①新鲜移植对照组,取材后即移植。②玻璃化冻存移植组,采用玻璃化冻存解冻后移植,所用液体均未添加促卵泡刺激素。③添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组,采用冷冻液、解冻液和培养液均添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存后移植。移植后检测受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡数和发育状况,于移植后4周取移植卵巢进行组织学观察、并行血清雌二醇水平分析。结果与结论:含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比动情周期恢复率、每高倍视野卵泡计数差异均无显著性意义(P>0.05),卵泡计数高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05)。移植后4周,含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组组织学观察见卵泡发育,未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组仅偶见原始卵泡。含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比血清雌二醇水平差异无显著性意义(P>0.05),显著高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05)。结果提示,在玻璃化液中加入促卵泡刺激素可提高冻存绵羊卵巢组织移植后卵泡存活率。

脐血干细胞玻璃化冻存技术研究

以羟乙基淀粉(HES)法分离所得的脐血干细胞作为材料,进行玻璃化超低温保存,探索和建立最合适的保护剂浓度和预处理时间,以期在细胞冻融后获得较高的活率.采用系列体积分数的玻璃化冷冻保护剂(PVS2)预处理不同的时间,样品在完全浓度的玻璃化保护剂中直接存入液氮.冻融后的细胞经过噻唑蓝(MTT)法和FDA PI双荧光染色法检测存活率,获得预处理过程的优化条件:体积分数为60%的PVS2,预处理15min,FDA PI值为46.43.用海藻糖取代原保护剂中的蔗糖,与同样条件下含蔗糖保护剂处理的细胞相比较,FDA PI最大值高于后者20.25%,CD34+回收率最大值高于后者25.64%,表明含海藻糖的保护剂在该冻存技术中的保护效果明显优于含蔗糖的保仿剂.

胎牛血清联合FSH对玻璃化冻存小鼠卵巢的保护作用

目的观察玻璃化冻存液中联合添加促卵泡刺激素(follicle-stimulatiny hormore,FSH)与胎牛血清对卵巢的保护作用,为优化卵巢玻璃化冷冻保存技术提供科学依据。方法将3周龄雌性ICR小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、空白对照玻璃化冻存组(B-VCG)、FSH干预玻璃化冻存组(FSH-VCG)、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)干预玻璃化冻存组(FBS-VCG)、FBS联合FSH干预玻璃化冻存组(FBS+FSH-VCG)5组,采用卵泡计数方法计算正常卵泡率,采用免疫组织化学方法及蛋白免疫印迹技术观察凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 FBS+FSH-VCG组的正常卵泡百分比高于B-VCG组(P=0.012),FBS+FSHVCG组和FBS-VCG(P=0.751)和FSH-VCG(P=0.693)组比较差异无统计学意义(P>0.05);与FCG组相比,玻璃化冻存各组卵巢组织内的凋亡蛋白Bax表达均升高(P均<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达均减少(P均<0.05);与B-VCG组比较,FBS-VCG、FSH-VCG和FBS+FSH-VCG组的Bcl-2蛋白表达较高(P均<0.05),Bax蛋白表达率较低(P均<0.05);在FBS+FSH-VCG组中,Bcl-2/Bax比值大于1,Bcl-2表达占优势,与B-VCG组相比差异有统计学意义(P=0.034),FBS+FSH-VCG组与FCG组Bcl-2表达相似。结论小鼠卵巢组织玻璃化冻存过程中胎牛血清和FSH的添加可以减少对卵巢组织的冷冻损伤,提高正常卵泡百分比,二者联合添加对卵巢的保护效果最好。